Материал: Тец руководство

Кожно-аллергическая проба. Для диагностики применяют внутрикожную и накожную пробы со специфическим аллерге­ном — тулярином. Пробы высокочувствительны и дают поло­жительные результаты у больных начиная с 3—5-го дня болез­ни. Положительные результаты регистрируются также у пере­болевших и вакцинированных, поэтому оценка реакции должна проводиться с осторожностью.

• Микробиологическая диагностика бруцеллеза МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование (схема 16.1.3). Для получе­ния гемокультуры 5—10 мл крови, взятой из локтевой вены больного, засевают в два флакона с 50—100 мл печеночного бульона. Один из них (для выделения культуры B.melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выде­ления первичной культуры B.abortus) — в атмосфере с 10 % СО2. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно, поэтому посевы выдерживают в термостате не менее месяца. В то же время рост лабораторных культур наблюдается через 1—2 сут. На агаре бруцеллы образуют бесцветные с перламут­ровым блеском колонии, в бульоне — помутнение и слизистый бсадок. В мазках, окрашенных по методу Грама, обнаружива­ются мелкие (от 0,3—0,5 до 1,5 мкм) грамотрицательные кок-ковидные или более удлиненные формы (рис. 16.1.3; на вклей­ке). Они неподвижны, спор не образуют.

Для быстрой идентификации бруцелл ставят РА со специ­фическими агглютинирующими сыворотками на стекле и оп­ределяют чувствительность к специфическому фагу. Все виды бруцелл не ферментируют углеводы. Их дифференцируют по образованию ^S, чувствительности к СОз, способности окра­шиваться анилиновыми красителями (основным фуксином и тионином) и другим признакам. Используют также молекуляр-но-биологические методы.

Биопроба. Применяют для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой или со­держащего небольшое количество бруцелл. Исследуемый мате­риал вводят морским свинкам или белым мышам подкожно в паховую область. Мышей вскрывают через 20 дней после за-

заболевания процент положительных серологических реак­ций (РА, РИГА и РСК) начинает снижаться и большее диа­гностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса, поэтому комплексный серо-аллерги­ческий метод является наиболее надежным в диагностике бруцеллеза.

Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне). На ладонную поверхность предплечья внутрикожно вводят 0,1 мл бруцелли-на. При наличии ГЗТ уже через 6—8 ч могут появиться гипе­ремия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 ч (см. рис. 10.4.1). Реакция обладает высокой чувстви­тельностью и появляется не только у больных и переболевших, но и у вакцинированных людей, в связи с чем ее диагностическая оценка должна производиться с осторожностью.

• Микробиологическая диагностика сибирской язвы

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: экссудат из очага по­ражения (сибиреязвенного карбункула), мокрота, фекалии, кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (схема 16.1.4). Изучение окрашенных по методу Грама мазков из патологического ма­териала (экссудат, мокрота) позволяет обнаружить возбуди­теля, представляющего собой грамположительную крупную (1—2 х 6—10 мкм) неподвижную стрептобациллу. В организме больных и на белковой питательной среде микроорганизмы образуют капсулу (рис. 16.1.4; на вклейке), в неблагоприят­ных условиях (почве) — споры (см. рис. 2.2).

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за­севают на чашки с питательным и кровяным агаром, а также в пробирку с питательным бульоном. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18—20 ч. В бульоне культура B.anthracis растет в виде хлопьевидного осадка; на агаре вирулентные штаммы образуют колонии R-формы, имеющие под малым увеличени­ем микроскопа вид львиной гривы или головы медузы. Авиру-лентные или слабовирулентные бактерии образуют S-формы колоний.

Для идентификации возбудителя изучают биохимические свойства и ряд других признаков (гемолитическую активность, способность к образованию L-форм и др.). B.anthracis обладает сахаролитическими свойствами, медленно разжижает желатин (в виде елочки верхушкой вниз), лишен гемолитической ак­тивности. Под действием пенициллина образует сфероплас-ты, имеющие вид жемчужин. Это явление используется для дифференциации B.anthracis от непатогенных бацилл. При­меняют также молекулярно-биологические методы идентифи­кации.

Биопроба. Исследуемый материал вводят подкожно белым мышам, морским свинкам или кроликам. Павших животных вскрывают, готовят мазки из крови и внутренних органов, делают посевы для выделения чистой культуры возбудителя. Капсульные формы B.anthracis в экссудате, полученном через 5—18 ч после заражения животного, можно обнаружить мето­дом иммунофлюоресценции (см. ниже).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Мазки из экссудата обраба­тывают противокапсульной сибиреязвенной антисывороткой, а затем флюоресцирующей антикроличьей сывороткой, мечен­ной родамином. В препаратах, содержащих капсульные бацил­лы, наблюдается желто-зеленое свечение возбудителя.

Антигены B.anthracis (секретируемые белки — "протектив-ный антиген" и токсины) в исследуемом материале из очага инфекции могут быть обнаружены с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА и др.).

Реакцию термокольцепреципитации Асколи для исследова­ния трупного материала ставят при необходимости диагности­ровать сибирскую язву у павших животных или у людей, умер­ших от неизвестной болезни, напоминающей висцеральную форму сибирской язвы, а также для определения зараженности сырья (кожа, мех, шерсть). Образцы исследуемого материала измельчают и кипятят в пробирке с изотоническим раствором хлорида натрия в течение 5—10 мин, после чего фильтруют до полной прозрачности. Преципитирующую сибиреязвенную сы­воротку получают путем гипериммунизации лошадей убитой культурой B.anthracis. Испытуемый термоэкстракт осторожно наслаивают на поверхность сыворотки в преципитационной пробирке. В положительном случае через 1—2 мин в месте соприкосновения появляется белое кольцо преципитации, что свидетельствует о присутствии в материале антигенов возбуди­теля. Контрольный термоэкстракт готовят из того же материа­ла, взятого от здорового животного (см. табл. 10.1.1).

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Кожно-аллергическая проба. Ставится на внутренней поверх­ности предплечья — внутрикожно вводят 0,1 мл антраксина. При положительной реакции через 24 ч появляются гиперемия и инфильтрат. Положительная реакция регистрируется у 90 % больных сибирской язвой, начиная со 2-й недели заболевания, и сохраняется у переболевших в течение всей жизни, в связи с чем ее диагностическая оценка должна производиться с ос­торожностью.

чение месяца. При заболевании или гибели животного готовят препараты из крови, мочи, материала, полученного после вскрытия, микроскопируют их в темном поле и делают посевы для выделения чистой культуры лептоспир.

Экспресс-методы диагностики. Биохимические и моле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить пред­варительный диагноз.

Серодиагностика. Антитела в крови пациентов удается обна­ружить с конца 1-й недели болезни. Для их выявления исполь­зуют реакцию агглютинации-лизиса с живыми эталонными куль­турами лептоспир разных серогрупп и сероваров. Учет резуль­татов реакции проводят методом термопольной микроскопии в препаратах "раздавленная" капля в темном поле. В положи­тельном случае отмечают агглютинацию и лизис лептоспир. При этом в первых разведениях сыворотки наблюдаются пол­ное растворение лептоспир, частичный лизис или зернистое набухание, в последующих разведениях — агглютинация леп­тоспир и появление агломератов в виде паучков. Диагностичес­кий титр реакции 1:100. Максимальный титр антител (1:1000— 1:10 000 и выше) наблюдается на 15—30-й день заболевания. Ввиду того что у части переболевших антитела в высоких титрах сохраняются в течение многих лет, диагностическое значение имеет нарастание титра антител в парных сыворотках.

• Микробиологическая диагностика сапа

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из язвенных поражений, абсцессов, отделяемое из носа.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого мате­риала готовят мазки и окрашивают по методу Грама. В мазках обнаруживаются мелкие (2—4 х 0,5—1 мкм) грамотрицатель-ные палочки. Метод имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование. Burkholderia mallei культи­вируют на простых питательных средах. Они образуют мелкие гладкие колонии, имеющие кремовую окраску, которые появ­ляются на 2—3-й день. Чистую культуру возбудителя иденти­фицируют по морфологии микробных клеток, подвижности (В.mallei неподвижны), тинкториальным, культуральным и биохимическим признакам.

Экспресс-методы диагностики. Биохимические и моле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить пред­варительный диагноз.

Серодиагностика. Для обнаружения антител к возбудителю используют реакции агглютинации, РИГА, РСК.

Кожно-аллергическая проба. Диагностическое значение име­ет постановка кожно-аллергической пробы с маллеином (ал­лергеном, приготовленным из В.mallei).

• Микробиологическая диагностика листериозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, смывы из зева, спинномозговая жидкость, околоплодные воды, плацента.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. В мазках из исследуемо­го материала, окрашенных по методу Грама, обнаруживаются мелкие короткие (0,5—2x0,4—0,5 мкм) грамположительные па­лочки. Метод имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за­севают на богатые питательные среды (кровяной агар, сердеч­но-мозговой бульон и др.), применяют также селективные сре­ды с высоким содержанием NaCl, антибиотиками (полимик-син, цефтазидим) и другими селектирующими агентами. По­севы инкубируют 5—7 дней при 35 "С. На кровяном агаре характерен р-гемолиз. Идентификацию осуществляют по мор­фологии микробных клеток, культуральным и биохимическим признакам. Для видовой и внутривидовой идентификации осу­ществляют серотипирование (по жгутиковому антигену и со­матическому антигену клеточной стенки) и фаготипирование.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Для быстрого обнаружения антигенов возбудителя в мазках из исследуемого материала используют метод прямой ИФ.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика мало информативна и практически не при­меняется.

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных Streptobacillus moniliformis

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, суставная жидкость.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. В мазках из суставной жидкости, окрашенных по методу Грама, можно обнаружить грамотрицательные палочки, располагающиеся в виде цепочек, образующих длинные неветвящиеся нити. Метод имеет ориен­тировочное значение.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за­севают на богатые питательные среды с высоким содержанием (не менее 10 %) нативных добавок (кровь, сыворотка или ас-цитическая жидкость). Посевы инкубируют при 35 °С в атмо­сфере с повышенным содержанием СС^. Бактерии образуют мелкие гладкие блестящие колонии. Идентификацию осущест­вляют по морфологии и тинкториальным свойствам (грамот­рицательные палочки располагаются в виде цепочек, образую­щих неветвящиеся нити длиной до 100—150 мкм), культураль-ным и биохимическим признакам. Важным методом иденти­фикации является ГЖХ.

Экспресс-методы диагностики. Биохимические и моле-кулярно-биологические исследования. Исследуемый ма­териал, полученный из очага инфекции, используют для обна­ружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнару­жения соответствующих молекул можно поставить предвари­тельный диагноз.