Материал: Новиков Д.К. Медицинская микробиология

14.Поставить реакцию преципитации для определения антигена в ликворе больного.

Взять пробирку и осторожно по стенке внести пастеровской пипеткой около 0,5 мл преципитирующей менингококковой сыворотки. Затем аккуратно наслоить на сыворотку такое же количество ликвора так, чтобы ликвор не смешивался с сывороткой, а образовал над ней верхний слой. Пробирку поставить в штатив. При положительном результате сразу на границе обеих жидкостей образуется мутное кольцо преципитации.

15.Оценить РПГА для определения наличия столбнячного токсина в фильтрате исследуемого материала (по демонстрационному материалу).

Оценивают результаты РПГА по характеру осадка эритроцитов. Отрицательная реакция – осадок компактный в виде колечка с ровными краями, «пуговица», положительная – характерный кружевной осадок в виде зонтика. Титр токсина – предельное разведение фильтрата, дающее положительный результат.

16.Поставить РГА для индикации и титрования вируса. Оценить реакцию по демонстрационному ряду.

Постановка реакции гемагглютинации для индикации и титрования вируса.

Максимальное разведение аллантоисной жидкости, еще дающее гемагглютинацию (осадок в форме зонтика), принимается за титр гемагглютинирующего вируса.

17. Поставить РТГА для определения типа вируса в аллантоисной жидкости.

Реакцию ставят по следующей схеме:

478

Если торможение гемагглютинации (осадок в форме пуговицы или кольца) пройдет до титра диагностической сыворотки или его половины, то вирус соответствует диагностической сыворотке.

18.Оценить РТГА в парных сыворотках больного с целью серодиагностики вирусных инфекций.

Берут 2 ряда пробирок с разведениями сыворотки больного: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, К (контроль). Учет начинают с контрольных пробирок, в которых должен быть осадок эритроцитов в виде «зонтика». Затем сравнивают результаты опытных пробирок с контролем. При наличии осадка эритроцитов в виде «пуговки» результат оценивается положительно, при наличии «зонтика» - отрицательно.

Определяют титры антител в двух рядах сыворотки и сравнивают.

Для серологического подтверждения вирусной инфекции титр антител во II-й сыворотке, взятой в конце заболевания, должен возрасти не менее, чем в 4 раза по сравнению с I-й сывороткой больного.

19.Поставить РПГА для определения титра антител в сыворотке больного. Оценить реакцию по демонстрационному ряду.

Используют стандартные антигенные эритроцитарные диагностикумы. В пробирках готовят последовательные разведения сыворотки больного, ориентируясь на диагностический титр. Затем в каждую пробирку вносят одинаковый объем 3% суспензии нагруженных ан-

тигеном эритроцитов (эритроцитарного диагностикума). Через 2 ч инкубации при 370С учитывают результат, оценивая внешний вид

479

осадка эритроцитов (без встряхивания): отрицательная реакция – осадок эритроцитов в виде компактного диска или колечка с ровными краями на дна лунки, положительная реакция – характерный кружевной вид осадка эритроцитов, тонкая пленка с неровными краями.

20. Определить титр антител в ИФА по демонстрационному материалу.

Сначала оценивают контрольные пробы:

1.Отрицательная проба – лунка, в которой цвет пробы прозрачный со слегка желтоватым оттенком.

2.Положительная проба – лунка, в которой цвет среды ко-

ричневый.

После этого учитывают лунки, в которых находятся разведения исследуемой сыворотки (1:2, 1:4, 1:8 и т.д.). За титр антител принимают последнее разведение, в котором цвет пробы совпадает с цветом положительной пробы.

21.Поставить опыт по определению чувствительности культуры микроорганизмов к антибиотикам методом бумажных дисков. Оценить опыт по демонстрационным посевам.

Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри. Для этого извлекают из бумажной упаковки стерильную пипетку, ее берут в правую руку. В левую руку берут пробирку с 1 млрд взвесью бактериальной культуры, открывают над спиртовкой пробку 4 –5 пальцами правой кисти. Набирают в пипетку 1 мл культуры, располагают пипетку горизонтально (чтобы случайно не вылить содержимое на стол), обжигают края пробирки и закрывают ее пробкой. Приоткрыв чашку Петри с МПА, выливают 1 мл культуры на агар. Чашку закрывают и распределяют культуру по поверхности агара, оставляют на несколько минут (для всасывания жидкости) на столе. Затем на поверхность питательной среды пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные

диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 370С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста культуры судят об ее чувствительности к соответствующим антибиотикам. При зоне задержки роста диаметром 0-10 мм культура расценивается как нечувствительная (устойчивая), диаметром 11–15 расценивается как малочувствительная, 16-25 мм – чувствительная, больше 25 мм – высокочувствительная.

22.Определение МПК (минимальной подавляющей концентрации) антибиотика методом серийных разведений в бульоне (по демонстрационному ряду).

480

Из основного раствора, содержащего определенную концентрацию антибиотиков, готовят ряд убывающих разведений антибиотиков в пробирках с бульоном и добавляют испытуемую культуру (обычно 105-106 бактериальных клеток). Контролем служит пробирка с бульоном и культурой без антибиотиков. Срок инкубации зависит от вида микроорганизмов (чаще сутки). Определяют МПК, которая соответствует концентрации препарата в последней пробирке с видимой задержкой роста (прозрачная питательная среда).

23. Среда Эндо.

Среда Эндо – МПА, 1% лактоза, индикатор (основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Колонии микроорганизмов, разлагающих лактозу, приобретают цвет индикатора (красные).

24. Среда Плоскирева.

Используется для выращивания шигелл. Состав: МПА, лактоза, соли желчных кислот и бриллиантовая зелень (для угнетения роста кишечной палочки), индикатор нейтральный красный. Шигеллы не разлагают лактозу, дают рост бесцветных, лактозоотрицательных колоний.

25. Среда Гисса.

Среды Гисса используют для изучения биохимических свойств выделенной культуры. Они представлены рядом пробирок с пептонной водой, 1% раствором углевода (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза, спирт маннит), индикатором Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный 1М NаOH), поплавком для улавливания газа. Если углевод разлагается до кислоты, щелочь нейтрализуется, фуксин восстанавливается, среда краснеет, если до газа, то в поплавке появляется пузырек газа.

26. Среда Китта–Тароцци.

Используется для выращивания строгих анаэробов, состоит из МПБ, кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода из среды, глюкозы (источник энергии), сверху залита вазелиновым маслом для защиты от кислорода.

27. Среда Ресселя.

Сложная дифференциально-диагностическая среда. Состоит из МПА, 1% лактозы, 0,1% глюкозы и индикатора. Среда имеет форму полускошенного агара.

Применяется для выделения чистой культуры бактерий и дифференциации их по биохимическим свойствам.

481

28. Среда Кесслера.

Состав среды Кесслера: 1% пептонная вода, 5% желчи, 0,25%

лактозы, генциановый фиолетовый для подавления роста грамположительных бактерий. Используется для обнаружения свежего фекального загрязнения в смыве с рук.

29. Брюшнотифозный диагностикум.

Представляет собой взвесь убитых нагреванием S.enterica var.typhi.

Применяется для серодиагностики брюшного тифа, т.е. для определения брюшнотифозных антител в сыворотке больного в реакции агглютинации Видаля.

30. Эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум.

Представляет собой взвесь эритроцитов с адсорбированным на них Vi-антигеном S.enterica var.typhi. Применяется для определения брюшнотифозных Vi-антител в исследуемой сыворотке в РПГА с целью серодиагностики брюшнотифозного бактерионосительства.

31. Агглютинирующая брюшнотифозная сыворотка.

Получена путем гипериммунизации кроликов взвесью убитых брюшнотифозных бактерий. Применяется в реакции агглютинации для идентификации брюшнотифозных сальмонелл.

32. Люминесцирующая брюшнотифозная сыворотка.

Получают путем гипериммунизации животных S.enterica var.typhi, после получения сыворотки проводят обработку ее флюорохромом.

Применяется для быстрого обнаружения в исследуемом материале возбудителя брюшного тифа в прямой РИФ.

482

РАЗДЕЛ IV. СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

Задача №1. Человек, переболевший брюшным тифом, был выписан из инфекционного отделения больницы после трехкратного отрицательного бактериологического исследования фекалий. Через месяц

вего семье зарегистрировано то же заболевание.

1)Мог ли переболевший явиться источником инфекции?

2)Какое следует провести исследование для проверки данного предположения?

Ответ к задаче №1:

1)Переболевший мог явиться источником инфекции.

2)Для подтверждения данного предположения необходимо использовать серологический метод диагностики (ИФА или РПГА) с целью выявления Vi-антител. Дополнительно определить фаготип брюшнотифозной культуры у вновь заболевшего и сравнить его с фаготипом по истории болезни переболевшего. Если фаготипы совпадают и будут выявлены Vi-антитела, значит переболевший – источник инфекции. Можно провести еще бактериологическое исследование желчи для выделения биликультуры.

Задача №2. Человек, перенесший в прошлом брюшной тиф, хочет работать в пищеблоке.

1)Можно ли допустить его к этой работе?

2)Какие исследования нужно провести для решения этого вопро-

са?

Ответ к задаче №2:

Необходимо использовать серологический метод для выявления Vi-антител. При положительном результате провести трехкратное исследование фекалий для выделения копрокультуры и желчи – для выявления биликультуры. При отрицательных данных можно разрешить работать в пищеблоке.

Задача №3. В детском коллективе наблюдается вспышка острых кишечных заболеваний, соответствующих по клинической картине дизентерии. Заболевание связано по времени с приходом на работу новой няни.

1)Как установить источник инфекции?

2)Какие микробиологические исследования нужно провести с этой целью?

Ответ к задаче №3:

Для установления источника инфекции необходимо произвести бактериологическое исследование испражнений у работников пи-

483

щеблока и няни. При выделении шигелл произвести серо- и фаготипирование выделенных культур (определить эпидмаркеры).

Задача №4. В двух населенных пунктах, расположенных на берегу, наблюдался одновременно подъем заболеваемости брюшным тифом.

1)Как установить и документировать связь между этими заболеваниями?

2)Какими методами можно выявить источник инфекции и где его искать?

Ответ к задаче №4:

1)Путь передачи – водный.

2)Источник инфекции нужно искать среди людей, живущих в населенных пунктах выше по течению реки. Для этого используют серологический метод исследования. При выявлении Vi-антител проводят бактериологическое исследование испражнений и желчи, определяют эпидмаркеры.

Задача №5. При обследовании на бактерионосительство людей, переболевших ранее брюшным тифом, возбудитель в фекалиях не был обнаружен.

1)Можно ли утверждать, что обследуемый не является бактерионосителем?

2)Какой материал нужно исследовать для окончательного заключения и какой метод исследования использовать?

Ответ к задаче №5:

Нельзя без дополнительного исследования. Используют серологический метод для выявления Vi-антител. При положительном результате – бактериологический метод для выявления копрокультуры и биликультуры.

Задача №6. На даче старшая и младшая группы детсада жили раздельно, не общались друг с другом. Питание готовилось на одной и той же кухне. В младшей группе в начале лета имела место вспышка бактериальной дизентерии. Через некоторое время случаи заболевания зарегистрированы и в старшей группе.

1)Где искать источник инфекции?

2)Как установить наличие одного или нескольких источников инфекции имело место?

Ответ к задаче №6:

1)Источник инфекции необходимо искать среди работников пищеблока.

484