|
Вид
Рост при Рост на средах,
содержащих желчь 10 °С 45 "С метиленовый хлорид натрия синий (0,1%) (6,5%) S.pyogenes — — — — — S.pneumoniae — + ± — — S.sanguis — ± — — + S.salivarius — + — — —
Вид
Рост Термоустойчи- Образование
раствори- Антиген- S.pyogenes — — -f + A S.pneumoniae — — + — — S.sanguis ± H(— ) S.salivarius — — — — —(К) |
1:50, 1:250, 1:1000. Диагностический препарат О-стрептолизина также разводят буфером и применяют в количестве 0,3 мл, в котором содержится 1 рабочая доза О-стрептолизина. Рабочая доза — количество О-стрептолизина, которое почти полностью нейтрализуется половиной международной единицы анти-О-стрептолизина стандарта ГИСК. О-стрептолизин в рабочей дозе должен вызывать полный лизис 0,2 мл 5 % взвеси эритроцитов. Разведенную сыворотку и другие ингредиенты разливают по пробиркам так, как указано в табл. 12.1.3, и инкубируют. После инкубации отмечают последнюю пробирку, в которой сыворотка еще нейтрализует рабочую дозу О-стрептолизина (гемолиз отсутствует). Титр сыворотки выражают числом единиц анти-О-стрептолизина в 1 мл (АЕ St-O в 1 мл). В табл. 12.1.3 приведено число АЕ St-O в 1 мл сыворотки при нейтрализации О-стрептолизина различными разведениями сыворотки. Титр анти-О-стрептолизина до 250 АЕ St-O обнаруживается у практически здоровых людей. При ревматизме с первых дней болезни антитела к О-стрептолизину выявляются в высоких титрах — 500 АЕ St-O и выше.
• Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными аэробными бактериями
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала (гной, раневое отделяемое, участки ожоговой ткани и др.) готовят мазки, окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. Обнаружение в мазках грамотрицательных бактерий позволяет сделать предварительное заключение.
Бактериологическое исследование. Для выделения культуры Pseudomonas aeruginosa исследуемый материал засевают в чашки Петри на основные (МПА) или селективные питательные среды (агар, содержащий цитилпиридиний хлорид, который угнетает рост сопутствующей микрофлоры — ЦПХ-агар). Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. P.aeruginosa образуют круглые плоские слизистые колонии, окрашивая среду характерным сине-зеленым пигментом. При бактериоскопии темнопольным методом нативных препаратов, приготовленных из колоний, в "раздавленной" или "висячей" капле обнаруживают подвижные и слегка изогнутые палочки; в мазках, окрашенных по методу Грама, — грамотрицательные палочки. Чистые культуры P. aeruginosa идентифицируют по биохимическим признакам и образованию пигмента.
Для эпидемиологического анализа госпитальных инфекций определяют серовары в реакции агглютинации, пиоциновары и фаговары.
Для выделения энтеробактерий исследуемый материал засевают на одну из дифференциально-диагностических сред, например на среду Эндо (см. тему 3.1). Для выделения бактерий рода Proteus используют метод Шукевича (см. тему 3.1).
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Патогенные штаммы P.aerugi-nosa выделяют различные растворимые белковые (экзотоксины и экзоферменты) и небелковые (экстрацеллюлярная слизь) антигены, которые могут быть обнаружены в материале от пациента (из очага, в крови или моче) с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА и др.).
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
• Микробиологическая диагностика сепсиса
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь; при септико-пиемиях исследуют также материал из первичных и вторичных местных очагов инфекции. Кровь берут в период подъема температуры до начала антибиотикотерапии из локтевой вены в количестве не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей, так как микроорганизмы находятся в крови в сравнительно небольших количествах. Посевы делают у постели больного в колбы с 50—100 мл питательной среды. Сравнительно большие объемы питательной среды (в 10 раз превышающие количество крови) необходимы для устранения бактерицидного действия сывороточных белков.
В случае необходимости транспортировки крови к ней добавляют антикоагулянты: цитрат или оксалат натрия, декстран сульфат, гепарин. В качестве добавки к среде для выделения бактерий из крови используют полианетолсульфонат натрия, являющийся антикоагулянтом и одновременно угнетающий бактерицидную активность сыворотки, фагоцитоз, инактиви-рующий комплемент и нейтрализующий лизоцим.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериологическое исследование. Является ведущим при лабораторной диагностике сепсиса. Посевы производят на жидкие среды обогащения: сахарный бульон и др.; при подозрении на анаэробную флору — на тиогликолевую среду, среду Китта—-Тароцци или другие элективные среды для анаэробов (см. тему 3.1) и инкубируют их при 37 °С в течение 10 дней при ежедневном контроле. В случае отсутствия роста микроорганизмов дают отрицательный ответ. При наличии роста делают мазки, которые окрашивают по методу Грама. Выделенную чистую
|
Число
колоний в секторах
Количество 1—6 — — — Менее 103 8-20 - - - 3-Ю3 20-30 - - - 5-Ю3 30-60 - - - 104 70-80 - - - 5-1 04 100-150 5-10 - - 105 Несосчитываемое 20—30 — — 5-Ю5 Несосчитываемое 40—60 — — 106 ^сосчитываемое 100—140 10—20 — 5-1 06 Несосчитываемое Несосчи- 30—40 — 107 тываемое Несосчитываемое То же 60—80 Единичные 108 колонии |
Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый.
Гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержащая стафилококковый антитоксин. Готовят из крови животных или людей, иммунизированных стафилококковым адсорбированным анатоксином. Применяют для специфического лечения при стафилококковых заболеваниях.
Стафилококковый бактериофаг (жидкий). Фильтрат фаголи-зата стафилококков. Применяют наружно, внутрикожно, внутримышечно для лечения при стафилококковых заболеваниях.
Диагностические стафилококковые фаги. Набор типоспеци-фических фагов для фаготипирования стафилококков.
О-стрептолизин сухой. Лиофильно высушенный фильтрат бульонной культуры стрептококка — активного продуцента О-стрептолизина. Применяют для серодиагностики — определения антител к О-стрептолизину в сыворотках крови больных стрептококковыми инфекциями (чаще ревматизмом).
Антибиотики. Грамположительные бактерии — р-лак-тамные антибиотики, ванкомицин, тетрациклины, аминогли-козиды, макролиды, линкомицины, сульфаниламиды, фторхи-нолоны и др.
Грамотрицательные бактерии — р-лактамы, спектр действия которых сдвинут в сторону грамотрицательных микроорганизмов, хлорамфеникол, аминогликозиды, тетрациклины, сульфаниламиды, фторхинолоны и др.
Тема 12.2. АНАЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ - ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ
План
Программа
Биологические свойства возбудителей анаэробных гнойно-воспалительных и раневых инфекций, их патогенность, экология, особенности инфекций и эпидемиология вызываемых заболеваний.
Микробиологическая диагностика гнойных заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробами.
Микробиологическая диагностика газовой гангрены.
Микробиологическая диагностика столбняка.
Биохимические и молекулярно-биологические методы диагностики анаэробной инфекции.
Диагностические, профилактические и лечебные препараты.
Демонстрация
1. Мазки из чистых культур Clostridium petfringens, С. teta-ni, Bacteroides fragilis. Мазки из раневого отделяемого, содержащие смешанную микрофлору (клостридии, стафилококки, грамотрицательные бактерии и др.).
171
Методика посева для выделения патогенных анаэробов.
Аппаратура и питательные среды для выращивания анаэробов.
Определение сс-токсина клостридий в раневом отделяемом с помощью летициназной пробы.
а Задания для выполнения лабораторной работы
Бактериоскопическое исследование: приготовить мазки из гноя, окрасить их по методу Грама и микроскопировать. Сделать предварительное заключение и наметить ход дальнейшего исследования.
Сделать окончательное заключение о возбудителе или возбудителях раневой инфекции на основании бактериоскопических, бактериологических и других данных, полученных из бактериологической лаборатории.
Методические указания
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной, раневое отделяемое, кусочки мышечной ткани, перевязочный материал и др., кровь — при сепсисе. Для обеспечения бескислородных условий взятие материала производят шприцем с хорошо притертым поршнем до полного его заполнения и вытеснения воздуха. Затем шприц надевают на иглу, вставленную через резиновую пробку в пробирку со смесью инертных газов (N2 + Н2) и СО2, и вводят в нее исследуемый материал, который изучают в микробиологической лаборатории. Используют также различные специальные транспортные среды, в которые помещают материал, взятый у больных.
• Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из очага, кровь — при сепсисе.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование (см. схему 12.1.1). Из исследуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах бактерий позволяет поставить ориентировочный диагноз и наметить план дальнейшего исследования.
Бактериологическое исследование. Посевы производят на элективные обогатительные среды для анаэробов (среда Китта—Та-роцци, тиогликолевый бульон или полужидкий тиогликолевый агар), содержащие специальные добавки (гемин, витамин К и др.), и инкубируют при 37 °С в течение 24—48 ч. После просмотра выросшей культуры делают мазки, окрашивают их по методу Грама и микроскопируют. Бактериоскопия дает возможность установить однородность или неоднородность куль-
172
|
Признак Бактерии Pep- Pep- Veil- Вас- C.per- C.no- C.se- C.so- C.hi-to- tost- lonel- teroi- frin- vy pti- rdel- stoly-coc- repto- la des gens cum li ticum cus coccus Форма и распо- i § ложение бакте- § я g риальных клеток я s sS « и н И я « « а •"* * » п s 2 "^ 2 *" 2 U2 аЙ нЙ §й ой ой 2^ Ээ* S&" sf §у §* * S ? п §2 So Ео Ро а о ео ео S2 к Я S*? 34 ffe; рч ^ч оЧ 5ч Во >£-о .9 о «и и .R<e3 .R^d ,0с9 м сЗ «и и Ox EJ и fc^c Sc fc^c ЪА с Не 2е 2с Подвижность _ — _ + __ + + + + Споры ____ + + + + + Окраска по ме- + + — — + + + + + тоду Грама Ферментация с + — + + с + с — углеводов Свертывание — — + + + х — + + или пептониза-ция молока Образование +_+ +___х х H2S Образование + — — +_____ индола Разжижение же- — — — + + + + + + латина Восстановление + — + ±ххх — — нитратов Гемолиз эритро- + — — ±х + + + + цитов Образование ____ + + + + + токсина |
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Анаэробные бактерии вырабатывают специфические метаболиты, включая летучие жирные кислоты с короткой цепью, спирты и нелетучие органические кислоты. Для их обнаружения в материале от больного используют ГЖХ (см. главу 11).
• Микробиологическая диагностика раневой анаэробной кло-стридиальной инфекции — газовая гангрена (схема 12.2.1).
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: раневое отделяемое, отечная жидкость, кусочки мышечной ткани, перевязочный материал, кетгут. Рекомендуется брать материал из разных участков очага поражения, особенно из глубоких слоев. Кровь — при сепсисе.