Материал: vse_metody_MIKROB

Все предметы, которые были использованы при работе с микроорганизма-

ми (петли, пипетки, предметные стекла, питательные среды и др.), должны быть сразу же обеззаражены, либо переданы для автоклавирования.

Если разбита лабораторная посуда или разлит заразный материал, об этом надлежит немедленно сообщить преподавателю и провести обеззараживающие мероприятия.

Вконце работы необходимо:

-сдать весь материал;

-привести в порядок рабочее место;

-обработать руки дезинфицирующим раствором и вымыть с мылом.

3.Основные методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД в зависимости от объекта исследова-

ния подразделяют:

бактериоскопический метод используют для диагностики первичного сифилиса, острой мужской гонореи, туберкулеза, лепры, возвратного тифа;

вирусоскопический метод – обнаружение вирусов в исследуемом мате-

риале с помощью электронного микроскопа. При использовании светового микроскопа в материале от больного можно выявить характерные внутрикле-

точные включения, которые образуются в пораженных клетках при некоторых вирусных инфекциях. Диагностическое значение имеет обнаружение включе-

ний Бабеша-Негри при бешенстве, обнаружение гигантских клеток с внутри-

ядерными включениями при цитомегаловирусной инфекции. Такие клетки на-

поминают «совиный глаз».

6

Включениями при цитомегаловирусной инфекции («совиный глаз»)

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД в зависимости от объекта иссле-

дования подразделяют:

бактериологический метод – посев материала от больного с подозрение на бактериальную инфекцию на искусственные питательные среды с целью об-

наружения и идентификации возбудителя. Этот метод используют для диагно-

стики холеры, брюшного тифа, дизентерии, туберкулеза и др.;

вирусологический метод – заражение материалом от больного с подозре-

нием на вирусную инфекцию куриного эмбриона (для диагностики гриппа),

культур клеток (для диагностики аденовирусной инфекции, полиомиелита), ла-

бораторного животного (для диагностики клещевого энцефалита, бешенства).

Затем проводят идентификацию вируса;

микологический метод – посев материала от больного с подозрением на грибковую инфекцию на соответствующие питательные среды с последующей идентификацией плесневых и дрожжеподобных грибов.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД (от лат. serum – сыворотка и logos – уче-

ние) – определение в сыворотке крови больного антител к конкретному возбу-

дителю инфекционного заболевания. Используют для диагностики бруцеллеза,

туляремии, ВИЧ-инфекции др.

7

АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД – определение состояния повышен-

ной чувствительности (аллергии) макроорганизма к микробным аллергенам.

Для диагностики инфекционных заболеваний используют следующие кожно-аллергические пробы:

-при туберкулезе – проба Манту с туберкулином;

-при бруцеллезе – проба Бюрне с бруцеллином;

-при туляремии – проба с тулярином;

-при сибирской язве – проба с антраксином.

МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ:

Полимеразная цепная реакция (ПЦР). С помощью ПЦР в исследуемом материале определяют не сам микроорганизм, а специфический участок его нуклеиновой кислоты (НК). Этот фрагмент становится матрицей для много-

кратного увеличения его копий (амплификация), что впоследствии дает воз-

можность визуально учесть реакцию. Для проведения ПЦР необходимы ДНК-

полимераза или РНК-полимераза и специфический праймер. Праймеры – это синтетические олигонуклеотиды, комплементарные фрагменту НК определяе-

мого микроорганизма. ПЦР – чрезвычайно чувствительный метод, т.к. позволя-

ет обнаружить небольшое количество микробной НК в исследуемом материале.

В настоящее время этот метод широко применяется для диагностики ВИЧ-

инфекции, вирусных гепатитов, хламидийной инфекции и др.;

Метагеномные исследования. Метагеномика – изучает генетический материал (метагеном) сообществ микроорганизмов в совокупности. Цель мета-

геномики – получение и анализ всех геномов для установления видового соста-

ва и метаболических взаимосвязей в микробном сообществе. Определение ви-

дового состава основанного на анализе нуклеотидных последовательностей хромосомных генов, кодирующих 16S p РНК. Эта РНК входит в состав мень-

шей субъединицы бактериальной рибосомы, а гены, которые ее кодируют,

практически не подвергаются изменениям в ходе эволюции (т.е. являются в вы-

8

сокой степени консервативными). Такой метод генетической идентификации позволяет определить фенотипическую принадлежность микроорганизмов, яв-

ляется основой геносистематики и позволяет определить степень родства орга-

низмов. В настоящее время метод широко используется как для изучения мик-

робных сообществ, населяющих человеческий организм (микробиом), так и для диагностики различных видов патологии.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД – обнаружение возбудителя путем зараже-

ния материалом от больного лабораторных животных. Используют для диагно-

стики ботулизма, бешенства. Кроме того, этот метод применяют для создания экспериментальных моделей инфекционных заболеваний.

4.Систематика и номенклатура микробов.

Вбиологической классификации живых организмов, в том числе микро-

бов, самый верхний (крупный) уровень группировки организмов в системе – это домен. Он включает в себя одно или несколько царств. Все царства объеди-

нены в четыре домена: бактерии, археи, вирусы и эукариоты. К домену «Bacteria» относят царство бактерий, к домену «Archaea» - царство архебактерий (са-

мые древние, примитивные бактерии), к домену «Vira» - царство вирусов. По-

следний домен «Eucarya» (эукариоты) включает царство Protozoa (простейшие)

и Eumycota (грибы).

ДОМЕНЫ:

I. Bacteria (царство бактерий);

II. Archaea (царство архебактерий);

III. Vira (царство вирусов);

IV. Eucarya (царство простейших и грибов).

Микроорганизмы (бактерии, вирусы, грибы, одноклеточные простейшие)

систематизированы по их сходству, различиям и взаимоотношениям между со-

9

бой. В основе систематики лежит филогенетический принцип, основанный на генотипических, а, следовательно, и фенотипических различиях, сформировав-

шихся в процессе эволюции. Систематика включает три части: классификацию,

таксономию (расположение, порядок) и идентификацию. Основой идентифика-

ции микроорганизмов являются их морфологические, физиологические, биохи-

мические, молекулярно-биологические и генотипические свойства. Все это по-

зволяет разделять существующие царства на типы, классы, порядки, семейства,

роды и виды.

5. Размеры и основные формы бактерий.

По размеру бактерии подразделяют:

мелкие (1-3 мкм);

средние (3-6 мкм);

крупные (> 6 мкм).

Основные формы бактерий:

1.Шаровидные – кокки.

2.Палочковидные.

3.Извитые.

КОККИ (в зависимости от взаиморасположения в мазке кокки подразде-

ляют):

микрококки (от греч. micros – малый) – в мазке располагаются одиночно;

диплококки (от греч. diplos – двойной) – в мазке располагаются попарно.

Диплококки могут быть:

- бобовидной формы:

Neisseria gonorrhoeae – возбудитель гонореи;

10