Материал: vse_metody_MIKROB

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Выделение чистой культуры аэробов.

I этап исследования. Посев смеси бактерий (S.aureus+E.coli) на пластин-

чатый МПА в чашке Петри петлей секторами.

Этапы посева:

а) на дне чашки Петри с МПА карандашом по стеклу сделать надпись: но-

мер стола, номер группы, факультет;

б) прокалить петлю, над спиртовкой открыть пробирку, обжечь ее края,

внести петлю в пробирку и остудить ее о стенки пробирки. Забрать пет-

лей исследуемый материал. Закрыть пробирку над спиртовкой и поста-

вить в штатив;

в) взять чашку Петри, приоткрыть крышку и нанести петлей секторами ис-

следуемый материал на МПА, закрыть чашку, прожечь петлю;

г) посевы поставить в термостат при температуре 37°С на 24 часа.

15

Занятие №6

Тема. Рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробов.

Влияние физических и химических факторов на микроорганизмы. Методы сте-

рилизации. Дезинфекция. Асептика. Антисептика.

Цель занятия. Изучить рост и размножение бактерий, действие физических и химических факторов на микроорганизмы, методы стерилизации, дезинфекции и антисептики. Освоить второй этап бактериологического исследования по выделению чистой культуры аэробов.

I.Теоретические знания:

1.Рост и размножение бактерий.

2.Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких пита-

тельных средах.

3.Фазы развития бактериальной популяции в жидкой питательной среде.

4.Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы.

5.Виды дезинфекции. Химические вещества, используемые для дезинфекции.

6.Асептика. Антисептика. Химические вещества, используемые для антисептики.

II.Практические навыки и знания:

1.Проведение II этапа бактериологического метода исследования по выделе-

нию чистой культуры аэробов.

2.Действия медицинского работника при аварийных ситуациях (угроза зара-

жения ВИЧ).

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Рост и размножение бактерий.

Рост бактерий – это увеличение линейных размеров и массы микробной

клетки.

Размножение бактерий – это увеличение количества особей в популяции за счет поперечного деления, реже путем почкования.

Интервал времени, за который число клеток удваивается, называется време-

нем генерации (Т-генерации). Для большинства бактерий время генерации со-

ставляет 20-30 мин., у возбудителя туберкулеза – 24 часа.

Популяция бактерий – совокупность особей одного вида, сформировавшаяся в определенных условиях внешней среды.

2. Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких

питательных средах.

Популяция бактерий, развившаяся из одной микробной клетки на плотной питательной среде, называется колонией.

Культура бактерий – популяция одного вида микроорганизмов.

Для учета количества жизнеспособных клеток в культуре определяют число

колониеобразующих единиц в 1 мл материала (КОЕ/мл).

Колонии характеризуют по следующим признакам:

1)по размеру: мелкие - 1-2 мм; средние - 2-4 мм; крупные - более 4 мм;

2)по форме: круглые или неправильной формы;

3)по рельефу: выпуклые, уплощенные;

4)по характеру поверхности: гладкие или шероховатые;

5)по характеру краев: ровные, изрезанные, волнистые;

6)по оптическим свойствам: прозрачные, полупрозрачные, непрозрачные;

7)по цвету: бесцветные или пигментированные (золотистые, красные, сине-

зеленого цвета и др.);

8)по запаху, например, колонии синегнойной палочки имеют запах жасми-

2

на, фиалки, карамели;

9) по консистенции: сухие, влажные, слизистые.

Гладкие колонии с ровными краями обозначаются как «S»-колонии (англ. smooth – гладкие), шероховатые с изрезанными краями - «R»-колонии (англ. rough – шероховатые). Внешний вид колоний у некоторых бактерий настолько характерен, что может служить одним из дифференциальных признаков при их идентификации. Например, R-колонии возбудителя чумы (Yersinia pestis) срав-

нивают с «кружевными платочками», т.к. они имеют плотный центр и прозрач-

ные волнистые края, R-колонии возбудителя сибирской язвы (Bacillus anthracis)

напоминают «гриву льва».

Характер роста микроорганизмов в жидкой питательной среде зависит от

скорости деления и типа дыхания бактерий и может быть:

1)диффузно-мутящий (Staphylococcus aureus, Escherichia coli);

2)придонный или придонно-пристеночный (Streptococcus pyogenes);

3)поверхностно-пленчатый (Vibrio choleraе, Mycobacterium tuberculosis).

3

Рост микроорганизмов в жидкой питательной среде.

Некоторые виды возбудителей дают характерный тип роста в жидкой пита-

тельной среде. Например, Y.pestis образует на поверхности пленку со спускаю-

щимися вниз тяжами (нитями) - «чумные сталактиты»; B.anthracis образует придонный осадок в виде «комочка ваты».

3. Фазы развития бактериальной популяции в жидкой питательной среде.

I – лаг-фаза (от англ lag – отставать) – начальная фаза от момента посева бактерий до начала размножения. Бактерии адаптируются к новым условиям обитания.

II – экспоненциальная (логарифмическая) фаза. Характеризуется макси-

мальной скоростью деления клеток, которая зависит от вида бактерий.

III – стационарная фаза. Характеризуется равновесием между количеством погибающих и вновь образующихся клеток. В эту фазу количество живых бак-

терий в популяции достигает максимальной концентрации.

4