Материал: vse_metody_MIKROB

До недавнего времени считалось, что кишечник новорожденного стерилен, а

заселение его бактериями происходит после рождения. В конце прошлого века появились данные о наличии в первичном кале (меконии) некоторых видов бак-

терий. В настоящее время существует доказательная база о нестерильности плода, что свидетельствует о внутриутробной бактериальной транслокации

(проникновении бактерий из кишечника матери к плоду).

После рождения процесс колонизации толстого кишечника микробами

включает четыре этапа:

Первый этап происходит от момента рождения до двух недель жизни (чаще обнаруживают стрептококки, кишечные палочки, бактероиды, клостридии и другие бактерии). При естественном вскармливании преобладают бифидобакте-

рии, при искусственном – лактобактерии.

Второй этап продолжается до введения прикорма. В этот период увеличи-

вается количество бактероидов.

Третий этап длится до завершения грудного вскармливания и характеризу-

ется повышением количества бактероидов, пептококков и пептострептококков.

Четвертый этап соответствует окончанию грудного вскармливания и со-

храняется в течение жизни.

У детей, находящихся на искусственном вскармливании, завершение фор-

мирования микробиоты кишечника происходит в более ранние сроки.

13

Микробиота мочеполового тракта.

До недавнего времени считалось, что почки, мочевой пузырь, матка, простата

– стерильны. В настоящее время в моче здоровых женщин идентифицированы 45

родов бактерий с преобладанием лактобактерий и бактероидов. В моче здоровых мужчин обнаружены 72 рода бактерий с доминированием коринебактерий, стреп-

тококков и лактобактерий. В мочевом пузыре могут присутствовать до 14 родов бактерий с преобладанием лактобактерий.

Микробиота влагалища и ее значение для становления микробиоты но-

ворожденных.

Микробиота влагалища представляет собой динамическую экосистему. Влага-

лище при рождении стерильно. Затем, в течение нескольких дней заселяется пре-

имущественно грамположительной флорой (анаэробные бактерии, стафилококки,

коринебактерии). В это период рН влагалища нейтральна – 7,0. В период полового созревания под влиянием половых гормонов (эстрогенов) вагинальный эпителий утолщается и накапливает гликоген. Это, в свою очередь, стимулирует размноже-

ние лактобактерий, которые активно расщепляют гликоген с образованием молоч-

ной кислоты. рН влагалища снижается до 4,0. Подкисление лактобактериями вла-

галищного секрета и продукция ими перекиси водорода ведут к подавлению роста посторонней микрофлоры.

У женщин репродуктивного возраста молекулярно-генетическими методами выявлены более 265 видов бактерий. Микробный спектр влагалища отличается у женщин различных возрастных категорий и этнических групп. Основными (рези-

дентными) представителями микробиоты данного биотопа являются различные виды лактобактерий. Во влагалище в норме преобладают анаэробные микроорга-

низмы. Соотношение анаэробы/аэробы составляет 10/1. Анаэробы представлены бифидобактериями, бактероидами, пропионибактериями, пептострептококками и др., аэробы – коринебактериями, стафилококками, стрептококками и др. Реже в со-

ставе микробиоты обнаруживают гарднереллы (грамотрицательные анаэробные

14

коккобактерии), микоплазмы, мобилюнкусы (грамотрицательные палочки в виде полумесяца).

В период беременности бактериальное разнообразие уменьшается с преобла-

данием лактобактерий. Ребенок, проходя через родовые пути, контаминируется нормальными представителями микробиоты матери, что в дальнейшем положитель-

но влияет на формирование его микрофлоры.

Положительная роль нормальной микрофлоры для организма

1.Представители резидентной микрофлоры формируют своеобразную биопленку на поверхности кожи и слизистых оболочек. Это препятствует заселению их бо-

лезнетворными бактериями, попадающими извне. Способность нормальной мик-

рофлоры ограничивать рост патогенов называется колонизационной резистент-

ностью. В частности, для толстого кишечника колонизационную резистентность создают бифидо- и лактобактерии.

2.Обеспечивает иммуномодулирующую и иммуностимулирующую функции: ока-

зывает постоянное антигенное стимулирующее действие, что способствует раз-

витию лимфоидной ткани кишечника, синтезу секреторных IgА, активации фаго-

цитоза. Это приводит к формированию и нормальному функционированию им-

мунной системы.

15

3.Обладает анатагонистическим действием по отношению к болезнетворным бактериям. В частности, кишечная палочка является антагонистом возбудителей брюшного тифа и дизентерии.

4.Инактивирует токсические вещества и способствует их выведению из организма.

5.Участвует в энтеральном синтезе витаминов группы В, К, никотиновой кислоты.

6.Участвует в липидном, водно-солевом обмене, обмене желчных кислот.

7.Улучшает перистальтику кишечника и процессы всасывания питательных веществ в кишечном тракте.

Эубиоз и дисбиоз.

Организм человека и колонизирующие его микробы представляют единую экологическую систему, находящуюся в состоянии динамического равновесия.

Эубиоз – относительно стабильные видовые и количественные соотношения микробов, населяющих организм.

Дисбактериоз или дисбиоз – (от греч. dis – приставка отрицания и «bacteria») состояние микробного дисбаланса организма. Дисбактериоз не является болезнью, но может быть следствием какого-либо заболевания. В России под дисбактериозом обычно понимают дисбактериоз кишечника – это «клинико-лабораторный синдром, связанный с изменением качественного и/или количественного состава микрофлоры толстого кишечника» (Отраслевой стандарт «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника». ОСТ 915000.11.0004-2003, Приказ МЗ РФ №

231от 09.06.2003).

Вофициальных международных классификациях болезней (МКБ-10), заболевания с названием «дисбактериоз» не существует.

За рубежом существует диагноз «синдром избыточного бактериального роста». Он ставится при обнаружении в 1мл содержимого тонкой кишки >105 микроорганизмов и/или появлении в ней флоры, характерной для толстой кишки.

16

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Выделение чистой культуры аэробов (продолжение).

III этап исследования. Через 24 часа на скошенном МПА обнаруживают одно-

родный рост в виде сплошного налета желтоватого цвета, а в МПБ – диффузно-

мутящий рост. С целью проверки чистоты выделенной культуры готовят мазок,

окрашивают по Граму и микроскопируют. Для оценки чистоты культуры необ-

ходимо просматривать не менее 10 полей зрения. Обнаружение в мазках со ско-

шенного МПА только гроздьевидно расположенных грамположительных кокков, а

в мазках из МПБ – грамотрицательных палочек свидетельствует о чистоте выде-

ленных культур.

Для биохимической идентификации грамотрицательных палочковидных бакте-

рий до вида используют набора реагентов «Мультимикротесты». Планшеты с тест-

системами помещают в термостат при температуре 370С на 24 часа.

IV этап исследования. Учет биохимических свойств выделенной культуры:

Вывод: из смеси бактерий выделены две культуры. Первая культура иден-

тифицирована как E.coli на основании морфо-тинкториальных (грамотрицательные палочки), культуральных (полупрозрачные, гладкие колонии средних размеров) и

биохимических свойств. Вторая культура идентифицирована как Staphylococcus spp.

на основании морфо-тинкториальных (грамположительные гроздьевидно располо-

женные кокки) и культуральных (гладкие выпуклые колонии золотистого цвета)

свойств.

2. Санитарно-бактериологическое исследование чистоты воздуха в бактериоло-

гической лаборатории.

I этап исследования. Производят посев воздуха аспирационным методом с по-

мощью аппарата Кротова. Для определения микробного числа воздух засевают в

17