35. Сердечные гликозиды: строение, классификация. Применение лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов, содержащих кардиогликозиды.

Ответ. Сердечные (кардиотонические) гликозиды — вещества растительного, реже животного, происхождения, агликоны которых являются стероидами – производными циклопентанпергидрофенантрена, имеющими у С17 ненасыщенное 5- или 6-членное лактонное кольцо и оказывающими специфическое действие на сердечную мышцу: задержка ритма сердца в стадии систолы, а в больших дозах — и его остановка. Сердечные гликозиды по их молекулярной структуре делят на подгруппы: карденолиды: наперстянковые, строфантовые, строфантидоловые; буфадиенолиды. Установлено, что сердечные гликозиды в небольших дозах увеличивают силу и уменьшают частоту сердечных сокращений, улучшают метаболизм сердечной мышцы. Сердечные гликозиды в виде очищенных ЛС применяют при сердечной недостаточности и нарушениях ритма сердца (аритмиях). Различные ЛС отличаются скоростью наступления эффекта, продолжительностью действия, способностью к кумуляции, а также побочными явлениями. Сердечные гликозиды не применяют при атриовентрикулярной блокаде различной степени, брадикардии; при стенокардии и инфаркте миокарда необходима высокая осторожность в использовании ЛС, содержащих кардиогликозиды. Среди множества, представленных на фармацевтическом рынке ЛС, имеются такие, которые до настоящего времени не синтезируются химическим или микробиологическим путем. К ним относятся, например, кардиотонические гликозиды, получаемые из ЛРС. Роль фабрик, синтезирующих кардиогликозиды, выполняют ЛР. Следует отметить, что получение ЛС, в частности сердечных гликозидов, из животных (жаб, насекомых), способных вырабатывать и накапливать эти вещества, в Республике Беларусь пока не налажено. Более того, буфадиенолиды как ЛС в мире сегодня производятся в ограниченном количестве и используются мало. Образованию и накоплению сердечных гликозидов в растениях способствуют свет, тепло и присутствие в почве Mn и Mo — коферментов их синтеза. Отмечено, что содержание сердечных гликозидов в растениях, произрастающих в горах, выше, чем у растущих в долинах.

36. Сердечные гликозиды: физико-химические свойства, выделение из лекарственного растительного сырья; биологическая стандартизация лекарственного растительного сырья и препаратов.

Ответ. Сердечные (кардиотонические) гликозиды — вещества растительного, реже животного, происхождения, агликоны которых являются стероидами — производными циклопентанпергидрофенантрена, имеющими у С17 ненасыщенное 5- или 6-членное лактонное кольцо и оказывающими специфическое действие на сердечную мышцу: задержка ритма сердца в стадии систолы, а в больших дозах — и его остановка. В чистом виде выделенные из ЛРС сердечные гликозиды представляют собой бесцветные или бело-кремовые кристаллические вещества без запаха, горького вкуса. Для них характерна определенная точка плавления (около 200 °С) и оптическая активность (обусловленная присутствием в молекуле гликозильной части), многие кардиогликозиды флуоресцируют в УФ-свете. Сердечные гликозиды плохо растворимы в органических растворителях (хлороформе, эфире), но хорошо — в воде, а еще лучше — в водных растворах этанола и метанола. Чем длиннее сахарная цепочка кардиогликозидов, тем их растворимость в воде лучше. Агликоны, наоборот, растворимы в неполярных растворителях и не растворимы в воде. Молекулы сердечных гликозидов легко гидролизуются: как ферментами гидролазами, так и неферментным путем в кислых значениях рН, в результате чего их гликозильная цепочка ступенчато или полностью отщепляется от генина. Как правило, при ферментном гидролизе углеводный фрагмент расщепляется постепенно и мягко, одно звено задругим, а при кислотном — более резко, часто с отрывом больших кусков или даже всей сахаристой цепочки от агликона. Многие сердечные гликозиды достаточно быстро окисляются кислородом воздуха. К разрушению сердечных гликозидов приводит и повышенная температура. В щелочной среде сердечные гликозиды теряют свою кардиотоничекую активность и превращаются в биологически малоактивные изосоединения. Таким образом, если кислая среда ведет к отделению сахаристой части от агликона, то щелочная — к утере сердечными гликозидами своих специфических кардиотонических свойств. Лучше всего данные свойства у сердечных гликозидов сохраняются при нейтральных показаниях рН. Эти обстоятельства следует учитывать при заготовке и сушке ЛРС и при технологии выделения из него кардиогликозидов. На практике обычно используют упрощенный способ выделения данных веществ. Для этого определенное количество измельченного ЛРС (например, листьев ландыша) в течение суток подвергают экстракции 50 или 70 % этанолом. Спирт одновременно препятствует ферментативному гидролизу сердечных гликозидов, отделению сахаристой части от агликона. В этих концентрациях спирта растворятся и гликозиды, и агликоны сердечных гликозидов. Полученный экстракт выпаривают под вакуумом при температуре 50—60 °С (выпаривание при более высоких значениях ведет к инактивации сердечных гликозидов — потере ими качественных свойств). Густой экстракт разбавляют водой и многократно обрабатывают хлороформом или другим органическим растворителем. Очистку можно проводить методом фильтрации через колонку с оксидом алюминия, которая при этом поглощает хлорофилл, флавоноиды, смолистые и другие липофильные балластные вещества, делая раствор более прозрачным. Далее проводят разделение суммы сердечных гликозидов на хроматографических колонках с оксидом алюминия, силикагелем или другим сорбентом. Образующиеся на сорбенте нужные зоны берут и элюируют определенным растворителем. Активность сердечных гликозидов в ЛРС, в лекарственных формах и в ЛС определяют биометодом. Активность устанавливают, сравнивая опытный образец с препаратом-стандартом (кристаллическим сердечным гликозидом с известным количеством единиц действия), и выражают в особых единицах действия. Таковыми являются кошачьи единицы действия (КЕД), голубиные единицы действия (ГЕД) или лягушачьи единицы действия (ЛЕД) — все зависит от того, чьи сердца используют для испытания активности ЛРС. В результате этих испытаний устанавливают наименьшие дозы стандарта и испытуемого образца, которые вызывают систолическую остановку сердца. Цифровые значения активности выражают в пересчете на 1 г препарата. Валор — это количество единиц действия в 1 г ЛРС. Поскольку КЕД > ГЕД > ЛЕД, то валор 1 г ЛРС будет зависеть от природы сердец, в частности он будет больше при выражении в ЛЕД и меньше при выражении в ГЕД или КЕД.

37. Сердечные гликозиды: качественный химический и биологический анализ.

Ответ. Сегодня еще не существует достоверных методов химического анализа сердечных гликозидов, нет и общепризнанных химических способов выявления молекул этих веществ. Поэтому используют качественные реакции на те или иные части молекулярной структуры кардиогликозидов. Реакции на 5-членное лактонное кольцо. Реакция Балье. Желтая пикриновая кислота в щелочной среде (пикрат натрия) при взаимодействии с сердечными гликозидами дает оранжевокрасное окрашивание. Теперь эта реакция положена также в основу фотоколориметрического количественного определения данных веществ. Следовательно, реакцию Балье можно считать одной из основных по выявлению сердечных гликозидов. Реакция Легаля. Сердечные гликозиды при взаимодействии с нитропруссидом натрия окрашиваются в оранжево-красный цвет. Реакция Кедде. Сердечные гликозиды с 3,5-динитробензойной кислотой в щелочной среде окрашиваются в красно-фиолетовый цвет. Реакции на стероидный «скелет» молекулы. Реакция Либермана — Бурхардта. Упаренный сухой остаток извлечения из ЛРС растворяют в ледяной уксусной кислоте и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты (50:1). Через некоторое время на краю пробирки появляется окраска, изменяющаяся от розовой до зеленой и синей. Реакция Розенгейма. Сухой остаток извлечения растворяют в хлороформе и смешивают с 90 % водным раствором трихлоруксусной кислоты. Появляется окраска, изменяющаяся от розовой до лиловой и синей. Реакции на дезоксисахара. Реакция Келлер-Килиани. Сухой остаток извлечения из ЛРС растворяют в ледяной уксусной кислоте (с каплей Fe2(SO4)3) и по стенке пробирки осторожно вливают 1—3 мл концентрированной H2SO4 (с каплей Fe2(SO4)3). На границе слоев образуется бурое кольцо, а верхний слой через некоторое время окрашивается в сине-зеленый цвет. Эта реакция положительна только в случае, если дезоксисахар в молекуле кардиогликозида находится в свободном состоянии или занимает крайнее (не прикрытое другими моносахарами) положение в гликозильной цепочке. Реакция Пезеца. При нагревании раствора кардиогликозида с ксантгидролом (или иначе дибензо-у-пиранолом) в присутствии уксусной кислоты и при последующем добавлении нескольких капель H2SO4 (или H3PO4) происходит красное окрашивание. Реакция с нитрофенилгидразином. Если известно, что дезоксисахара в кардиогликозиде «закрыты», то проводят предварительный гидролиз их с помощью трихлоруксусной кислоты. Появляющийся свободный дезоксисахар выявляют в реакции с нитрофенилгидразином и натрия гидроксидом. Раствор при этом дает голубую окраску. Реакция на 6-членное лактонное кольцо. Реакция Татье. К спиртовому извлечению прибавляют 2—3 капли концентрированной хлористоводородной кислоты с ионами Fe3+ и нагревают. Агликоны буфадиенолидов дают красное окрашивание.

38. Сердечные гликозиды: заготовка сырья различных морфологических групп, особенности сушки и сроки хранения.

Ответ. Сроки заготовки ЛРС, содержащего кардиогликозиды, получаемого из различных ЛР, индивидуальны. Так, например, в качестве ЛРС наперстянки крупноцветковой (Digitalis grandiflora) заготавливают прикорневые розеточные листья первого года и стеблевые листья цветущего растения (июнь-август) второго года; траву и цветки ландыша (Convallaria majalis/transcaucasica/keiskei) заготавливают во время цветения (апрель-май), а листья – после цветения; траву Желтушника раскидистого (Erysimum diffusum) во время цветения (май-июнь). Для большинства видов сырья проводят быструю сушку при температуре 50—70 С, чтобы как можно скорее инактивировать ферменты, которые вызывают нежелательный гидролиз гликозидов. ЛРС, содержащее кардиотонические гликозиды, хранят в проветриваемых помещениях при температуре не выше 15 С по списку Б, а семена строфанта—по списку А. Ядовитое (список А) и сильнодействующее (список Б) ЛРС хранят в отдельном складском помещении, в закрытых на замок сейфах или металлических шкафах. На окнах устанавливаются металлические решетки, а двери обивают металлом. Помещение оборудуют световой и звуковой сигнализацией. После окончания работы эти помещения опечатывают. Точные сроки годности для каждого вида ЛРС указаны в нормативном документе (НД). Так ЛРС наперстянок хранят 1 год. Ежегодно сырье проверяют на биоактивность, наличие амбарных вредителей и соответствие длительности хранения нормативному сроку.

39. Лекарственные растения и лекарственное растительное сырье, содержащие сердечные гликозиды: виды наперстянок, строфант, горицвет, ландыш, желтушник.

Ответ. Наперстянка пурпурная (Digitalispurpurea L.) — сем. Норичниковые (Scrophulariaceae). Двулетнее травянистое растение высотой до 1,2 м. Произрастает в Западной Европе, Карпатах. Во флоре Беларуси в диком виде не отмечено, но иногда культивируется как декоративное или ЛР. Розеточные листья удлиненно-обратнояйцевидные, черешковые, длиной до 30 см и шириной до 15 см. Стеблевые листья имеют ту же форму и меньшие размеры, нижние — черешковые, верхние — сидячие. Края листьев неравномерногородчатые. Листовые пластинки сверху темно-зеленые, морщинистые, снизу серо-зеленые (из-за обилия волосков) и с сильно выступающими жилками, показывающими сетчатый рисунок. Соцветие — однобокая кисть, состоящая из поникающих наперстковидных крупных колокольчатых цветков — пурпурных снаружи и бело-розовых внутри с пурпурными пятнами в зеве. Digitalis purpurea folia — наперстянки пурпурной листья. ЛРС — листья продолговато-яйцевидной или яйцевидно-ланцетовидной формы с заостренной верхушкой, неравномерно-городчатым краем и нисбегающим основанием. Прикорневые листья с длинными крылатыми черешками, стеблевые — короткочерешковые или без черешков. Листья ломкие, морщинистые, с нижней стороны сильноопушенные, серовато-зеленые, с характерной густой сеткой сильно выступающих мелких разветвлений жилок, образующих с главной жилкой угол около 45° и соединяющихся возле края. Листья имеют длину 10—40 см и ширину 4—15 см. Запах слабый, характерный. Срок хранения сырья 1 год. Его биологическая активность проверяется ежегодно. Наперстянка крупноцветковая (Digitalis grandiflora L.) — сем. Норичниковые (Scrophulariaceae). Многолетнее травянистое растение высотой 40—100 см. Во флоре Беларуси встречается редко (внесено в Красную книгу). Наперстянку крупноцветковую, как и н. пурпурную, в ботанических садах выращивают как двулетнее, светолюбивое, засухоустойчивое растение, имеющие декоративную и лекарственную значимость. У н. крупноцветковой, в отличие от н. пурпурной, листья с острой верхушкой, продолговатоланцетовидные, края неравномерно-пильчатые, цвет листовой пластинки с обеих сторон темно-зеленый. Цветки колокольчатые, бело-желтые, в июне —июле образуют поникающую однобокую кисть. Digitalis grandiflora folia — наперстянки крупноцветковой листья. В качестве ЛРС заготавливают прикорневые розеточные листья первого года и стеблевые листья цветущего растения второго года. Запах свежего сырья травянистый, вкус горьковатый (на вкус листья наперстянки пробовать не рекомендуется!). Срок хранения сырья 1 год. Биологическая активность сырья проверяется ежегодно. Листья н. пурпурной и н. крупноцветковой содержат стероидные сапонины (2 %), флавоноиды (рутин, производные апигенина и люте- олина), антрахиноны, фенолкарбоновые кислоты (ванилиновую, кумаровую, кофейную и др.), иридоиды (5 %), дубильные вещества, алкалоиды. В отношении кардиогликозидов у н. пурпурной и н. крупноцветковой есть некоторые различия. Листья н. пурпурной содержат три карденолида: пурпуреагликозид А, пурпу- реагликозид В и глюкогиталоксин, у которых агликонами являются соответственно дигитоксигенин, гитоксигенин и глюкогиталоксин. Вторичные гликозиды, образующиеся в результате ферментации при сушке ЛРС и связанные с отщеплением в гликозильной цепочке первичных гликозидов конечного звена — глюкозы, названы дигитоксин, гитоксин и гиталоксин. Листья н. крупноцветковой содержат три карденолида: ланатозиды А, В и С (дигиланиды А, В и С), у которых агликонами являются соответственно дигитоксигенин, гитоксигенин и дигоксигенин. Их вторичные гликозиды, которые образуются при сушке сырья и связаны с отщеплением конечной глюкозы в цепочке первичных гликозидов, названы ацетилдигитоксин, ацетилгитоксин и ацетилдигоксин, а третичные гликозиды, которые образуются после отщепления еще одного звена дигитоксозы, названы дигитоксин, гитоксин и дигоксин соответственно. Наперстянка шерстистая (Digitalis lanatae Ehrh.) — сем. Норичниковые (Scrophulariaceae). Многолетнее травянистое растение высотой до 60—80 см. В культуре выращивается обычно как двулетнее растение высотой до 2 м. Естественно произрастает на Кавказе, Балканах, но считается редким, исчезающим видом. В Беларуси известно только в культуре. Стебли прямостоячие, красно-фиолетовые, вверху густоопушенные, особенно цветочная кисть. Прикорневые розеточные и нижние стеблевые листья продолговатоланцетовидные, цельнокрайние, опушенные, верхние стеблевые — ланцетовидные, сидячие, уменьшающиеся в размере и переходящие в прицветники, покрытые волосками. Цветет в июне — августе. Соцветие — густая длинная и многосторонняя кисть из цветков шаровидной формы буро-желтого цвета с лиловыми жилками. Digitalis lanatae folia — наперстянки шерстистой листья. ЛРС — цельные плотные листья или их кусочки. Листовая пластинка сверху зеленая, снизу светло-зеленая; жилки желто-бурые, у основания листа красно- лиловые. Запах слабый. Вкус не определяют (ЛРС ядовито!). Срок хранения сырья 1 год по списку Б. Ежегодно проверяется на биологическую активность. Листья н. шерстистой содержат около 50 кардиогли- козидов (основными являются ланатозиды А, В, С, D и Е), стероидные сапонины, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, таннины. Ун. шерстистой, помимо ланатозидов А, В, С, присутствуют еще ланатозиды (дигиланиды) D и E, у которых агликонами являются соответственно дигинатигенин и гиталоксигенин. Второичные гликозиды образуются в результате отщепления конечной глюкозы и называются ацетилдигинатин и ацетилгиталоксин, а третичные гликозиды образуются после отщепления еще одного звена — дигитоксозы, и называются соответственно дигинатин и гиталоксин. Из листьев н. пурпурной и н. крупноцветковой получают ЛС Дигитоксин и Кордигит, которые по действию аналогичны Дигитоксину, но обладают меньшим кумулятивным эффектом. ЛС применяют при хронической сердечной недостаточности, требующей длительного лечения, тахикардии, мерцательной аритмии. Кроме названных ЛС можно использовать также водные настои из листьев, которые способствуют исчезновению отеков, одышки, уменьшению застойных явлений, урежению пульса, увеличению скорости кровотока, повышению диуреза и улучшению общего состояния. Из листьев н. шерстистой получают кардиотонические ЛС Целанид, Дигоксин, Дигален-нео, а также Лантозид (70 % спиртовой раствор суммы гликозидов из листьев н. шерстистой, т. е. ланатозидов А, В, С^иЕи др.). Они меньше кумулируют, быстрее всасываются и выводятся, чем кардиогликозиды из н. пурпурной и н. крупноцветковой. Строфант Комбе (Strophanthus Kombe Oliv.), с. щетинистый (с. волосистый) (S. hispidus DC.) и с. привлекательный (с. приятный) (S. Gratus [Hook.] Franch.) — сем. Кутровые (Apocinaceae). Многолетние лианы. Имеют супротивные эллиптические листья. Произрастают в тропиках Восточной (первый вид) и Западной (два других вида) Африки. Плод — двулистовка, достигающая в длину 1 м, содержит многочисленные продолговатые семена длиной 18 мм и шириной 3—6 мм с перистой летучкой на конце. Strophanthi semina — строфанта семена. Семена продолговатые, с одного конца закругленные, с другого вытянутые. У с. Комбе они серебристо-зеленые, с прижатыми шелковистыми волосками; с. щетинистого — бурые, менее опушенные; с. привлекательного — желто-бурые, голые. Семена строфанта хранят 3 года. Семена с. Комбе содержат кардиотонические гликозиды, производные агликона строфантидина: первичный — Кстрофантозид, вторичный — К-строфантин-(3 и третичный — цимарин, а также гликозид цимарол. Общее количество сердечных гликозидов в семенах с. Комбе составляет около 10 %, с. привлекательного — 4—8 %, причем 90 % их приходится на рамнозид G-строфантин (уабаин). В семенах всех видов строфанта содержится жирное масло (30 %), сапонины, холин. Из семян с. Комбе получают два основных ЛС: Строфантин К, который состоит из смеси К-строфантозида и К-строфантина-Р, и Строфантидин-ацетат. ЛС характеризуются высокой эффективностью и быстротой действия (эффект проявляется через 5—10 мин, максимум достигается через 15—30 мин, продолжительность действия небольшая), практически не обладают кумулятивным влиянием и быстро выводятся из организма. Их рекомендуют вводить в кровь больным при неэффективности применения наперстянковых сердечных гликозидов, при острой сердечнососудистой недостаточности, остром инфаркте миокарда, тяжелых формах хронической недостаточности кровообращения и т. д. Ландыш майский (Convallaria majalis L.), л. закавказский (C. transcaucasica Utkin ex Grossh.), л. японский (C. keiskei Miq.) — сем. Ландышевые (Convallariaceae). Многолетние травянистые растения. Благодаря горизонтальному корневищу с корнями сохраняются зимой в почве. Весной от корневища отрастают два или четыре листа удлиненно-эллиптической формы с дугонервным жилкованием и цветочная стрелка высотой 10—30 см, несущая редкую одностороннюю поникающую кисть белых душистых цветков диаметром до 1 см. Цветут в апреле — мае, плоды (оранжево-красные ягоды) созревают в августе. Ландыш майский растет в смешанных и широколиственных лесах европейской части СНГ; в Крыму и на Кавказе произрастает л. закавказский, а в Забайкалье, Приамурье и Приморском крае — л. японский, которые отличаются от л. майского более крупными листьями и большими по размеру цветками. Траву и цветки ландыша заготавливают во время цветения, а листья — после цветения. ЛРС сушат при температуре 40—50 °С в тени. Нелекарственной примесью могут быть: купена лекарственная (Polygonatum officinale All.) и грушанка круглолистная (Pyrola rotundifolia L.). Convallariae flores — ландыша цветки. ЛРС — смесь соцветий с остатками цветоносов длиной до 20 см, цветков и иногда кусочков цветоносов. Цветонос ребристый, голый, толщиной до 1,5 мм, с односторонней рыхлой кистью из 3—12 (до 20) желтоватых цветков. Цветки обоеполые, с венчиковидным колокольчатым околоцветником, сростнолепестные, с шестью короткими отогнутыми зубчиками, на коротких цветоножках, с пленчатыми линейными прицветниками. Тычинок шесть, на коротких нитях, прикрепленных к основанию околоцветника. Завязь верхняя, трехгнездная, столбик с расширенным трехлопастным рыльцем. Цветоносы светло-зеленые, цветки желтоватые. Запах слабый. Биологическую активность цветков ландыша и других видов ЛРС из ландыша контролируют ежегодно. Convallariae folia — ландыша листья. Листья цельные, реже изломанные, эллиптической или ланцетовидной формы с заостренной верхушкой, суживающиеся у основания и постепенно переходящие в длинные влагалища; отдельные или соединенные по два—три. Длина листьев до 20 см, ширина до 8 см. Край листа цельный, жилкование дугонервное. Листовая пластинка тонкая, ломкая, с голой, слегка блестящей поверхностью. Цвет листьев зеленый, реже коричневато-зеленый. Convallariae herba — ландыша трава. ЛРС — смесь цельных и изломанных тонких буровато-зеленых листьев, соцветий с цветоносами, отдельных цветков и кусочков цветоносов. Листья длиной 5—20 см и шириной 3—8 см, эллиптические, цельнокрайние, с почти параллельными жилками, вверху заостренные, в основании суживающиеся в длинные, замкнутые влагалища. Соцветие — односторонняя рыхлая кисть из 3—12 шестилепестных колокольчатых желтоватых цветков. Главные действующие вещества — кардиотониче- ские гликозиды, производные агликона строфантидина и строфантидола, но генин — локундьозид наперстянкового типа. Выявлено около 20 кардио- гликозидов, а также флавоноиды (производные кверцетина, кемпферола, лютеолина), стероидные сапонины, эфирное масло (в цветках). Содержание сердечных гликозидов в цветках составляет до 5 %. Из листьев, цветков и травы ландыша получают ЛС Коргликон и Конвафлавин (в состав последнего кроме кардиогликозидов входят флавоноиды, он обладает также спазмолитическим и желчегонным действием). Коргликон оказывает успокаивающее действие и усиливает сокращения сердечной мышцы, в тканях не куммулируется. Применяют при неврозах сердца, кардиосклерозе, острой и хронической сердечной недостаточности. Настойка ландыша, а также настойка ландыша, валерианы, белладонны и ментола в составе капель Зеленина оказывают на сердце успокаивающее и слабое тоническое действие. Горицвет весенний, или адонис весенний (Adonis vernalis L.) — сем. Лютиковые (Ranunculaceae). Многолетнее травянистое растение с коротким многоглавым корневищем, которое весной образует несколько ветвистых полулежащих стеблей, голых у основания и облиственных вверху. Листья очередные, сидячие, многократно рассеченные на линейно-шиловидные голые сегменты. Цветки верхушечные, одиночные, крупные, желтые. Появляются в числе первых весенних цветов в апреле — мае. Горицвет весенний естественно произрастает в лесостепной и степной зонах от Венгрии до Сибири, в Беларуси культивируется в основном для фармацевтических нужд. Траву срезают на высоте 5—10 см от почвы, сушат на продуваемых стеллажах под навесом либо в сушилках при температуре 40—50 °С. В качестве ЛРС допускается использовать траву других видов горицвета: г. сибирского (A sibiricus Patr. ex Ledeb.), г. амурского (A. amurensis Rql. Et Radde), г. волжского, г. пламенного, г. летнего, г. золотистого, г. туркестанского (A. turkestanicum (korsh.) Adolf.). Adonidis vernalis herba — горицвета весеннего трава. ЛРС — цельные или частично измельченные облиственные стебли с цветками или без них, реже с бутонами или плодами разной степени развития, иногда частично осыпавшимися. Стебли, срезанные выше коричневых низовых чешуевидных листьев, длиной от 10 до 35 см и толщиной до 0,4 см, простые или маловетвистые. Листья очередные, сидячие, полустеблеобъемлющие, округлые или широкоовальные, пальчато-рассеченные на пять долей, из которых две нижние — перисто-рассеченные, три верхние — дважды перисто-рассеченные; доли листьев линейные, у верхушки шиловид- нозаостренные, цельнокрайние, длиной от 0,5 до 2 см, шириной от 0,5 до 1 мм. Цветки на верхушке стеблей одиночные, правильные, около 3,5 см в диаметре, свободнолепестные, с 5—8 чашелистиками, с 15—20 лепестками, с многочисленными тычинками и пестиками. Чашелистики яйцевидные, вверху притупленные, с редкими зубцами, опушенные, длиной 12—20 мм, шириной около 12 мм, легко опадают. Лепестки эллиптические, на верхушке суженные, зазубренные. Плод сборный, овальный, состоит из многочисленных сухих орешков, сидящих на цилиндрическом буроватом цветоложе. Биологическую активность сырья проверяют ежегодно. В траве г. весеннего содержится ряд карденолидов, но основными являются адонитоксин, цимарин, К-строфантин, адонитоксол и другие кардиогликозиды. Имеются сапонины, фитостерины, флавоноиды, дубильные вещества, органические кислоты. Трава г. весеннего применяется для получения настоя, сухого экстракта, который входит в состав таблеток Бехтерева. Получаемые из травы сердечные гликозиды, в частности адонитоксин, входят в состав ЛС Адонизид, Адонис-бром, а Адонизид также является компонентом комплексного ЛС Кардивален. ЛС из горицвета применяют при сравнительно легких формах недостаточности кровообращения. В терапевтических дозах эти препараты не кумулируются. Кроме того, они используются как успокаивающие средства при терапии неврозов и вегетодистонии, а также для лечения почечных заболеваний с симптомами недостаточности сердечно-сосудистой системы. Настой травы горицвета и получаемые из него ЛС нельзя применять при беременности. Желтушник раскидистый (серый) (Erysimum diffusum Ehrh., или (E. canescens Roth.) — сем. Капустные (Brassicaceae). Двулетнее травянистое растение высотой 30—80 см. Стеблей несколько, ветвистые. Листья очередные, линейно-продолговатые или ланцетовидные, цельнокрайние. Растение выглядит сероватым из-за покрывающих его коротких прижатых волосков. Цветки собраны в верхушечные рыхлые кисти, венчик четырехлепестной, бледно-желтый, длиной 10—14 мм, вдвое длиннее чашечки. Плод — четырехгранный стручок длиной до 7 см, направлен косо вверх или параллельно стеблю. Цветение происходит в мае — июне. Желтушник раскидистый произрастает в лесостепной зоне европейской части СНГ, в Беларуси культивируется. Вместе с травой ж. раскидистого (серого) допускается использование травы ж. левкойного (E. cheiranthoides L.), произрастающего как сорняк, который представляет собой однолетнее травянистое растение с ветвистым стеблем и очередными продолговато-ланцетными цельнокрайними или зубчатыми листьями ярко-зеленой окраски; все растение также опушено короткими прижатыми волосками. Цветки в верхушечных кистях с ярко-желтыми лепестками длиной 5 мм, вдвое длиннее чашелистиков. После отцветания они образуют стручки длиной 1—3 см на отклоненных ножках, направленные косо вверх. Заготовку ЛРС ведут во время цве-тения растений. Траву скашивают, сразу собирают и сырую немедленно прессуют. Erysimi diffusi herba recens (Erysimi canescentis herba recens) — желтушника раскидистого трава свежая (желтушника серого трава свежая). Сырье состоит из стеблей длиной до 30 см с листьями, цветками, незрелыми плодами. Цвет травы серо-зеленый. Запах слабый, вкус сырья не определяют (ядовито!). Проверяют активность свежего ЛРС. Erysimi diffusi semina (Erysimi canecentis semina) — желтушника раскидистого семена (желтушника серого семена). Зрелые семена яйцевидноэллиптические, длиной 1,5—1,8 мм и шириной 0,5—0,9 мм, с гладкой блестящей желтовато-коричневой поверхностью, без запаха. На срезе под оболочкой внутри семени видны крупный согнутый зародыш и семядоли с алейроновыми зернами и каплями масла в клетках. Надземная часть ж. раскидистого (серого) содержит кардено- лиды строфантового типа (листья — 1—1,5 %, стебли — 0,5%, семена — 2—6 %), в которых генином является строфантин, а в гликозиль- ной части находится дигитоксоза, присутствующая у сердечных гликозидов наперстянки, но конечным звеном цепочки является глюкоза. Основные кардиогликозиды травы желтушника — эризимозид и эризимин. Присутствуют также флавоноиды (производные изо- рамнетина и кверцетина). В семенах имеются эризимозид (2,5 %), гликозиды строфантина (1,4 %), масло (30—40 %) с содержанием олеиновой (50 %), эруковой (30 %), линоленовой (5 %) и других непредельных жирных кислот. Сок ж. раскидистого (серого) входит в состав ЛС Кардиовален (вместе с экстрактом плодов боярышника, корней валерианы, адонизидом, камфорой, натрия бромидом) и применяется при ревматических пороках сердца, кардиосклерозе с нарушением кровообращения, неврозах, аритмии, стенокардии. Семена ж. раскидистого (серого) используют также для приготовления ЛС Строфантидина ацетат (получаемого главным образом из семян строфанта Комбе). В медицине препараты желтушника применяются, как и строфантин, при острой и хронической сердечной недостаточности II—III степени с тяжелым нарушением кровообращения.

40. Сапонины: классификация, строение.

Ответ. Сапонины — природные гликозиды (сапонизиды, сапозиды), характерными свойствами которых являются: высокая поверхностная активность (способность при встряхивании образовывать пену, т. е. это детергенты); гемолитическая активность, обусловливающая образование пор в клеточной мембране эритроцитов и, как следствие, выход гемоглобина в плазму крови; токсичность для холоднокровных животных, вызванная способностью сапонинов нарушать функционирование жабр, что обусловило применение некоторыми племенами ЛР, содержащих сапонины, при ловле рыбы. По структуре молекул сапонины условно разделяют на стероидные и тритерпеновые (пента- и тетрациклические). Стероидные сапонины (фуро- и спиростанолового типа) — большая группа природных соединений. Особенностью агликонов стероидных сапонинов является присутствие в молекуле 27 атомов углерода и атома кислорода у С16 (в кольце Е), а иногда также в положении у С1, С2, С5, С12. В положении С5—С6 у многих имеется двойная связь (например, в молекуле диосгенина, агликона диосцина). В зависимости от ориентации (поворота) спирокетального кольца F стероидные сапонины подразделяют на соединения «нормального» ряда и изо-ряда. Стероидные сапонины и их гликозиды характерны для следующих семейств: Диоскорейные, Лилейные, Норичниковые, а также обнаружены у растений семейств Бобовые, Лютиковые, Пасленовые, Парнолистиковые. По структуре молекул к стероидным сапонинам близки соединения, именуемые фитоэкдизонами (экдистероидами). В основе строения молекул экдизонов лежит циклопентанпергидрофенан- треновый скелет, к которому в С17-положении присоединена алифатическая цепочка из восьми углеродных атомов. По физико-химическим свойствам фитоэкдизоны — твердые кристаллические вещества, хорошо растворимые в этаноле, метаноле, ацетоне, этилацетате и плохо — в хлороформе, нерастворимые в петролейном эфире, оптически активные. Впервые фитоэкдизоны были обнаружены у насекомых и ракообразных в связи с тем, что они контролируют метаморфоз и линьку этих беспозвоночных животных. Затем их нашли в растениях — папоротниках, таких как тайваньский папоротник пайючин (Podocarpus nakai), серпуха сухоцветная (Seratula xeranthemoides); у последнего вида их содержание было около 2 %. Тритерпеновые сапонины. Их агликоны представлены тетра- или пентациклическими тритерпеноидами: (С5Н8)6, или С30Н48. Тритерпеноидные сапонины распространены в растительном мире шире, чем стероидные. Особенно богаты ими семейства Аралиевые, Бобовые, Гвоздичные, Конскокаштановые, Розоцветные, Синюховые. В отличие от стероидных сапонинов, которые встречаются главным образом в растениях, произрастающих в сухом и жарком климате, тритерпеновые сапонины обнаруживаются у растений степей, лесостепей и умеренных широт. В растениях сапонины находятся в растворенном виде в клеточном соке (вакуоли). Большинство пентациклических тритерпеновых сапонинов относится к пяти типам: а-амирина, Р-амирина, лупеола, фриделина и гопана. В природе наиболее широко представлены продукты Р-амирина — олеаноловая кислота, производные которой имеются у аралии, синюхи, солодки, патринии и многих других ЛР. Производные а-амирина, представителем которых является урсоловая кислота и ее продукты, выделены из растений семейств Брусничные, Вересковые, Кутровые. Производные лупеола, такие как бетуловая кислота, бетулин, выделены из березы. Тритерпеновые сапонины могут быть нейтральными и кислыми. Кислый характер рН обусловлен присутствием карбоксильной группы в агликоне или уроновых кислот в гликозильной части молекулы. Гидроксильные группы могут быть ацилированы уксусной кислотой (пропионовой или другими). Сахаристые остатки могут присоединяться к агликону по гидроксильной или карбоксильной группам; гликозильная цепочка может быть линейной или разветвленной.

41. Сапонины: физико-химические свойства. Методы выявления и выделение из лекарственного растительного сырья.

Ответ. Сапонины — природные гликозиды (сапонизиды, сапозиды), характерными свойствами которых являются: высокая поверхностная активность (способность при встряхивании образовывать пену, т. е. это детергенты); гемолитическая активность, обусловливающая образование пор в клеточной мембране эритроцитов и, как следствие, выход гемоглобина в плазму крови; токсичность для холоднокровных животных, вызванная способностью сапонинов нарушать функционирование жабр, что обусловило применение некоторыми племенами ЛР, содержащих сапонины, при ловле рыбы По физико-химическим свойствам сапонины — это бесцветные или желтоватые аморфные гигроскопичные вещества. В кристаллическом виде получены отдельные гликозиды сапонинов, которые содержат не более четырех моносахаридов. Как стероидные, так и тритерпеновые сапониновые гликозиды (сапонизиды, или сапозиды) растворимы в воде, а также в разведенных водой (60—70 %) низших спиртах (этаноле, метаноле) даже на холоде. В более высоких концентрациях этих спиртов (80—95 %) только при нагревании и при охлаждении выпадают в осадок. Растворимость в воде определяется количеством моносахаридов в гликозидной части молекулы сапонизидов и увеличивается с возрастанием их числа. Гликозиды сапонинов с 1—4 моносахаридами обычно плохо растворимы в воде. Как правило, сапонизиды при растворении в воде образуют коллоидные растворы. В растворе оптически активны (за счет гликозильных остатков). Сапонизиды не растворимы в эфире, бензоле, ацетоне, хлороформе и других органических растворителях. Многие сапонины образуют молекулярные комплексы с солями тяжелых металлов, фенольными веществами, стеринами, липидами, белками. При этом их гликозильные части определяют способность связывания, а сапогенины гемолитически не активны и не токсичны для рыб. Из водных растворов сапонины осаждаются солями тяжелых металлов, гидроксидами бария (или магния), белками и таннинами; из спиртовых растворов — неполярными органическими растворителями (диэтиловым эфиром, этилацетатом и др.), стеринами, липидами. Под действием кислот и ферментов гликозиды сапонинов распадаются на агликон и остаток сахара. Сапонины обладают жгучим раздражающим вкусом и вызывают чихание и покраснение глаз, аллергию. Некоторые сапонины могут быть не растворимы в воде, плохо пениться, не проявлять гемолитических свойств. Стероидные сапонины образуют комплексы и осадки с высшими спиртами и холестерином. Стероидные сапонины в основном рН-нейтральны, а тритерпеновые — в основном кислые. Сапогенины — кристаллические вещества с четкой температурой плавления (в отличие от гликозидов, которые не имеют определенной температуры плавления). Сапогенины, как правило, растворимы в спиртах, диэтиловом эфире, ацетоне, бензоле, но не растворимы в воде. Выделение сапонинов из ЛРС. Предварительно ЛРС обрабатывают петролейным эфиром или четыреххлористым углеродом — для разрушения комплекса сапонинов со стеринами, которые не растворимы в спиртах. Из ЛРС сапонины экстрагируют водой, этанолом, метанолом или их водными растворами. Водой в основном извлекают гликозиды (чем больше гликозильных остатков, тем растворимость в воде больше). Поэтому обычно 60—70 % спиртом извлекаются и гликозиды, и агликоны сапонинов. Из водных вытяжек различные тритерпеновые сапонины осаждают тяжелыми металлами (кислые сапонины с металлами образуют соли, которые затем разлагают серной или угольной кислотами). Если образуются холестериновые комплексы, проводят извлечение холестерина бензолом, если белковые комплексы — проводят разрушение комплекса кипячением с этанолом (сапонины переходят в раствор, белок остается в осадке). Из танниновых комплексов сапонины освобождают кипячением с оксидом цинка: таннины остаются в осадке в виде комплекса с цинком, сапонины переходят в раствор. Полученные фракции сапонинов разделяют на индивидуальные вещества с помощью колоночной хроматографии насиликагеле, оксиде алюминия, активированном угле, гельфильтрацией на сефадексе и т. п. Методы обнаружения сапонинов в ЛРС основаны на использовании трех различных свойств этих веществ: физических, химических и биологических. Реакции, основанные на физических свойствах сапонинов. Гликозиды сапонинов обладают детергентной активностью, что связано с наличием в одной молекуле гидрофильного (углеводная часть) и гидрофобного остатков (агликон). Образование пены обусловлено тем, что сапонины понижают поверхностное натяжение на границе двух сред: воды и воздуха, воды и жира, т. е. они способны эмульгировать жиры. Реакция пенообразования. При встряхивании в пробирке водного извлечения, содержащего сапонины, образуется довольно устойчивая пена. По характеру и степени пенообразования примерно определяют групповую принадлежность сапонинов (стероидную или тритерпеновую). Для проведения этой реакции водные экстракты из ЛРС делят на две части: первую подкисляют до рН ~ 1, вторую подщелачивают до рН = 13. Оба раствора в пробирке встряхивают. Наблюдают образование столбов пены. Если в пробирках образуются примерно равные по величине и стойкости столбики пены, то ЛРС содержит тритерпеновые сапонины, если же столбики пены больше при щелочном растворе рН, чем при кислом, то сырье содержит стероидные сапонины. Реакции, основанные на химических свойствах сапонинов. Это реакции осаждения сапонинов и цветные реакции. Реакции осаждения сапонинов: из водных растворов сапонины осаждаются Ba(OH)2, Mg(OH)2, CuSO4, ацетатом Pb, причем тритерпеновые сапонины осаждаются средним ацетатом свинца, а стероидные — основным; из спиртовых экстрактов стероидные и тритерпеновые сапонины осаждаются спиртовым раствором холестерина в виде комплексов (холестеридов). Реакции окрашивания сапонинов: к 2 мл водного извлечения прибавляют 1 мл 10 % NaNO 1 каплю концентрированной H2SO4. В результате появляется кроваво-красное окрашивание; к 2 мл водного извлечения прибавляют 2 мл хлороформа и 5 капель концентрированной H2SO4 — возникает желтое, переходящее в темнокоричневое окрашивание в нижнем (хлороформном) слое; реакция Лафона: к 2 мл водного извлечения прибавляют 1 мл этанола, 1 мл концентрированной H2SO4, затем каплю раствора Fe2(SO4)3. При нагревании пробирки в ней появляется сине-зеленое окрашивание. Эти три реакции положительны как на стероидные, так и на тритерпеновые сапонины. Только на стероидные сапонины позитивны следующие реакции: реакция Либермана — Бурхардта (на стероидное ядро молекулы, как и у кардиогликозидов): к 3 мл водного извлечения из ЛРС, выпаренного досуха, добавляют каплю ледяной уксусной кислоты и затем смесь (50:1) уксусного ангидрида и концентрированной H2SO4. Через 5 мин появляется розовое окрашивание, переходящее в зеленовато-синее; реакция Санье: к 2 мл 1% раствора сурьмы (III) хлорида добавляют несколько капель концентрированной H2SO4, содержащей уксусный ангидрид. В результате взаимодействия реагентов со стероидной частью молекулы сапонинов появляется желтое окрашивание. Существует вариант реакции Санье для выявления сапонинов на хроматограммах. Для этого хроматограммы после разделения суммы сапонинов опрыскивают 5 % спиртовым раствором ванилина, 10 мин нагревают в сушильном шкафу при температуре 100—110 °С, затем опрыскивают 50 % раствором H2SO4 снова 10 мин нагревают в сушильном шкафу — пятна гликозидов стероидных сапонинов окрашиваются в желтые тона. Для хроматографического выявления тритерпеновых сапонинов хроматограммы опрыскивают 20 % раствором H2SO4 и 10 мин нагревают в сушильном шкафу при 110 °С, в результате чего сапонины (особенно аралозиды) проявляются в виде пятен вишневого цвета. Реакции, основанные на биологических свойствах сапонинов. Реакция гемолиза эритроцитов. Для ее проведения используют кровь (или эритроциты крови). Необходимо, чтобы в крови было незначительное содержание холестерина, присутствие которого может сдерживать гемолиз. Кроме того, требуется, чтобы рН был физиологическим (около 7,4), для чего взвесь эритроцитов разводят 0,9 % раствором NaCl. После смешивания равных объемов извлечения из ЛРС (содержащего сапонины) и взвеси эритроцитов в физиологическом растворе через некоторое время кровь становится прозрачной и ярко-красной — происходит гемолиз эритроцитов и выход гемоглобина в среду. Следует отметить, что различные сапонины имеют разный гемолитический индекс. Например, требуется 1 г сапонинов синюхи обыкновенной для гемолиза 10 000 мл крови и 1 г сапонинов диоскореи ниппонской для гемолиза 600 мл крови, т. е. гемолитический индекс у сапонинов синюхи выше, чем у сапонинов диоскореи. У солодки голой и конского каштана сапонины (сапонозиды) гемолитической активностью не обладают, а их агликоны — обладают. Количественное определение содержания сапонинов в ЛРС. Единого метода количественного определения сапонинов пока нет. Ранее широко применяли гравиметрический метод, основанный на осаждении сапонинов холестерином, солями свинца, меди, магния, гидроксидом бария или концентрированными малополярными растворителями. Однако этот метод неспецифичен и дает завышенные результаты. Используются также методы спектрофотометрии. Например, в первом методе берут порцию стероидных сапонинов, извлекаемых этанолом из диоскореи, прибавляют реактив Эрлиха (1 % раствор п-диметиламинобензальдегида в четырех- нормальном спиртовом растворе HCl), инкубируют 2 ч при 58 °С, охлаждают и измеряют оптическую плотность раствора. В другом методе спектрофотометрирование раствора проводят после осаждения глицерризиновой кислоты из ацетонового извлечения солодки голой 25 % раствором аммиака. В третьем методе на хроматограммах в парах ортофосфорной кислоты стероидные сапонины дают розовые пятна, ярко флуоресцирующие в УФ-свете, что используют для флуориметрии.