Материал: vse_metody_MIKROB

Интегративная: не приводит к гибели клеток. При этой форме инфекции

вирусная ДНК встраивается в геном клетки-хозяина и в последующем при де-

лении передается дочерним клеткам.

В зависимости от типа вирусной нуклеиновой кислоты различают два

варианта интегративной инфекции:

для ДНК-содержащих вирусов: происходит интеграция ДНК вируса с ДНК клетки-хозяина;

для РНК-содержащих вирусов: на вирусной РНК под действием фермента

«РНК-зависимая ДНК-полимераза» (обратная транскриптаза или ревертаза)

синтезируется ДНК. Затем образовавшаяся вирусная ДНК интегрируется с ДНК клетки-хозяина.

В результате интегративной инфекции возможно превращение (трансфор-

мация) нормальных клеток в опухолевые. Интегративная инфекция характерна для онкогенных (опухолевых) вирусов и умеренных бактериофагов.

5.Вирусный онкогенез. Механизмы. Основные онкогенные вирусы, вызы-

вающие опухоли у человека.

В 50-х годах XX столетия Л.А. Зильбер сформули-

ровал вирусо-генетическую теорию, согласно кото-

рой вирусная ДНК интегрирует с ДНК клетки-

хозяина, что приводит к трансформации нормаль-

ных клеток в опухолевые.

Л.А. Зильбер (советский иммунолог и вирусолог)

Механизм интегративной инфекции для РНК-содержащих онкогенных ви-

русов был выяснен намного позже, после открытия фермента «обратная транс-

криптаза» (см. выше). Последующие исследования выявили новые данные о роли ДНК- и РНК-содержащих вирусов в онкогенезе.

8

В геноме нормальных клеток существуют клеточные онкогены (протоон-

когены). Они находятся в неактивном состоянии и кодируют белки, стимули-

рующие размножение клеток во время эмбрионального развития, а также кон-

тролирующие рост и размножение клеток во взрослом состоянии, когда в этом есть необходимость.

Онкогенез для ДНК-содержащих вирусов

Некоторые ДНК-содержащие вирусы имеют онкогены, сходные с челове-

ческими. Функции вирусных онкогенов разнообразны и при интеграции ДНК вируса в геном клетки человека они могут нарушать синтез нормальных факто-

ров размножения клетки на разных этапах. Итогом таких взаимодействий явля-

ется избыточное размножение клетки и деление ее в незрелом состоянии.

Так формируется опухоль.

Онкогенез для РНК-содержащих вирусов

РНК-содержащие вирусы, способны индуцировать онкогенез, выступая в роли канцерогенных факторов. На вирусной РНК с помощью собственного фермента «РНК-зависимая ДНК-полимераза» (обратная транскриптаза) синте-

зируются ДНК. Затем вирус встраивает в геном клетки свою ДНК-копию рядом с клеточным онкогеном и вызывает повышение его активности. Это

приводит к злокачественной трансформации клетки.

Основные онкогенные вирусы, вызывающие опухоли у человека.

ДНК-содержащие:

-семейство Papillomaviridae: вирусы папилломы человека – вызывают рак кожи, рак шейки матки;

-семейство Herpesviridae: вирус простого герпеса II типа – вызывает рак шейки матки, рак простаты; вирус Эпштейна-Барр – вызывает рак носоглот-

ки (назофарингеальный рак) и лимфому Беркитта (лимфоидную опухоль верхней челюсти); герпесвирус 8 типа – вызывает саркому Капоши;

- семейство Hepadnaviridae: вирус гепатита В – вызывает первичный рак пе-

чени.

9

РНК-содержащие:

-семейство Retroviridae: лимфотропные вирусы – вызывают Т-клеточные лимфомы, Т-клеточный лейкоз и др.;

-вирус гепатита С – вызывает рак печени.

6.Вироиды и инфекционные прионы.

Кроме типичных вирусов, существуют необычные инфекционные агенты:

вироиды и прионы.

Вироиды – в отличие от вирусов, состоят только из молекулы одноцепо-

чечной кольцевой РНК, обладающей инфекционными свойствами. Известно более 10 различных вироидов, вызывающих инфекционные заболевания у рас-

тений.

Инфекционные (патологические) прионы (от англ. рroteinacеous infections particle – белковая инфекционная частица) – белковые инфекционные агенты, приводящие к развитию летальных неврологических заболеваний – губчатых энцефалопатий.

Гайдушек Даниел Карлтон – американский педи-

атр и вирусолог раскрыл инфекционную природу неврологического заболевания куру, лауреат Нобе-

левской премии по физиологии и медицине 1976 г.

«за открытия, касающиеся новых механизмов про-

исхождения и распространения инфекционных за-

болеваний».

Гайдушек Д.К.

У человека и млекопитающих в клетках ЦНС имеются нормальные при-

оновые белки. Патогенез поражений обусловлен способностью инфекционного прионового белка вызывать мутацию гена, кодирующего синтез нормального прионового белка. В результате в нейронах синтезируется инфекционный (па-

тологический) прионовый белок, отличающийся от нормального приона нару-

10

шенной пространственной конфигурацией молекулы (α-спираль нормального белка заменяется на β-конформацию). Формируются крупные конгломераты инфекционных прионов, что приводит к губкообразному перерождению серого и белого вещества головного мозга и развитию медленной летальной инфекции.

Прионы высоко резистентны ко многим факторам их инактивации. Явля-

ясь нормальными белками человека, они не вызывают защитных реакций (вос-

паление, выработка антител и др.).

7. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.

Молекулярно-биологический: обнаружение специфических участков ви-

русной нуклеиновой кислоты с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Теоретически данный метод позволяет обнаружить участок одной молекулы вирусной ДНК или РНК в любом образце биологического материала. Принцип ПЦР: многократное образование (гибридизация) копий специфического участка нуклеиновой кислоты вируса с последующей их идентификацией методом электрофореза.

Определение вирусных антигенов (экспресс-диагностика): вирусные ан-

тигены определяют в крови и других биологических жидкостях с помощью се-

рологических реакций, чаще это РИФ и ИФА (см. учебно-методическое посо-

бие «Учение об инфекции и иммунитете. Основы иммунологии»).

Вирусологический: заражение исследуемым материалом биологической модели (куриный эмбрион, культура клеток, организм животного) с последую-

щей индикацией, а затем идентификацией обнаруженных вирусов.

Для размножения вирусов в курином эмбрионе исследуемый материал вводят в аллантоисную или амниотическую полость (культивируют вирусы гриппа, эпидемического паротита и др.).

Для размножения вирусов в культуре клеток исследуемым материалом заражают живые клетки различного происхождения: эмбриональные, нормаль-

ных тканей, опухолевые (культивируют вирусы полиомиелита, аденовирусы и др.).

11

Для размножения вирусов в организме лабораторных животных исполь-

зуют белых мышей (культивируют вирусы бешенства, клещевого энцефалита).

Помимо диагностики вирусных инфекций, культивирование вирусов про-

водят с целью получения вакцинных и диагностических препаратов.

Вирусоскопический: обнаружение в исследуемом материале включений,

образующихся в пораженных клетках при вирусной инфекции. Включения представляют собой скопления вирусов и продуктов реакции клетки на вирус-

ную инфекцию. Включения могут располагаться в цитоплазме или в ядре клет-

ки-хозяина. Чаще внутрицитоплазматические включения образуют РНК-

содержащие вирусы (например, включения Бабеша-Негри при бешенстве).

Внутриядерная локализация включений в большей степени характерна для ДНК-содержащих вирусов (например, включения при цитомегаловирусной ин-

фекции). В мазках видны гигантские клетки с внутриядерными включениями вирусов, напоминающие «совиный глаз» (рисунок 4).

Рисунок 4 – Включения при цитомегаловирусной инфекции (клетки «со-

виный глаз»)

Серологический: определение противовирусных антител в сыворотке крови больного. Особенностью серологического метода диагностики вирусных инфекций является исследование парных проб сыворотки. Первую пробу сыво-

ротки берут у больного в начале заболевания, а вторую – через 10-14 дней. О

вирусной инфекции свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра ан-

12