Михаэлиса – Ментен и Лайнуивера – Берка, константа Михаэлиса, кривая субстратного насыщения. Конкурентные и аллостерические модуляторы.
6. Локализация ферментов в клетке. Ферменты клеточных органелл (ядро, митохондрии, рибосомы, лизосомы, аппарат Гольджи, эндоплазматическая сеть, цитоскелет, клеточный центр).
Письменное домашнее задание
О б я з а т е л ь н о е
1.Составьте структурную формулу трипептида H2N–Val–Cys–Asp–COOH
иопределите, в какой области рН находится его изоэлектрическая точка.
2.При формировании третичной структуры гормона инсулина оказываются пространственносближенными следующиефрагментыполипептидной цепи:
Leu–Val–Cys–Gly–Glu–Arg,
Leu–Glu–Asn–Tyr–Cys–Asp.
Какиетипы связей междубоковыми радикалами аминокислотмогутпри этом образоваться?
3.На схеме представлено 5 химических реакций, протекающих в организме,
вкоторых принимают участие аспарагиновая кислота (аспартат) и аспарагин.
|
|
COOH |
|
|
|
|
|
|
COOH |
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CH |
|
NH2 |
|
|
|
C |
|
H |
|
|
|
|
NH3 |
АТФ АДФ + ФН |
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
H |
|
|
|
|
|
|
|
CH2 |
||||||||
|
|
C |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
|
|
|
COOH |
|
|
NH3 |
|
C |
|||||||||
|
|
|
|
|
|
NH2 |
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
Фумарат |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
NH3 |
Н2О |
|
|
|
Аспарагин |
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
COOH |
|
|
|
COOH |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
COOH |
|
|
|
|
|
|
COOH |
|||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
C |
|
O |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
CH2 |
NH2 |
|
|
|
|
CH |
|
NH2 |
|
|
|
C |
|
O |
|
|
CH |
|
NH2 |
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
+ |
|
|
(CH ) |
|
|
|
|
|
|
+ |
|
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
CH |
|
|
|
CH |
|
|
|
|
|
|
|
|
CH2 |
(CH ) |
|
|||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
2 |
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||
|
2 |
|
CO2 |
|
|
2 |
|
|
|
|
COOH |
|
|
|
COOH |
|
|
|
2 |
|
2 |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
COOH |
|
COOH |
|
|
|
|
|
|
|
|
COOH |
|||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
-Кетоглутарат |
|
Оксалоацетат |
|
||||||||||||||||||||||||
Бета-аланин |
|
|
|
Аспратат |
|
Глутамат |
||||||||||||||||||||||||||
Запишите уравнения реакций, укажите классы катализирующих их ферментов и дайте название каждому ферменту по систематической номенклатуре.
4. Фермент дипептидаза из слизистой оболочки тонкой кишки катализирует реакциюгидролиза дипептида глицилглицина. Вследующей таблицепредставле-
25
на зависимость скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата в отсутствие и в присутствии модулятора – трасилола:
Концентрация субстрата, |
Скорость реакции, ммоль/с |
|
ммоль/л |
В отсутствие трасилола |
В присутствии трасилола |
|
||
0,1 |
0,33 |
0,06 |
0,5 |
1,00 |
0,28 |
1,0 |
1,33 |
0,50 |
2,0 |
1,6 |
0,80 |
4,0 |
1,78 |
1,14 |
8,0 |
1,88 |
1,45 |
Задание:
а)напишитеуравнениереакции гидролиза дипептида; б)постройтеграфик зависимости скорости реакции отконцентрации субстра-
та в обоих случаях в координатах Михаэлиса – Ментен и Лайнуивера – Берка; в) определите максимальную скорость реакции и константу Михаэлиса; г) какой вид модуляции активности фермента имеет место в данном случае? д) с каким участком молекулы фермента связывается модулятор?
Д о п о л н и т е л ь н о е
1.На схеме представлено 5 химических реакций, протекающих в организме,
вкоторых принимают участие глутаминовая кислота и глутамин.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
COOH |
|
|
|
|
|
|||||
COOH |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
НАДН |
|
НАД+ |
|
NH |
АТФ АДФ + Ф |
|
|
|
|
CH NH2 |
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||
C |
|
O |
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
|
|
|
|
Н |
|
|
|
|
|
(CH2)2 |
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
(CH2)2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
|
|
|
|
|
|||||
|
|
COOH |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
C |
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
NH3 |
|
|
Н2О |
|
|
|
|
|
|
|
|
NH3 |
|
|
Н2О |
|
|
|
|
|
|
NH2 |
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
-Кетоглутарат |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Глутамин |
|
|
|
||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
COOH |
|
COOH |
|
|
|
COOH |
COOH |
|||||||||||||||||||||||
|
CH2 |
NH2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
NH2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
CH |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
C |
|
O |
|
|
|
C |
|
|
O |
+ |
|
|
CH |
|
NH2 |
||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
) |
|
|
+ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
(CH |
|
|
|
|
|
|
|
(CH |
|
|
CH |
|
|
|
(CH ) |
|
CH |
|
|
|
||||||||||||||||||||||
|
2 |
|
2 |
CO2 |
|
|
2 |
|
|
2 |
|
|
|
|
3 |
|
|
|
|
|
|
2 |
2 |
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
||||||||||
|
COOH |
|
|
COOH |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
COOH |
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||||
-Аминомасляная |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
Глутамат |
|
Пируват |
|
|
-Кетоглутарат |
Аланин |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
кислота |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
26
Запишите уравнения реакций, укажите классы катализирующих их ферментов и дайте название каждому ферменту по систематической номенклатуре.
2. Фермент фосфофруктокиназа катализирует реакцию превращения фрукто- зо-6-фосфата во фруктозо-1,6-дифосфат. В таблице представлена зависимость скорости ферментативной реакции от концентрации фруктозо-6-фосфата в отсутствие и в присутствии модулятора – цитрата (лимонной кислоты):
Концентрация |
Скорость реакции, мкмоль/с |
|
фруктозо-6-фосфата, |
В отсутствие цитрата |
В присутствии цитрата |
мкмоль/л |
||
0,5 |
1,7 |
0,7 |
1,0 |
2,5 |
1,0 |
5,0 |
4,2 |
1,7 |
10,0 |
4,5 |
1,8 |
15,0 |
4,7 |
1,9 |
20,0 |
4,8 |
1,9 |
Задание:
а)постройтеграфикзависимости скорости реакции отконцентрации субстрата в обоих случаях в координатах Михаэлиса – Ментен и Лайнуивера – Берка;
б) определите максимальную скорость реакции и константу Михаэлиса; в) какой вид модуляции активности фермента имеет место в данном случае? г) с каким участком молекулы фермента связывается модулятор?
Типовой вариант тестовогоконтроля потеме «Ферменты»
Инструкция: при отсутствии дополнительных указаний в вопросе теста выберите один верный вариант ответа.
1. Выберите название фермента, катализирующего следующую реакцию:
|
COOH |
+ H2O |
COOH |
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
H + NH3 |
|
H2N |
|
|
|
H |
H2N |
|
|
||
|
|
|
|
|
|||||
|
|
CH2 |
|
|
CH2 |
||||
|
C |
|
|
O |
|
COOH |
|||
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
||||||
NH2
а) аспарагин: аммиак лигаза; б)аспарагинаминотрансфераза;
27
в) аспарагин:аммиак лиаза; г) аспарагин: Н2О оксидоредуктаза;
д) аспарагин: аммиак гидролаза.
2.Фермент липаза катализирует гидролиз триглицеридов в жировой ткани. Под действиемдругогофермента –протеинкиназы– кмолекулелипазыприсоединяются фосфатные группы, что увеличивает активность липазы. Как называется такой тип регуляции активности фермента:
а)конкурентный; б) аллостерический;
в)ковалентная модификация; г)индукция-репрессия.
3.Выберите общее свойство ферментов и небиологических катализаторов: а) активность регулируется активаторами и ингибиторами; б) действуют только при низких температурах; в) способны ускорять реакции до 1017 раз;
г) обладают высокой специфичностью к субстрату; д) снижают энергетический барьер реакции.
4.Какую роль играют водорастворимые витамины в ферментативном ката-
лизе:
а) являются простыми ферментами; б) являются сложными ферментами;
в) служат предшественниками коферментов; г) служат аллостерическими центрами ферментов;
д) являются конкурентными ингибиторами ферментов.
5.В каких клеточных органеллах содержатся ферменты, отвечающие за репликациюирепарациюДНК:
а) эндоплазматическая сеть; б) ядро; в) рибосомы;
г) аппарат Гольджи; д) лизосомы.
6.Какая характеристика фермента остается неизменной при денатурации:
а) растворимость в воде; б) биологическая активность; в)константа Михаэлиса; г) первичная структура; д) вязкость раствора.
7.С активным центром фермента, содержащим серин, глутаминовуюкислоту
ивалин, наиболее вероятно будет взаимодействовать:
28
а) |
|
|
COO |
б) |
|
|
CH3 |
|
в) |
|
COO |
г) |
|
CH |
|||||
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
+ |
3 |
||||||
|
|
|
|
CH3 |
|
|
|
|
COO |
|
+ |
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
NH3 |
|
|
|
NH |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
+ |
|
|
|
|
|
OH |
|
|
|
|
CH3 |
3 |
|||||||
|
|
|
|
NH |
3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CH |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
||||
8.Какой ученый предложилтеорию,согласнокоторой впроцессеферментативногокатализа происходитвзаимноеприспособлениефермента и субстрата погеометрическому и электронному строению:
а) Э. Фишер; б) Л. Михаэлис; в) М. Ментен; г) Д. Кошланд;
д) Э. Корниш-Боуден.
9.Вставьте пропущенные слова (3 ответа) в предложение: «Обратимый конкурентный ингибитор структурно подобен …, присоединяется к … центру фермента и вытесняется из него избытком …»
10. Напишитеназванияи номера классов ферментов (6ответов), катализирующихреакции 1, 2и 3:
|
|
|
|
|
|
-Кетоглутарат |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
НАДН2 |
|||||
|
|
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
COOH |
|
COOH |
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
|
|
||||
H2N |
|
C |
|
H |
|
|
|
C |
|
O |
|
|
C |
|
O |
|
|
|
CH2OH |
||||
|
|
|
|
|
|
_ |
CO2 |
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
CH3 |
CH3 |
|
|
CH |
3 |
|
|
|
CH3 |
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
Глутамат |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
НАД+ |
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
29