Материал: vse_metody_MIKROB

тикратные разведения надосадочной жидкости в тиогликолевом буфере в объе-

ме 4,5 мл от 10-1 до 10-9, используя при приготовлении каждого разведения от-

дельную пипетку.

Для определения количества микроорганизмов в исследуемом материале из разведений производят высевы (по 0,1 мл) на соответствующие пластинча-

тые среды (с распределением исследуемого материала стерильным стеклянным шпателем по поверхности среды) или в полужидкие среды в пробирках (табл.

4). Среды Блаурокка и Вильсона-Блера перед посевом регенерируют путем ки-

пячения в течение 40 минут на водяной бане (для удаления кислорода). Посев протея осуществляют в конденсационную воду скошенного МПА (по Шукеви-

чу). При этом практически вся скошенная часть остается незасеянной, чтобы в дальнейшем выявить ползучий рост протея, отличающегося высокой подвиж-

ностью. После посева агар для анаэробов помещают в анаэростат, откачивают воздух вакуумным насосом, заполняют анаэростат газовой смесью: 80% азота, 10% углекислого газа, 10% водорода. Посевы термостатируют при 370С в тече-

ние 2-7 суток.

II этап исследования.

18

Макро- и микроскопическое изучение характера роста на средах:

Бифидобактерии. На полужидкой среде Блаурокка образуют колонии в виде «тяжей», «гвоздиков» или шаровидных форм. Морфология: грамположи-

тельные палочки с раздвоением на одном или обоих концах. Спор и жгутиков не образуют.

Лактобактерии. На МРС растут серовато-белыми колониями. Морфоло-

гия: полиморфные грамположительные палочки от длинных и тонких до корот-

ких, неподвижные, спор не образуют.

Бактероиды. На агаре для анаэробов образуют мелкие и точечные коло-

нии от сероватого до черного цвета. Морфология: грамотрицательные неравно-

мерно окрашенные, полиморфные палочки. Могут варьировать от коккобакте-

рий до нитевидных форм. Есть подвижные и неподвижные варианты. Спор не образуют.

19

Эшерихии. На среде Эндо, как правило, образуют лактозопозитивные ко-

лонии, могут быть лактозонегативные варианты (не более 105 КОЕ/г).

Энтерококки (Е.faecalis, Е.faecium). На энтерококковом агаре образуют мелкие, выпуклые, сероватые колонии. Морфология: грамположительные кок-

ки, располагаются преимущественно попарно или в виде коротких цепочек; не-

подвижны, спор и капсул не образуют.

Стафилококки. Характеристика колоний и морфология описаны в учебно-

методическом пособии «Патогенные кокки и грамотрицательные бактерии.

Возбудители зоонозов».

Протеи. Характерной особенностью протея является ползучий рост (высо-

кая подвижность). Морфология: грамотрицательные палочки, средних разме-

ров, спор и капсул не образуют, подвижны.

20

Клостридии. Колонии клостридий, развивающиеся в глубине среды Виль-

сона-Блера, шаровидной или чечевицеобразной формы черного цвета. Морфо-

логия: грамположительные палочки со слегка закругленными концами, иногда с центрально или субтерминально расположенной спорой.

Дрожжеподобные грибы рода Candida. На среде Сабуро образуют вы-

пуклые, сметанообразные, блестящие, белого или кремового цвета. Морфоло-

гия: круглые или овальные почкующиеся клетки с нитями мицелия.

Подсчет микроорганизмов в 1 г фекалий.

Необходимо учитывать количество выросших колоний, степень разведения исследуемого материала и величину посевной дозы. Количественную оценку производят по формуле:

M= N x 10n+1,

где: М – количество микроорганизмов в 1 г фекалий;

N – количество выросших колоний; n – степень разведения фекалий.

21

Пример подсчета: на среде Эндо при посеве 0,1 мл из разведения фекалий

10-5 выросло 20 колоний эшерихий. По формуле определяют количество E.coli в 1 г фекалий: М=20 х 10(5+1) = 20 х 106 = 2,0 х 107 КОЕ/1 г.

Cравнение полученных результатов с нормативными показателями.

Выдача заключения на специальном бланке об изменениях в составе фе-

кальной микрофлоры и степени дисбактериоза.

№ анализа______

Ф.И.О.________________________________ Возраст _____________________

Дата поступления материала__________________________________________

При микробиологическом исследовании фекалий выделены:

Примечание: * – представители родов Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Proteus, Morganella, Providencia, Citrobacter и др.; ** – Pseudomonas, Acinetobacter и др.

Дата выдачи результата _____________.

22