Материал: Тец руководство

• ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Обнаружение патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями заболеваний (например, микобактерии туберку­леза, гонококки и др.), имеет решающее значение для поста­новки диагноза.

Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний должно быть основано на строгой аргументации. Обязательным условием является кли­ническое, эпидемиологическое, микробиологическое и сероло­гическое исключение возбудителей инфекционных болезней (например, возбудителей кишечных инфекций, венерических болезней и др.). Для оценки роли условно-патогенных микро­организмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.

Выделение микроорганизмов из крови, спинномозговой жидкости или других жидкостей организма, которые в норме у здоровых людей являются стерильными.

Обнаружение в исследуемом материале, особенно при дисбактериозах, условно-патогенных микроорганизмов в до­ статочно больших количествах (например, 10⁵—10⁷ микробных клеток в 1 мл). Для этого проводят количественное определе­ние микроорганизмов по числу КОЕ в 1 г или 1 мл испытуе­мого образца. Эти количественные показатели могут варьиро­вать в зависимости от вида микроорганизмов, типа исследуе­мого материала, характера и стадии заболевания.

Повторное, многократное (в течение суток или через сутки) выделение одного и того же микроорганизма из одного и того же материала от больного (например, из крови при
сепсисе и т.д.).

Обнаружение идентичных условно-патогенных микроор­ганизмов в разных образцах материала (например, при пище­вых токсикоинфекциях — в промывных водах желудка, рвот­ных массах, испражнениях, пищевых продуктах).

Нарастание титра антител в 4 раза и более в парных сыворотках крови больного в отношении условно-патогенного микроорганизма, который предполагается как возбудитель данного патологического процесса. В ряде случаев рекомендуется использовать в качестве антигенов аутоштаммы микроорганиз­мов, выделенные от больных.

Положительные кожно-аллергические реакции у больных с аллергенами, приготовленными из условно-патогенных мик­роорганизмов.

В случае внутрибольничных (нозокомиальных) инфек­ций — выделение идентичных культур микроорганизмов от группы больных.

Совпадение данных лабораторного определения чувстви­тельности микроорганизмов к антибиотикам с эффективнос­тью антимикробной терапии в клинических условиях, под­
тверждаемое улучшением состояния больного и уменьшением количества или элиминацией соответствующих микроорганиз­мов.

Условно-патогенные микроорганизмы (синоним: оппор­тунистические) представляют собой большую группу микроор­ганизмов, занимающих различное систематическое положение.
Они встречаются среди аэробных и анаэробных бактерий, гри­бов, простейших. В клинической микробиологии наиболее час­то встречаются условно-патогенные микроорганизмы, относя­
щиеся к родам Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Klebsiella, Proteus, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Pseudomonas, Haemophilus, Bacteroides, Veillonella, Vibrio, Peptococcus, Peptostreptococcus, Mycobacterium, Mycoplasma, Candida и др.

• ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛАБОРАТОРНЫХ МИКРО­БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты лабораторных исследований оформляют на спе­циальных бланках, которые передают лечащему врачу.

В ответе прежде всего указывают наличие патогенных, а также условно-патогенных микроорганизмов, обнаруженных при микробиологическом исследовании. Сообщают также дан­ные лабораторного определения чувствительности микроорга­низмов к антибиотикам.

При обнаружении микробных ассоциаций перечисляют все микроорганизмы, указывают доминирующие виды и коли­чественные микробиологические показатели.

В соответствии с правилами международной номенкла­туры в ответах приводят видовые названия микроорганиз­мов, например: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa
и т.д.

С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только
родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, например Proteus sp., Candida sp. и т.д.

Глава 12

ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ

Бактерии, перечисленные выше, вызывают гнойно-воспали­тельные процессы различной локализации, в том числе анги­ны, фурункулы, циститы и пиелиты, плевриты, перикардиты, сепсис и др. Многие из этих возбудителей встречаются в нор­мальной микрофлоре человека и проявляют свою патогенность только при нарушении нормальной экологии.

Стафилококки, стрептококки, протей, эшерихии и анаэроб­ные бактерии нередко вызывают смешанную инфекцию как в разнообразных сочетаниях между собой, так и с другими мик­роорганизмами — вирусами, грибами.

Тема 12.1. АЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ -ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ

План

Программа

Биологические свойства возбудителей гнойно-воспа­лительной и раневой инфекции, их патогенность, эко­логия, особенности инфекции и эпидемиология вы­зываемых заболеваний.

Микробиологическая диагностика.

Диагностические препараты, профилактические и ле­чебные препараты.

а Демонстрация

Рост а- и р-гемолитических стрептококков на кровя­ном агаре.

Рост и образование пигмента P.aeruginosa на агаре.

Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

ЗАНЯТИЕ 1

а Задание студентам

Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей гнойных инфекций: S.aureus, S.pyogenes, P.aeruginosa, E.coli, P.vulgaris. Окраска по методу Грама.

Микроскопировать и зарисовать мазки из гноя, содер­жащие возбудителей: стафилококков, стрептококков. Окраска по методу Грама.

Ознакомиться с питательными средами, применяемы­ми при микробиологической диагностике гнойных и раневых инфекций. Указать назначение отдельных пи­тательных сред.

Микробиологическое исследование при раневых и гнойных инфекциях:

а) указать материал, подлежащий исследованию;

159

б) микроскопический метод: микроскопировать мазок из гноя, окраска по методу Грама. Сделать вывод;

в) наметить план дальнейшего исследования.

ЗАНЯТИЕ 2

Задание студентам

1. Микробиологическое исследование гноя:

а) учесть результат посева гноя на кровяной агар в чашке Петри, описать подозрительные колонии, отметить наличие гемолиза, составить план даль­нейшего исследования;

б) учесть результаты определения лецитиназы и плазмокоагулазы у выделенной культуры стафилококка.
Сделать вывод;

в) учесть результаты определения чувствительности культуры стафилококка к антибиотикам. Сделать вывод.

Микробиологическое исследование мочи. Определить количество бактерий в 1 мл мочи по результатам ме­тода секторных посевов. Дать заключение.

Серодиагностика ревматизма. Ознакомиться с описа­нием стрептолизиновой реакции. Внести в протокол результаты определения анти-0-стрептолизина в сы­воротке крови больного. Сделать вывод.

Дать краткую характеристику демонстрируемым анти­микробным, диагностическим и лечебно-профилакти­ческим препаратам.

Методические указания

Материал для исследования: раневое отделяемое, гной, экс­судат, моча, мазки со слизистых оболочек (носоглотки, зева и др.), кровь при подозрении на сепсис.

• Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (схема 12.1.1). Из иссле­дуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположителькых кокков, располагающихся в виде гроздевидных скоплений (рис. 12.1.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции. Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют ти­пичные скопления, чаще располагаются поодиночке или не­большими группами по 2—3 бактерии.

Бактериологическое исследование. Испытуемый материал засе­вают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром

Определение чувствительности стафилококка к антибиоти­кам — см. тему 7.2.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.

Иммунохимические исследования. Основаны на об­наружении антигенов (токсинов и ферментов) возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологи­ческих реакций.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

• Микробиологическая диагностика стрептококковых инфек­ций (схема 12.1.2)

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала (за ис­ключением крови), окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. При положительном результате обнаруживают цепоч­ки грамположительных кокков (см. рис. 12.1.1). Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиноч­ке или небольшими группами по 2—3 бактерии.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за­севают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 "С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из ко­лоний, готовят мазок, окрашивают по методу Грама и микро-скопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозритель­ные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.

По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) ссргемолити-ческие, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частич­ного гемолиза; 3) р-гемолитические, образующие вокруг коло­нии полностью прозрачную зону гемолиза.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам (табл. 12.1.2). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с экстрактом из исследуемой культу­ры (полисахаридным преципитиногеном С) и группоспецифи-