Материал: Тец руководство

нами из R.prowazekii и R.typhi. Сопоставить результаты и обосновать диагноз заболевания. 4. Учесть результаты РСК, поставленных для дифферен­циации первичного эпидемического сыпного тифа и рецидива (болезнь Брилля—Цинссера). Сделать за­ключение по результатам серодиагностики.

а Методические указания

• Микробиологическая диагностика возвратного тифа
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Основной метод лабора­торной диагностики возвратного тифа. У больного во время приступа болезни берут кровь и готовят препараты для микро­скопии. Мазки окрашивают фуксином, а препарат "толстая" капля — по методу Романовского—Гимзы. Borrelia recurrentis представляют собой тонкие изогнутые нити длиной 8—16 мкм с 4—12 завитками (рис. 17.1.1; на вклейке). В мазках они окрашиваются фуксином в красный цвет, в препарате "толс­тая" капля — в фиолетово-розовый. Кроме того, рекомендуется исследовать нативные препараты в темном поле.

Биопроба. Используют для дифференциальной диагностики эпидемического возвратного тифа от клещевого, к возбудите­лям которого чувствительны лабораторные животные. Кровью больных заражают морских свинок. Через 5—6 дней при поло­жительном результате (клещевой возвратный тиф) в крови животных появляется большое количество боррелий.

Серодиагностика имеет дополнительное значение, для выяв­ления антител применяют РСК, метод непрямой ИФ и другие реакции.

• Микробиологическая диагностика клещевого боррелиоза
Лайма

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты из пора­женных участков кожи, кровь, спинномозговая жидкость; ге­молимфа инфицированного клеща.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. На ранних стадиях забо­левания в биоптатах из пораженных участков кожи возбудитель может быть обнаружен методом серебрения. По морфологии В. burgdorferi не отличается от других представителей рода.

Бактериологическое исследование. В.burgdorferi культивируют на жидких и плотных питательных средах сложного состава (среда Келли и др.). Для идентификации возбудителя исполь­зуют биохимические и молекулярно-генетические методы (гель-электрофорез для анализа белков наружной мембраны, ДНК-гибридизацию, рестрикционный анализ ДНК).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Антигены возбудителя в био-птатах из пораженных участков кожи или гемолимфе инфици­рованного клеща могут быть обнаружены методом ИФ.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Для обнаружения антител в крови больно­го применяют методы непрямой ИФ и ИФА.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, аспират из высыпных элементов.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскогшческое исследование. Для обнаружения рик-кетсий в организме переносчика, органах зараженных живот­ных и культурах клеток готовят препараты, окрашивают их по методам Романовского—Гимзы, Здродовского или другими ме­тодами и микроскопируют. R.prowazekii полиморфны. В зави­симости от стадии инфекции, вида культуры в цитоплазме зараженных клеток встречаются различные морфологические типы риккетсий. Использование иммунофлюоресцентного ме­тода (см. ниже) облегчает обнаружение риккетсий.

Бактериологическое исследование. Материалом для выделе­ния возбудителей при всех видах риккетсиозов служит кровь, взятая у больного в раннем периоде лихорадки (схема 17.1.1). Первичное выделение риккетсий осуществляется путем зара­жения лабораторных животных (мышей, морских свинок и др.). Выбор зависит от вида возбудителя, поскольку лаборатор­ные животные различаются по чувствительности к риккетсиям разных видов. Для дальнейшего культивирования первичного изолята используют культуры клеток или куриные эмбрионы. Культивирование риккетсий производится только в специаль­ных лабораториях, требует соблюдения определенных правил безопасности и практически применяется редко.

Биопроба. Применяют для дифференциации возбудителей эндемических риккетсиозов от R.prowazekii. Для этого самцу морской свинки внутрибрюшинно вводят кровь больного. При большинстве эндемических риккетсиозов у животных развива­ется специфический периорхит, сопровождающийся накопле­нием риккетсий в мезотелии влагалищных оболочек яичка (положительный скротальный феномен).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Возбудитель может быть обна­ружен в аспирате из высыпных элементов, а также в цитоплаз­ме моноцитов периферической крови методом иммунофлюо-ресценции. Положительные результаты удается получить в 50 % случаев заболевания.

Биохимические и молекулярно-биологичес­кие исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбу­дителя с помощью метода "зондов" и ПЦР. В случае обнару­жения соответствующих молекул можно поставить предвари­тельный диагноз.

Серодиагностика. Является наиболее распространенным и доступным методом лабораторной диагностики риккетсиозов. Для обнаружения антител в крови больного применяют реак­ции агглютинации, РКС и РИГА, непрямой иммунофлюоре-сценции, ИФА и др. (см. схему 17.1.1, тему 10.4).

Реакция агглютинации применяется при серодиагностике всех риккетсиозов и характеризуется высокой специфичнос­тью. В отличие от РСК РИГА не позволяет провести внутри-групповую дифференциацию риккетсиозов. Однако РИГА мо­жет быть использована для определения фазы заболевания, поскольку гемагглютинирующие антитела накапливаются в вы­соком титре в ходе инфекционного процесса, титр их быстро падает в период реконвалесценции, а через 6 мес после выздо­ровления они исчезают. Использование РСК в сочетании с РИГА позволяет дифференцировать текущее заболевание от перенесенного в прошлом (анамнестического).

Серодиагностика позволяет дифференцировать первичный (эпидемический) сыпной тиф от рецидива сыпного тифа (бо­лезни Брилля—Цинссера) на основании особенностей иммун­ного ответа. При первичной инфекции образуются антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М, тогда как при рецидиве антитела представлены преимущественно иммуно­глобулинами класса G. Метод ИФА позволяет избирательно выявлять противомикробные IgM или IgG в сыворотке боль­ных.

• Микробиологическая диагностика эрлихиозов МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. В лейкоцитах периферичес­кой крови больных при окраске по методу Романовского— Гимзы могут быть обнаружены характерные гроздьевидные включения — морулы, напоминающие ягоды ежевики.

Бактериологическое исследование. Эрлихии культивируют путем заражения клеточных культур (первичные культуры мо­ноцитов собак, перевиваемые линии мышиных макрофагов, клетки HeLa, промиелоцитарные опухолевые клетки человека и др.). В зараженных клетках появляются характерные вклю­чения, которые выявляют при окраске по методу Романовско­го— Гимзы. Для идентификации используют иммунохимичес-кие и молекулярно-биологические методы (ПЦР, метод ДНК-зондов). Метод культивирования эрлихий редко применяют с диагностической целью по причине трудоемкости.

Экспресс-методы диагностики. Биохимические и моле­кулярно-биологические исследования. ДНК возбуди­теля может быть обнаружена непосредственно в крови и лей­коцитах больного с помощью метода "зондов" и ПЦР.

Серодиагностика. Антитела к антигенам эрлихий в сыворот­ке крови пациентов могут быть обнаружены с помощью метода непрямой ИФ (диагностический титр 1:40) и других серологи­ческих реакций. Необходимо помнить, что антитела в диагнос­тических титрах могут длительно сохраняться после выздоров­ления, поэтому для подтверждения диагноза применяют метод парных сывороток.

• Микробиологическая диагностика бартонеллезов

(см. тему 16.1 "Микробиологическая диагностика инфек­ций, вызванных Bartonella hensella")

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, биоптаты по­раженных органов, лимфатических узлов.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое, бактериологическое исследование, экс­пресс-методы диагностики см. тему 16.1 "Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных Bartonella hensella".

Серодиагностика. Антитела к антигенам бартонелл в сыво­ротке крови пациентов могут быть обнаружены с помощью ИФА, метода непрямой ИФ и других серологических реакций. Необходимо помнить, что антитела могут присутствовать в крови практически здоровых лиц, поэтому для подтверждения диагноза применяют метод парных сывороток. Для обнаруже­ния IgM используют метод непрямой ИФ.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Тест-системы для диагностики возвратного тифа и болезни Лайма методом ДНК-зондов.

Флюоресцирующие антитела для диагностики возвратного тифа и болезни Лайма методом ИФ.

Тест-системы для серодиагностики возвратного тифа и бо­лезни Лайма методом непрямой ИФ.

Тест-системы для диагностики эрлихиозов методом ДНК-зондов.

Флюоресцирующие антитела для диагностики эрлихиозов ме­тодом ИФ.

Тест-системы для серодиагностики эрлихиозов методом ИФА.

Тест-системы для серодиагностики эрлихиозов методом не­прямой ИФ.

Антибиотики: пенициллины, тетрациклины, хлорамфеникол, фторхинолоны, макролиды и др.