Материал: Тец руководство

бораторной диагностики сибирской язвы является бактериоло­гический (выделение из исследуемого материала культуры воз­будителя). Диагностическую ценность представляет также кож-но-аллергическая проба.

Возбудители лептоспироза относятся к порядку Spirocha-etales роду Leptospira. Патогенные лептоспиры относятся к виду L.interrogans, включающему более 160 сероваров, объединенных в несколько групп. Чаще всего заболевания у человека вызы­вают L.interrogans серогруппы icterohaemorrhagica — возбудитель желтушного лептоспироза (болезнь Васильева—Вейля) и L.in­terrogans серогруппы grippotyphosa — возбудитель безжелтушно­го лептоспироза (водная лихорадка).

Тема 16.1. ВОЗБУДИТЕЛИ ЧУМЫ, ТУЛЯРЕМИИ, БРУЦЕЛЛЕЗА, СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ, ЛЕПТОСПИРОЗА И ДРУГИХ ЗООНОЗНЫХ ИНФЕКЦИЙ

План

Программа

Биологические свойства возбудителей зооантропонозных инфекций, их патогенность, экология, особенность инфекций и эпидемиология вызываемых заболеваний.

Микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы, лептоспироза.

Особенности лабораторной работы с возбудителями ООН.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

Демонстрация

Мазки из чистых культур: Bwcella abortus, Bacillus апthracis, Francisella tularensis (окраска по методу Грама).

Yersinia pestis в гное из бубона (окраска метиленовым синим).

Культура лептоспиры в темном поле.

Рост B.anthracoides на питательной среде.

Реакция агглютинации Райта для серодиагностики бруцеллеза.

Реакция агглютинации для серодиагностики туляремии.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

а Задание студентам

Микроскопировать и зарисовать препараты возбудителей зоонозных инфекций.

Учесть результаты реакции агглютинации Райта для серодиагностики бруцеллеза.

Проанализировать результаты РИГА для серодиагнос­тики бруцеллеза.

Оценить результаты реакции агглютинации с парными сыворотками больного для серодиагностики туляремии.

Оценить результаты реакции термокольцепреципитации по Асколи с исследуемым материалом (термоэк­стракт из шкуры животного).

Отметить результаты реакции агглютинации-лизисалептоспир для серодиагностики лептоспироза и сде­лать заключение.

Ознакомиться с диагностическими, профилактичес­кими и лечебными препаратами.

а Методические указания

• Микробиологическая диагностика чумы

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из бубонов, пунктат лимфатических узлов, мокрота, промывные воды же­лудка, кровь, патолого-анатомический материал.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (схема 16.1.1). Из ис­следуемого материала готовят мазки, окрашивают по методу Грама и водным раствором метиленового синего. Y.pestis пред­ставляют собой грамотрицательные палочки овоидной формы (0,5x1,7 мкм). В мазках, окрашенных метиленовым синим, хорошо заметно биполярное распределение краски (рис. 16.1.1; на вклейке). Встречаются полиморфные клетки.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за­севают на чашки с питательным агаром. Посевы инкубируют при 25—28 °С. Первичное изучение посевов производят через 10—12 ч. К этому сроку появляются колонии в виде батисто­вого платочка, которые образованы вирулентными R-формами. Мало- и авирулентные бактерии формируют S-формы коло­ний. Идентификацию чистой культуры проводят по морфоло­гии бактериальных клеток, характеру роста, антигенным и био­химическим свойствам, чувствительности к специфическому фагу и с помощью молекулярно-биологических методов. Иног­да также используют биопробу.

На бульоне Y.pestis образуют пленку со спускающимися ни­тями, напоминающими сталактиты; ферментируют многие са­хара до кислоты, индола не образуют, желатин не разжижают. Y.pestis содержат групповой термостабильный соматический антиген и специфический термолабильный капсульный анти­ген, который обнаруживается только у вирулентных штаммов. В случае исследования материала, взятого у погибших грызу­нов, проводят дифференциальную диагностику с возбудителя­ми псевдотуберкулеза (Yersinia pseudotuberculosis) на основании

характера роста на специальных средах, биохимических свойств (ферментация рамнозы, адонита) и других признаков.

Биопроба. Проводят для выделения чистой культуры из ма­териала, загрязненного посторонней микрофлорой. Наиболее чувствительными лабораторными животными являются мор­ские свинки. Материал вводят подкожно или внутрибрюшинно в том случае, если он не загрязнен другими бактериями. При контаминации посторонней микрофлорой материал втирают морской свинке в выбритый участок кожи в области живота. После гибели животных (на 3—7-й день в зависимости от способа введения материала) делают вскрытие, отмечают па­тологические изменения органов и проводят бактериологичес­кое исследование по схеме 16.1.1.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Иммунофлюоресцентный метод позволяет обнаружить присутствие антигенов возбудите­ля как в патологическом материале, так и в объектах окружаю­щей среды (вода, почва), а также в пищевых продуктах и эктопаразитах. С этой целью используют люминесцентную ви-доспецифическую противочумную сыворотку, люминесцент­ные противокапсульную и противосоматическую сыворотки. РИГА применяют для обнаружения антигенов возбудителя чу­мы в исследуемом материале с помощью стандартной проти­вочумной сыворотки, антитела которой нагружены на эритро­циты.

Биохимические и молекулярно-биологичес­кие исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбу­дителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствую­щих молекул можно поставить предварительный диагноз.

• Микробиологическая диагностика туляремии

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из бубонов, пунктат лимфатических узлов, мокрота, кровь, патолого-ана-томический материал.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (схема 16.1.2). Из иссле­дуемого материала готовят мазки, окрашивают по методу Грама и метиленовым синим. Для F.lularensis характерен выраженный полиморфизм. В чистой культуре они представляют собой очень мелкие (0,3—0,5 мкм) кокки (рис. 16.1.2; на вклейке). В мазках из органов преобладают палочковидные формы. Спор не образуют, грамотрицательны, иногда выражена биполярная окраска. В биоптатах тканей и мазках F.tularensis могут распо­лагаться как вне, так и внутри клеток. Бактерии слабо окра­шиваются по методу Грама и плохо выявляются в материале

при обычных методах микроскопии. Для обнаружения использу­ют преимущественно метод иммунофлюоресценции (см. ниже).

Бактериологическое исследование. Применяют для выделе­ния чистой культуры F.tularensis. Бактериологическую диагнос­тику осуществляют в специальных лабораториях. Выделение возбудителя проводят на свернутой яично-желточной среде, глюкозоцистиновом кровяном агаре и других богатых пита­тельных средах сложного состава. Для подавления роста сопут­ствующей микрофлоры в среды добавляют пенициллин. Виру­лентные штаммы образуют S-формы колоний — мелкие, глад­кие, беловатого цвета с голубоватым оттенком. Идентифи­кацию чистой культуры проводят по морфологии бактериаль­ных клеток, характеру роста, биохимическим, антигенным свойствам и с помощью молекулярно-биологических методов. Биохимические свойства F.tularensis выявляют на специальной плотной среде с ограниченным содержанием белка. Бактерии содержат оболочечный антиген, с которым связаны их виру­лентные и иммуногенные свойства, и О-соматический антиген. По антигенным свойствам близки к бруцеллам.

Биопроба. Наиболее чувствительными животными являются белые мыши и морские свинки, которые погибают при под­кожном введении единичных бактерий.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Метод ИФ позволяет обна­ружить присутствие антигенов бактерий в патологическом ма­териале. Используют люминесцентную противотуляремийную сыворотку. В положительном случае в препарате видны светя­щиеся микроорганизмы. Антигены возбудителя в материале от больного могут быть обнаружены с помощью ИФА.

Биохимические и молекулярно-биологичес­кие исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбу­дителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствую­щих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Ставят реакцию агглютинации с туляре-мийным диагностикумом. Относительно позднее появление антител-агглютининов в крови (на 2-й неделе болезни) затруд­няет применение этой реакции для ранней диагностики, одна­ко их длительное сохранение делает возможной ретроспектив­ную диагностику. Диагностический титр реакции 1:100. Обя­зательно прослеживается нарастание титра агглютинации (в парных сыворотках). Более чувствительным методом серодиаг­ностики туляремии является РНГА, которая бывает положи­тельной в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Титры антител в сыворотке в разгар заболевания достигают 1:1280— 1:2560 и выше. Используют также ИФА.

Для ускоренной диагностики применяют кровяно-капельную реакцию: кровь из пальца больного наносят на обезжи­ренное предметное стекло, добавляют каплю дистиллирован­ной воды (для лизиса эритроцитов), вносят каплю диагности-кума и смешивают стеклянной палочкой. При наличии в крови агглютининов в диагностическом титре (1:100 и выше) в капле немедленно наступает агглютинация диагностикума; при тит­рах ниже диагностических агглютинация происходит через 2—3 мин.