Материал: vse_metody_MIKROB

II этап исследования. Учет результатов. КБ – диффузно-мутящий рост. Определение минимальной подавляющей концентрации антибиотика

(МПК), которая еще полностью задерживает рост бактерий (визуально – прозрачный МПБ).

Диско-диффузионный метод.

I этап исследования. На поверхность плотной питательной среды в чашке Петри произвести посев исследуемой культуры (S.aureus) сплошным газоном. Затем на поверхность среды с помощью стерильного пинцета поместить диски с различными антибиотиками: ампициллином, оксациллином, эритромицином, рифампицином, цефотаксимом. Диски помещать на равном (2 см) расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. Посевы поставить в термостат при 370С на 24 часа.

II этап исследования. Учет результатов производить путем измерения зон задержки роста микробов вокруг дисков, включая диаметр диска. На основании полученных результатов определить чувствительность S.aureus к конкретным антибиотикам, исходя из данных, указанных в инструкции (таблица 9).

Таблица 9 – Минимальные зоны задержки роста чувствительных и устойчивых культур S.aureus к различным антибиотикам

Занятие № 17

Тема. Микробиологическая характеристика стафилококковых, стрептококковых и пневмококковых инфекций. Возбудители и микробиологическая диагностика сепсиса.

Цель занятия. Изучить характеристику стафилококков, стрептококков, пневмококков, микробиологическую диагностику вызываемых ими заболеваний; возбудителей сепсиса и его микробиологическую диагностику. Изучить методики бактериологического исследования при гнойновоспалительных заболеваниях кожи и септической патологии. Изучить препараты для специфической терапии стафилококковых инфекций.

I.Теоретические знания:

1.Алгоритм ответа по частной бактериологии.

2.Характеристика стафилококков, вызываемые заболевания. Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций, специфическая терапия.

3.Характеристика стрептококков, вызываемые заболевания. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций.

4.Характеристика пневмококков, вызываемые заболевания. Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций.

5.Возбудители сепсиса. Микробиологическая диагностика.

II. Практические навыки:

1.Световая микроскопия препаратов из чистых культур стафилококков, стрептококков и пневмококков, окрашенных по Граму.

2.Световая микроскопия нативных препаратов из крови больного сепсисом, окрашенных по Граму.

3.Изучить схему проведения бактериологического исследования крови больного сепсисом. Ознакомиться с проведением учета и интерпретацией результатов исследования.

4.Изучить схему проведения бактериологического исследования гноя из фурункула больного. Ознакомиться с проведением учета и интерпретацией результатов.

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1.Алгоритм ответа по частной бактериологии:

латинское название возбудителя;

морфо-тинкториальные свойства;

культуральные свойства;

биохимические свойства (если имеют диагностическое значение);

антигенная структура (если имеет диагностическое значение);

факторы патогенности;

источник инфекции, пути заражения;

вызываемые заболевания;

материал для микробиологического исследования;

методы микробиологической диагностики;

специфическая профилактика и специфическое лечение инфекционного заболевания.

2.Характеристика стафилококков, вызываемые заболевания. Микро-

биологическая диагностика стафилококковых инфекций, специфиче-

ская терапия.

Род Staphylococcus включает около 40 видов, из них наибольшее значение

в патологии человека имеют S.aureus, S.epidermidis, S.saprophyticus.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные кокки, непод-

вижны, имеют микрокапсулу, спор не образуют, в мазках располагаются скоп-

лениями в виде гроздьев винограда.

Культуральные свойства: факультативные анаэробы, нетребовательны к питательным средам, культивируются на МПА с образованием пигментирован-

ных колоний желтого или белого цвета, в МПБ дают диффузно-мутящий рост.

Для идентификации стафилококков имеет значение характер роста на кровяном агаре (зоны гемолиза), желточно-солевом агаре (ЖСА) – определение лецити-

назы.

2

Чистая культура Staphylococcus aureus. Окраска по Граму.

Факторы патогенности.

1.Факторы адгезии:

-микрокапсула;

-компоненты клеточной стенки: пептидогликан и тейхоевые кислоты (обес-

печивают адгезию на клетках организма);

-S.epidermidis вырабатывает особый вид слизи (полисахарид, гликокаликс),

обеспечивающий их прикрепление к полимерным материалам катетеров,

искусственных клапанов сердца, протезов сосудов и суставов и создание на них бактериальной биопленки. Это приводит к развитию сепсиса и эндокар-

дита, обусловленных «госпитальными штаммами» S.epidermidis.

2.Белок А угнетает фагоцитоз.

3.Перекрестно реагирующие антигены имеют антигенную общность с клетками кожи и почек человека.

4.Ферменты инвазии:

-плазмокоагулаза вызывает свертывание белков сыворотки крови, образуя фибриновую «псевдокапсулу», защищающую стафилококки от фагоцитоза.

Плазмокоагулаза является одним из важных маркеров различных видов стафилококков для их дифференциации. S.aureus имеет плазмокоагулазу и относится к коагулазоположительным стафилококкам, S.epidermidis и S.saprophyticus не имеют плазмокоагулазы и относятся к коагулазоотрица-

тельным (КОС);

3

-гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту соединительной ткани,

что способствует распространению стафилококков в организме;

-фибринолизин расщепляет фибрин и способствует распространению ста-

филококков в организме;

-дезоксирибонуклеаза расщепляет ДНК;

5. Экзотоксины:

-гемолизины 4-х типов (мембранотоксины), токсичные для эритроцитов,

лейкоцитов, макрофагов, фибробластов;

-лейкоцидин разрушает лейкоциты;

-эксфолиативный токсин разрушает межклеточные контакты в эпидерми-

се, вызывает синдром «ошпаренной кожи»;

-токсин синдрома токсического шока вызывает системное поражение ор-

ганизма в виде синдрома токсического шока (СТШ) с высокой летально-

стью;

-энтеротоксины вызывают симптоматику острого пищевого отравления.

Все токсины, кроме гемолизинов, продуцирует только S.aureus.

6.R-плазмиды детерминируют устойчивость к нескольким антибиотикам, в

т.ч. за счет продукции β-лактамаз. В клинической практике большое значение имеют метициллинрезистентные S.aureus (MRSA) – штаммы S.aureus, устойчи-

вые к большой группе антибиотиков (β-лактамы). MRSA адаптированы к вы-

живанию в присутствии метициллина, оксациллина. Часто вызывают внутри-

больничные инфекции.

S.aureus распространен повсеместно, входит в состав микробиоты кожи,

носоглотки, ротоглотки, опасен как возбудитель внутрибольничных (госпи-

тальных) инфекций.

Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель. Часто форми-

руется носительство у медперсонала. Носовая полость является основной зоной

колонизации S.aureus.

4