Материал: Методы исследования в медицинской бактериологии

171

диагностикумы представляют собой препараты, содержащие белок А стафилококков, сенсибилизированный кроличьими О1 и О139 холерными сыворотками. Холерные антитела, сорбированные на стафилококковом белке, при соединении с холерными антигенами вызывают реакцию коагглютинации.

9.1.4. Реакция латекс-агглютинации

Реакция агглютинации латекса или реакция латекс-агглютинации (РАЛ или РЛА) предусматривает использование латексного диагностикума. Латексный диагностикум представляет собой частицы латекса (полистирола), покрытые антигенами (латексный антигенный диагностикум) для выявления антител или антителами (латексный антительный диагностикум) для выявления антигенов.

Частицы латекса, используемые в серологических реакциях, имеют размер 0,79-0,81 мкм. Взвесь таких частиц латекса разводится в соотношении 1:10 боратным или глициновым буфером (рН 8,2). Приготовленную взвесь “нагружают” антигеном или антителами в соотношении 1:10 и выдерживают в течение 2 часов при температуре

37ОС.

Частицы латекса, нагруженные антигеном или антителами, используют в реакции определения неизвестного антигена по известной сыворотке или неизвестных антител по известному антигену. Реакция латекс-агглютинации проявляется в течение 2-3 минут. Наступившая реакция латекс-агглютинации хорошо видна невооруженным глазом особенно на темном фоне или под малым увеличением микроскопа. При положительной реакции наблюдают образование фестончатого осадка - “розетки агглютинации”. При отрицательном результате отмечается образование “пуговки”.

Структура и механизм действия латексных диагностикумов представлены на рисунке 172.

Частица

латекса

Частица

латекса

Рисунок 172 – Структура и механизм действия антигенного (а) и антительного (б) латексных диагностикумов. Заимствовано и адаптировано из Интернет-ресурсов.

172

Наборы для идентификации и дифференциации бактерий из клинического материала методом латексной агглютинации выпускаются в жидком или сухом виде. Сухие наборы предпочтительнее, так как латексный реагент нанесен на реакционную карточку и лиофилизирован. Такие наборы можно хранить при температуре плюс 2-25ОС в течение 2 лет.

Механизм взаимодействия антительного латексного диагностикума с бактериальными антигенами представлен на рисунке 173.

Бактериальные антигены

Антитела к бактериальным антигенам Частицы латекса

Рисунок 173 – Механизм взаимодействия антительного латексного диагностикума с бактериальными антигенами. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Учёт результатов латекс-агглютинации проводят через 10-15 минут при косом освещении лучше на тёмном фоне. Результат латекс-агглютинации представлен на рисунке 174.

а б Рисунок 174 – Отрицательный (а) и положительный (б) результат реакции латекс-

агглютинации. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Латекс-агглютинация используется для выявления антигенов в небольшом объеме материала при индикации S. pneumoniae, H. influenzae, N. meningitides в

различных биологических жидкостях (ликвор, сыворотка крови, моча), при диагностике сальмонеллезов, иерсиниозов и других заболеваний. Разработаны также наборы для выявления антигенов стрептококков группы А в мазках из зева; для первичной экспресс-идентификации колоний стрептококков групп А, В, С, F, энтерококков, золотистого стафилококка, Neisseria gonorrhoeae, кампилобактера,

173

Clostridium difficile, хеликобактера, кишечной палочки, легионелл и других бактерий (рисунок 175).

Рисунок 175 – Наборы для выявления Staphylococcus aureus и Salmonella spp.

методом латекс-агглютинации. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Чувствительность метода латекс-агглютинации составляет 103-106 клеток в 1

мкл.

9.2. Реакция прямой гемагглютинации

Реакция прямой гемагглютинации представляет собой способность эритроцитов склеиваться при адсорбции на них определенных антигенов. Так как это склеивание происходит без участия иммунной сыворотки (антител), реакция прямой гемагглютинации не является серологической.

К реакциям прямой гемагглютинации относятся реакции определения групп крови в системе АВ0 и вирусная гемагглютинация.

Самой распространенной реакцией прямой гемагглютинации является гемагглютинация, применяемая для определения групп крови в системе АВО (реакция гемагглютинации – РГА). Для определения агглютинации (или её отсутствия) используют стандартные антисыворотки с анти-А и анти-В- агглютининами. Реакция называется прямой, так как исследуемые антигены являются естественными компонентами эритроцитов.

Компоненты РГА: исследуемая кровь (антигены), стандартные сыворотки (антитела) групп Оab(I), Ab(II) и Ba(III). На стекло или планшет наносят по 2 капли стандартной сыворотки разных групп. Рядом со стандартными сыворотками наносят по 1 капле исследуемой крови. Встряхиванием перемешивают сыворотку с кровью, периодически покачивают и через 5 минут учитывают результат:

-нет агглютинации во всех сыворотках - Оab(I) группа крови;

-агглютинация в сыворотках Оab(I) и Ba(III) - Ab(II) группа крови;

-агглютинация в сыворотках Оab(I) и Ab(II) - Ba(III) группа крови;

174

- агглютинация во всех сыворотках – Ab0(IV) группа крови.

Результат РГА при определении групп крови представлен на рисунке 176.

а б Рисунок 176 – Результат РГА при определении групп крови: а – отрицательная РГА;

б – положительная РГА. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Общие с прямой гемагглютинацией механизмы имеет вирусная гемагглютинация. Например, вирусы гриппа способны спонтанно агглютинировать эритроциты птиц и млекопитающих в результате наличия на поверхности вирусных частиц гемагглютинина. При добавлении таких вирусов к суспензии эритроцитов наблюдается образование сгустков, состоящих из эритроцитов и вирусных частиц (рисунок 177).

Рисунок 177 – Вирусная гемагглютинация. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

9.3. Реакция непрямой гемагглютинации

Реакцию непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА) с танизированными (обработанными танином) эритроцитами проводят в двух вариантах: с известным антигеном для обнаружения антител и с известными антителами (сывороткой) для выявления неизвестного антигена. Поэтому в РНГА используют эритроцитарные диагностикумы: эритроцитарный антигенный диагностикум (для обнаружения антител) или эритроцитарный антительный диагностикум (для обнаружения антигенов).

РНГА для обнаружения антител в сыворотке крови проводят с помощью

эритроцитарных антигенных диагностикумов, представляющих собой фиксированные на эритроцитах антигены возбудителя (рисунок 178).