Материал: vse_metody_MIKROB

Чистая культура C.botulinum. Окраска по Граму.

Культуральные свойства. Анаэробы, растут на соответствующих питательных средах.

Антигенная структура: в зависимости от типа продуцируемого токсина, выделяют 8 сероваров возбудителя. Заболевания у человека чаще вызывают серовары

A, B, E и F.

Факторы патогенности: основным фактором патогенности является продуцируемый возбудителем экзотоксин – это самый сильный из бактериальных токсинов, летальная доза для человека – 0,005 мг. Несмотря на антигенные различия, биологическая активность экзотоксинов различных сероваров одинакова. Ботулотоксин является типичным нейротоксином.

Пути заражения:

алиментарный (основной) – при употреблении рыбных, мясных и овощных консервов домашнего приготовления, копченой и вяленой рыбы. У детей младшего возраста заражение может происходить при употреблении меда, соков и сиропов домашнего приготовления;

контактный (встречается редко) – при попадании почвы со спорами возбудителя в рану (раневой ботулизм).

Патогенез: при алиментарном пути инфицирования ботулотоксин всасывается в желудке и в верхних отделах тонкой кишки, с током крови попадает в органы и ткани, вызывая их поражение. Наиболее чувствительна к действию токсина нервная ткань. Токсин блокирует выброс ацетилхолина в синапсах мотонейронов спинного и продолговатого мозга с развитием бульбарного (расстройство глотания и речи) и паралитического синдрома.

Клинические проявления: начало заболевания острое. У больных возникает тошнота, рвота, диарея, затем появляются типичные симптомы: сухость во рту, нечеткость зрения, двоение в глазах (диплопия), опущение верхних век (птоз). Затем присоединяются нарушения глотания и речи. В заключительной стадии происходит расстройство дыхания за счет паралича дыхательной мускулатуры. Смерть наступает от остановки дыхания.

10

Микробиологическая диагностика направлена на обнаружение и определение типа токсина, а также выделение возбудителя.

Материал на исследование: кровь, фекалии, промывные воды желудка, рвотные массы, моча и остатки пищевых продуктов.

1. Определение типа ботулинового токсина:

Классический метод – реакция нейтрализации (РН) на белых мышах (см. учебнометодическое пособие «Учение об инфекции и иммунитете. Основы иммунологии»).

Экспресс-методы – РНГА по Рыцаю, ИФА.

2. Выделение возбудителя:

Бактериологический метод – посев исследуемого материала на соответствующие для анаэробов питательные среды.

Специфическое лечение: до установления типа токсина вводят поливалент-

ную антитоксическую сыворотку типов A, B, E, после установления типа токсина – моновалентную антитоксическую сыворотку.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА.

1.Изучение схемы бактериологического исследования отечной жидкости при подозрении на газовую гангрену.

I этап исследования.

Посев исследуемого материала на регенерированные среды КиттаТароцци, Вильсона-Блера. Посевы инкубируют при 370С 24-48 часов.

II этап исследования.

1.Изучение характера роста на питательных средах, приготовление мазков с окраской по Граму.

2.С целью выделения чистой культуры производят пересев со среды Китта-

Тароцци на кровяной агар Цейсслера. Посевы инкубируют при 370С 24 часа. III этап исследования.

1.Изучение характера роста на среде Цейсслера.

2.С целью определения -токсина (лецитиназа) производят посев чистой куль-

туры на желточный агар. Посевы инкубируют при 370С 24 часа. IV этап исследования.

1.Учет роста на желточном агаре.

2.Вывод (определение вида выделенной культуры).

2.Световая микроскопия готовых препаратов чистых культур бактероидов, возбудителей газовой гангрены, столбняка, ботулизма в окраске по Граму.

11

Занятие № 27

Тема. Микробиологическая характеристика возбудителей спирохетозных инфекций,

риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов.

Цель занятия. Изучить характеристику возбудителей сифилиса, боррелиозов, леп-

тоспирозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов, микробио-

логическую диагностику вызываемых ими заболеваний. Освоить ме-

тоды диагностики спирохетозов, хламидиозов и микоплазмозов.

I.Теоретические знания:

1.Характеристика возбудителя сифилиса, микробиологическая диагностика.

2.Характеристика возбудителей боррелиозов, микробиологическая диагностика.

3.Характеристика возбудителей лептоспироза, микробиологическая диагностика,

специфическая профилактика.

4.Возбудитель Ку-лихорадки, диагностика, специфическая профилактика.

5.Характеристика возбудителей сыпного тифа, серодиагностика.

6.Характеристика возбудителей хламидиозов, микробиологическая диагностика.

7.Характеристика микоплазм, вызываемые заболевания, микробиологическая ди-

агностика.

II.Практические навыки:

1.Световая микроскопия готовых препаратов чистой культуры трепонем, борел-

лий, лептоспир в окраске по Романовскому-Гимзе.

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Характеристика возбудителя сифилиса, микробиологическая диагностика.

Возбудитель сифилиса – Treponema pallidum.

Морфо-тинкториальные свойства: извитые бактерии (спирохеты) спиралевидной формы, имеют мелкие равномерные первичные завитки, спор и капсулу не образуют. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет. При неблагоприятных условиях (действие антибиотиков и антител) трепонемы способны сохраняться в виде цист или переходить в L-форму. Подвижность трепонем связана с наличием фибрилл, которые обеспечивают различные виды движения: сгибательное, поступательное, вращательное и др.

Чистая культура Treponema pallidum.

Культуральные свойства: строгие анаэробы, плохо растут на искусственных питательных средах.

Факторы патогенности:

факторы адгезии; факторы инвазии;

цисты и L-формы, способствующие длительной персистенции.

Сифилис – заболевание чаще передаваемое половым путем. Сифилис – «великий» имитатор», так как имеет множество клинических проявлений.

Источник инфекции: больной человек.

Пути заражения: половой, трансплацентарный, интранатальный, трансфузионный, контактно-бытовой.

Патогенез: возбудитель размножается в месте внедрения (слизистые оболочки половых путей, ротовой полости, прямой кишки), мигрирует в регионарные лимфатические узлы (первичный сифилис). Далее, при гематогенном и лимфогенном распространении трепонем, процесс генерализуется (вторичный сифилис). Последую-

2

щее размножение микробов в различных органах приводит к их грубым органическим поражениям (третичный сифилис).

Клинические формы.

Первичный сифилис проявляется формированием в месте внедрения возбудителя твердого шанкра (безболезненной язвы с плотным основанием), увеличением и воспалением регионарных лимфатических узлов (регионарный лимфаденит). Продолжительность течения первичного сифилиса – 6 недель. Затем эти признаки исчезают.

Вторичный сифилис характеризуется появлением на коже и слизистых оболочках розеолезно-папулезных высыпаний и генерализованным лимфаденитом. Эти проявления носят рецидивирующий характер. Продолжительность вторичного сифилиса колеблется от двух до пяти лет.

При отсутствии лечения возникает третичный сифилис. Во внутренних органах и костях наблюдается формирование гумм (висцеральный сифилис). Гуммы – это сифилитические гранулемы в виде плотных узлов, склонных к распаду и рубцеванию.

У пациентов без лечения и также у ВИЧ-инфицированных, может развиться нейросифилис – тяжелое поражение ЦНС (сифилитический менингит, прогрессивный паралич и др.).

При трансплацентарном инфицировании плода от больной матери развивается врожденный сифилис, который подразделяется на ранний (проявляется у детей до 2 лет) и поздний (проявляется у детей старше 2 лет).

Микробиологическая диагностика.

Для выявления возбудителя при первичном и вторичном сифилисе с клиническими проявлениями используют:

1.Бактериоскопический метод (темно-полевая микроскопия);

2.Иммуногистохимическое исследование (ИГХ);

3.ПЦР.

Для выявления антител основным методом диагностики является серологический. Существуют нетрепонемные и трепонемные тесты.

Нетрепонемные тесты: применяют для проведения массового скрининга населения. Это отборочные тесты. Предусматривают использование неспецифического антигена (например, экстракта липидов мышц бычьего сердца, так как он идентичен липоидному антигену трепонем).

Кнетрепонемным тестам относят:

1.Реакцию микропреципитации (РМП);

2.Другие экспресс-тесты: аналоги реакции микропреципетации (RPR, VDRL).

3