Материал: vse_metody_MIKROB

Изучение характера роста на щелочном агаре _______________________. Из части подозрительной колонии готовят мазки с окраской по Граму и производят постановку ориентировочной реакции агглютинации на стекле с О1холерной и О-139 диагностическими сыворотками. Оставшуюся часть подозрительной колонии пересевают на скошенный щелочной агар с целью выделения чистой культуры. Посевы ставят в термостат при температуре 370С на 24 часа.

V этап исследования.

Учет характера роста на скошенном щелочном агаре _________________. Идентификация выделенной культуры:

а) по антигенным признакам – постановка и учет реакции агглютинации на стекле с О1-холерной сывороткой и сыворотками Инаба и Огава

_____________. Постановка развернутой реакции агглютинации с О1-холерной сывороткой и сывороткой Ина-

ба____________________________________________________ ;

б) по биохимическим признакам – посев на среды с сахарозой, маннозой,

арабинозой;

в) дифференциацию V.cholerae от V.El-Tor проводят по чувствительности к холерным фагам и полимиксину. Для выбора правильной антибиотикотерапии определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам диско-

диффузионным методом. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

VI этап исследования. Учет результатов.

3. Учет определения чувствительности возбудителя к антибиотикам.

10

4. Вывод (определение вида выделенной культуры, учет антибиотико-

граммы).

3. Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с предполагаемым диагнозом «пищевая токсикоинфекция».

I этап исследования.

Посев исследуемого материала на среды Эндо, кровяной агар, ЖСА. Посе-

вы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

IIэтап исследования.

1.Изучение характера роста на средах

Эндо __________________________________________________________,

кровяном агаре _________________________________________________,

ЖСА __________________________________________________________. 2. Приготовление мазков из выросших колоний, окраска по Граму, микро-

скопия ____________________________________________________________.

IIIэтап исследования.

1.Определение чистоты выделенной культуры _____________________.

2.Идентификация выделенной культуры по биохимическим свойствам с помощью энтеротест-систем. 3. Определение антибиотикочувствительности диско-диффузионным методом.

IV этап исследования. Учет результатов.

Учет антибиотикограммы, заключение о виде возбудителя.

11

Занятие №25

Тема. Микробиологическая характеристика дифтерии, туберкулеза, проказы.

Цель занятия. Изучить характеристику возбудителей дифтерии, туберкулеза, про-

казы, микробиологическую диагностику вызываемых ими заболева-

ний. Изучить схему бактериологического метода исследования при подозрении на дифтерию. Изучить препараты для специфической профилактики дифтерии и туберкулеза и специфического лечения дифтерии.

I.Теоретические знания:

1.Характеристика возбудителя дифтерии, микробиологическая диагностика, спе-

цифическая профилактика и лечение.

2.Характеристика возбудителей туберкулеза, микробиологическая диагностика и специфическая профилактика.

3.Характеристика возбудителя проказы, микробиологическая диагностика проказы.

II.Практические навыки:

1.Изучение схемы бактериологического исследования мазков со слизистой оболоч-

ки ротоглотки и носа больного при подозрении на дифтерию. Учет и интерпрета-

ция результатов исследования.

2.Световая микроскопия нативного препарата из мокроты больного туберкулезом,

окрашенного по Цилю-Нильсену.

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1.Характеристика возбудителя дифтерии, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и лечение.

Возбудитель дифтерии – Corynebacterium diphtheriаe.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные полиморфные палочки, спор, жгутиков не имеют, образуют микрокапсулу. В мазках располагаются в виде «растопыренных пальцев» или латинских букв V, X, Y. Имеют включения, представленные двумя полярно расположенными зернами волютина (полирибитилметафосфаты), которые выявляют окраской по Нейссеру.

Культуральные свойства: требовательны к питательным средам, растут на 5% кровяном и 10% сывороточном агаре. Образуют R-формы колоний: шероховатые, исчерченные, крошковидные, иногда с зонами гемолиза. На кровяно-

теллуритовом агаре образуют 3 типа колоний: gravis (крупные, сухие, черные,

шероховатые с радиальной исчерченностью и неровными краями), mitis (мелкие, гладкие, блестящие, черные, с ровными краями), intermedius (мелкие, сухие, черные колонии с более прозрачной периферией и неровными краями).

Рост C.diphtheriаe на кровяно-теллуритовом агаре.

2

Биохимические свойства: дифференциация C.diphtheriae от других видов коринебактерий основана на способности ферментировать глюкозу, сахарозу и наличии ферментов уреазы и цистиназы (табл. 1).

Факторы патогенности:

1.Факторы адгезии: микрокапсула и другие липидно-белковые вещества (обеспечивают прикрепление к клеткам эпителия верхних дыхательных путей);

2.Ферменты патогенности: гиалуронидаза, нейраминидаза;

3.Токсинопродукция: гистотоксин, гемолизин, дермонекротоксин (вызывает некроз клеток в месте размножения возбудителя).

Основной фактор патогенности – гистотоксин (экзотоксин). Нетоксигенные штаммы C.diphtheriae не вызывают развития заболевания.

Гистотоксин состоит из двух белковых фрагментов:

Фрагмент А представляет собой фермент, блокирующий фактор элонгации трансферазу-2, ответственную за удлинение полипептидной цепи на рибосоме, что приводит к подавлению синтеза клеточного белка и гибели клеток.

Фрагмент В взаимодействует с клеточными рецепторами, облегчая проникновение в клетку фрагмента А.

Токсинопродукция возбудителя дифтерии обусловлена одним из видов генетической изменчивости – лизогенной (фаговой) конверсией. Умеренный коринефаг содержит в своем геноме ген tox, кодирующий синтез гистотоксина. При интеграции ДНК умеренного фага с хромосомой дифтерийной палочки она становится токсигенной, что проявляется выработкой гистотоксина.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-капельный, реже контактный, алиментарный. Входные ворота инфекции: слизистые оболочки ротоглотки, носа, гортани,

глаз, половых органов, поврежденные кожные покровы и др.

Дифтерия, как инфекционный процесс, развивается по интоксикационному

механизму.

Патогенез: в месте внедрения возбудителя происходит его размножение и выделение гистотоксина, который обладает как местным, так и общим действием. На слизистых оболочках формируются пленчатые фибринозные налеты, прочно спаян-

3