Материал: Методы исследования в медицинской бактериологии

96

1 2 3 4 5

Рисунок 87 – Среда Олькеницкого (1) и рост на ней бактерий: Salmonella typhimurium (2), Escherichia coli (3), Shigella flexneri (4) и Salmonella typhi (5).

Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Висмут-сульфит агар (среда Вильсона-Блера) является дифференциально-

диагностической средой при выделении сальмонелл. Среда состоит из МПА и индикатора, содержащего лимоннокислый висмут, сернокислый натрий, соль Мора (серноаммонийная соль железа), двухосновной фосфорнокислый натрий, глюкозу и бриллиантовую зелень. Сальмонеллы образуют на этой среде колонии черного цвета (рисунок 88).

Рисунок 88 – Рост сальмонелл на висмут-сульфитном агаре. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Протеолитическую активность бактерий (рисунок 89) определяют по разжижению столбика желатина (наличие желатиназы) или по образованию зон просветления вокруг колоний на молочном агаре (наличие казеиназы).

агаре)

1 2

Рисунок 89 – Протеолитическая активность бактерий в столбике желатина (1) и на молочном агаре (2). Заимствовано из Интернет-ресурсов. 21

Гемолитическая активность бактерий определяется на кровяном агаре (рисунок 90).

Рисунок 90 – Рост бактерий на кровяном агаре. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Селективные питательные среды содержат вещества, препятствующие росту одних видов бактерий, и вещества, способствующие росту других видов микроорганизмов. Селективные питательные среды позволяют направленно отбирать определенные виды бактерий. К ним относятся желточно-солевой агар для выделения стафилококков, щелочной агар для выращивания холерного вибриона и др. Например, солевой агар, предназначенный для выделения стафилококков, в качестве элективного фактора содержит повышенную концентрацию (10%) хлорида натрия. Желточно-солевой агар содержит не только элективный фактор (хлорид натрия), но и дифференцирующее вещество (желток куриного яйца), позволяющее определять у стафилококков наличие лецитиназы (рисунок 91).

98

Рисунок 91 - Желточно-солевой агар для выделения стафилококков. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Элективные питательные среды содержат вещества, подавляющие рост одних бактерий, но не влияющие на рост других бактерий. Эти среды служат для выделения определенных видов бактерий из смешанных популяций. К элективным средам относятся, например, селенитовая среда, среда Мюллера.

Накопительные среды (обогатительные среды, среды обогащения) - это жидкие среды, на которых определенные виды культур растут быстрее и интенсивнее сопутствующих микроорганизмов. Такие среды могут содержать вещества, подавляющие рост посторонних микробов, или вещества, способствующие росту требуемых бактерий. К накопительным средам относятся, например, солевой бульон для стафилококков, селенитовый бульон для сальмонелл (рисунок 92).

а б Рисунок 92 – Накопительные среды: а - солевой бульон, б - селенитовый бульон.

Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Так, солевой бульон (обогатительная среда для стафилококков) в качестве элективного фактора содержит 10% хлорида натрия, селенитовый бульон (обогатительная среда для сальмонелл) в качестве элективного фактора содержит селенит натрия, а сахарный бульон (обогатительная среда для стрептококков) содержит глюкозу в качестве ростового фактора.

Для длительного хранения микроорганизмов в условиях холодильника применяют консервирующие среды, содержащие криопротекторы (например, глицерин).

99

Транспортные среды используются на этапах доставки биоматериала в лабораторию. Состав таких сред способствует сохранению микробов в жизнеспособном состоянии без размножения. В связи с этим в биоматериале количественный и качественный состав микробиоты не изменяется.

Введение в питательные среды дифференцирующих субстратов (углеводов, белков, мочевины и др.) и соответствующих индикаторов позволяет по окраске колоний и среды вокруг них отличать одни бактерии от других. Дифференциация бактерий при таком подходе осложняется тем, что сахаролитические и протеолитические ферменты микроорганизмов многообразны и универсальны (встречаются у представителей разных видов). Это обусловливает относительно невысокие дифференцирующие свойства традиционных питательных сред. Для более четкой дифференциации бактерий целесообразно определять родо- и видоспецифические ферменты.

Таким образом, в состав питательных сред могут входить различные компоненты, позволяющие не только создавать благоприятные условия для размножения бактерий, но и стимулировать рост одних микробов и угнетать рост других микроорганизмов. Назначение наиболее распространенных компонентов питательных сред представлено в таблице 12.

Таблица 12 – Компоненты питательных сред и их назначение

100

В таблице 13 приведены примеры наиболее часто используемых в бактериологии питательных сред.

Таблица 13 – Часто используемые в бактериологии питательные среды

Во второй половине ХХ века в бактериологическую практику были введены хромогенные питательные среды, принцип действия которых состоял в выявлении высокоспецифичных бактериальных ферментов. Хромогенные питательные среды позволяют уже на первом этапе через 24 часа культивирования получить результат о видовой принадлежности микроба. К таким высокоспецифическим ферментам относятся β-D-глюкуронидаза Escherichia coli или β-D-глюкозидаза энтерококков. На хромогенных питательных средах по цвету колоний можно проводить предварительную идентификацию бактерий.

Для обнаружения такого уникального фермента в состав хромогенной питательной среды вводят вещество (хромогенный субстрат), при расщеплении которого этим ферментом образуются окрашенные или флюоресцирующие продукты, выявляемые по изменению окраски колоний или их флюоресценции при