С. tropicalis, C. parapsilosis и др. Кандидозные инфекции протекают в виде молочницы, ангулярного хейлита, атрофического и хронического гиперпластического кандидозов. При атрофическом кандидозе на твердом небе и спинке языка формируются ярко-красные очаги поражения. Хронический гиперпластический кандидоз характеризуется симметричным расположением красных и белах пятен на слизистой оболочке щек. При ангулярном хейлите в углах рта появляются покраснения и трещины.
УВИЧ-инфицированных помимо банальных стафилококковых и стрептококковых инфекций, развиваются некротизирующие гингивиты и периодонтиты, вызываемые видами микроорганизмов из различ-
ных родов и семейств: Mycoplasma salivarium, Pseudomonas spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp.
Утрети больных СПИДом слизистая полости рта является местом первичной сосудистой опухоли – саркомы Капоши. В процесс часто вовлекаются твердое небо и прилегающие к нему десны, однако язык, губы и слизистая щек поражаются редко. Поражения обычно безболезненны, некоторые очаги могут изъязвляться и кровоточить. Саркома Капоши может сочетаться с кандидозным стоматитом.
Корь.
Своеобразные стоматологические проявления характерны для коревой инфекции. При этом заболевании в продромальном периоде на слизистой оболочке щек появляются пятна Филатова-Коплика. Они возникают за 2-3 дня до появления сыпи на коже задних отделов слизистых щек на фоне ограниченной эритемы неправильной формы. Пятна беловато-желтоватого цвета, величиной с булавочную головку, возвышаются над уровнем слизистой и имеют плотную консистенцию. При попытке снять их шпателем не удаляются и исчезают до появления коревой сыпи на коже. Пятна Филатова-Коплика очень типичны и позволяют проводить раннюю диагностику кори, следовательно, своевременно изолировать больного.
Ящур.
Эта болезнь встречается у людей крайне редко. Человек заражается от больных животных при употреблении мяса и молока, реже контактным и воздушно-капельным путем. На фоне общей слабости, головной боли и боли в мышцах, повышения температуры в полости рта появляется жжение и обильное слюноотделение. Спустя один или два дня возникает гиперемия и отек слизистой, появляются небольшие пузырьки на языке, деснах, небе, губах, реже на слизистой оболочке носа. Пузырьки вскрываются и на их месте образуются афтоподобные элементы. Поражение ротовой полости часто сочетается с поражением кожи в межпальцевых складках, оснований ногтей, коже подошв.
470
РАЗДЕЛ III. ПРАКТИЧЕСКИЕ НАВЫКИ ПО МЕДИЦИНСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ
ПЕРЕЧЕНЬ ЗАДАНИЙ
1.Определить морфологию микроорганизмов (по готовым мазкам).
2.Определить морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов (по готовым мазкам).
3.Приготовить мазок из агаровой культуры, окрасить по Граму. Определить морфологические и тинкториальные свойства.
4.Произвести бактериоскопическое исследование гноя и определить морфологию и тинкториальные свойства имеющихся микроорганизмов.
5.Сделать посев исследуемого материала петлей на жидкую и плотную питательные среды.
6.Выполнить 1 этап выделения чистой культуры, оценить культуральные свойства по готовым посевам.
7.Произвести посев на косой агар с целью выделения чистой культуры микроорганизмов.
8.Сделать посев исследуемого материала на чашку с МПА сплошным газоном.
9.Сделать посев для определения биохимических свойств выделенной культуры.
10.Выполнить 1 этап бактериологического исследования испражнений больного при подозрении на дизентерию.
11.Определить вид микроба по антигенным свойствам в реакции агглютинации с адсорбированной агглютинирующей сывороткой.
12.Поставить и оценить ориентировочную реакцию агглютинации для определения вида микроба.
13.Оценить результаты РСК с целью определения антител в сыворотке больного по демонстрационному ряду.
14.Поставить реакцию преципитации для определения антигена в ликворе больного.
15.Оценить РПГА для определения наличия столбнячного токсина в фильтрате исследуемого материала (по демонстрационному материалу).
16.Поставить РГА для индикации и титрования вируса. Оценить реакцию по демонстрационному ряду.
17.Поставить РТГА для определения типа вируса в аллантоисной жидкости.
471
18.Оценить РТГА в парных сыворотках больного с целью серодиагностики вирусных инфекций.
19.Поставить РПГА для определения титра антител в сыворотке больного. Оценить реакцию по демонстрационному ряду.
20Определить титр антител в ИФА по демонстрационному материалу.
21.Поставить опыт по определению чувствительности культуры микроорганизмов к антибиотикам методом бумажных дисков. Оценить опыт по демонстрационным посевам.
22.Определить МПК (минимальной подавляющей концентрации) антибиотика методом серийных разведений в бульоне (по демонстрационному ряду).
23.Среда Эндо.
24.Среда Плоскирева.
25.Среда Гисса.
26.Среда Китта–Тароцци.
27.Среда Ресселя.
28.Среда Кесслера.
29.Брюшнотифозный диагностикум.
30.Эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум.
31.Агглютинирующая брюшнотифозная сыворотка.
32.Люминесцирующая брюшнотифозная сыворотка.
472
1.Определить морфологию микроорганизмов (по готовым мазкам).
Морфологию микроорганизмов определяют путем микроскопии мазков в световом микроскопе с иммерсионной системой.
На окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла, помещают препарат на столик микроскопа и под контролем зрения опускают иммерсионный объектив в масло. Макровинтом находят поле зрения, затем микровинтом устанавливают четкость изображения. Изучают форму (кокки, палочки, спирохеты), размеры, расположение микроорганизмов. В зависимости от способа окраски выявляют дополнительные структуры (капсулу, споры, зерна волютина и т.д.).
2.Определить морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов (по готовым мазкам).
Взять предметное стекло с готовым микропрепаратом, окрашенным по Граму. Нанести на препарат каплю иммерсионного масла. Провести микроскопию в световом микроскопе с увеличением объектива 90.
Определить форму микробных клеток и отношение к окраске по Граму.
3.Приготовить мазок из агаровой культуры, окрасить по Граму. Определить морфологические и тинкториальные свойства.
Стекло обезжиривают мылом, ограничивают стеклографом место для нанесения мазка с обратной стороны от обезжиривания. Стерильной бактериологической петлей на стекло наносят каплю физиологического раствора.
Пробирку с агаровой культурой бактерий берут в левую руку, а петлю за петледержатель – в правую. Петлю прожигают в пламени горелки до покраснения. Вращательным движением вынимают из пробирки ватную пробку, прижимая ее IV и V пальцами правой руки
кладони, и обжигают край пробирки. Осторожно вводят петлю в пробирку со скошенным агаром, охлаждая петлю о внутреннюю поверхность, после чего легким скользящим движением берут материал. Затем вынимают петлю из пробирки, снова обжигают ее край и закрывают пробкой.
Петлей с культурой прикасаются к капле физиологического раствора до появления легкого помутнения. Избыток культуры сжигают в пламени спиртовки, после чего петлю охлаждают прикосновением к стеклу и равномерно распределяют каплю по стеклу в виде круга. Мазок высушивают, фиксируют трехкратным проведением препарата через пламя горелки. Окрашивают мазок по Граму: наносят
473
на фильтровальную бумагу, пропитанную карболово–спиртовым раствором генцианового фиолетового, дистиллированную воду на 1–2 минуты, снимают фильтрованную бумагу, наносят раствор Люголя на 1–2 минуты, сливают его и наливают пипеткой этиловый спирт на 30 секунд. Тщательно промывают водой, докрашивают водным раствором фуксина 1–2 минуты. Промывают и высушивают мазок. Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный.
4. Произвести бактериоскопическое исследование гноя и определить морфологию и тинкториальные свойства имеющихся микроорганизмов.
Взять чистое предметное стекло, произвести обезжиривание его натиранием кусочком сухого мыла, мыло со стекла тщательно удалить с помощью ваты. Место мазка на стекле обозначить ка- рандашом-стеклографом в виде овала в центре стекла площадью примерно 1/3 предметного стекла. Овал начертить на стороне, обратной обезжиренной.
Взять в правую руку бактериальную петлю, простерилизовать в пламени горелки. В левую руку взять пробирку с гноем. Мизинцем правой руки плотно захватить наружный конец ватной пробки, прижав ее к ладонной поверхности руки, и вынуть пробку из пробирки. Обжечь край пробирки в пламени спиртовки. Опустить петлю в пробирку, остудив о стенку, взять материал. Вынуть петлю из пробирки. Быстро обжечь край пробирки и внутреннюю часть пробки. Пробирку закрыть пробкой, поставить в штатив.
На предметное стекло в центр овала внести каплю гноя и равномерно круговыми движениями распределить по всей площади овала. После этого петлю тотчас же, не выпуская из рук, простерилизовать в пламени горелки.
Мазок высушить при комнатной температуре на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки.
Сухой мазок зафиксировать нагреванием на пламени горелки. Стекло держать за край мазком вверх и 3 раза провести через среднюю часть пламени.
Зафиксированный мазок окрасить по Граму (см. это в вопросе
№3).
На окрашенный препарат нанести каплю иммерсионного масла. Провести микроскопию в световом микроскопе с увеличением объектива 90.
Определить форму микробных клеток и отношение к окраске по Граму.
474
5.Сделать посев исследуемого материала петлей на жидкую и плотную питательные среды.
Пробирку с исследуемым материалом берут в левую руку, а петлю за петледержатель – в правую. Петлю прожигают в пламени горелки до покраснения. Вращательным движением вынимают из пробирки ватную пробку, прижимая ее V и IV пальцами правой руки
кладони, и обжигают край пробирки. Осторожно вводят петлю в пробирку, охлаждая ее о внутреннюю поверхность, после чего легким скользящим движением берут материал. Затем вынимают петлю из пробирки, снова обжигают ее край и закрывают пробкой. Далее в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют материал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Открывают пробирку с жидкой средой и вносят материал петлей в верхнюю часть жидкой среды. Пробирку закрывают как описано выше.
6.Выполнить 1 этап выделения чистой культуры, оценить культуральные свойства по готовым посевам.
Бактериологическую петлю стерилизуют в пламени спиртовки (до ее покраснения). Над пламенем спиртовки открывают пробирку с исследуемым материалом. Мизинцем и ладонной поверхностью правой кисти зажимают пробку и вынимают ее. Обжигают края пробирки и пробку, петлю держат как писчее перо. Погружают петлю в исследуемый материал после ее охлаждения в пробирке. Извлекают петлю материала, закрывают пробку над пламенем спиртовки и ставят ее в штатив. Слегка открывают чашку Петри. Для разобщения микробных клеток материал распределяют петлей параллельными штрихами на обе половины чашки. Закрытую чашку, дном кверху, помещают в термостат на 24 часа. Оценку культуральных свойств проводят с учетом величины, пигмента, формы, края колонии и консистенции колонии.
7.Произвести посев на косой агар с целью выделения чистой культуры микроорганизмов.
Берут чашку Петри с МПА с ростом колоний. Отмечают на дне чашки изолированную колонию. Стерилизуют бактериальную петлю в пламени спиртовки. Левой рукой открывают чашку Петри, на бортике чашки охлаждают бактериальную петлю. Петлей снимают часть отмеченной колонии, чашку Петри закрывают.
Берут в левую руку пробирку со скошенным агаром и мизинцем правой руки плотно захватывают наружный конец ватной
475
пробки, прижав ее к ладонной поверхности руки, и вынимают пробку из пробирки. Обжигают край пробирки в пламени горелки. Опускают петлю с взятой колонией бактерий до конденсационной воды у дна пробирки и проводят зигзагообразную линию, скользя петлей по поверхности агара от одного края пробирки к другому, поднимая штрихи от конденсационной воды до верхней части косого агара. Вынимают петлю из пробирки. Быстро обжигают край пробирки и внутреннюю часть пробки. Пробирку закрывают пробкой. Прокаливают петлю в пламени и ставят ее в штатив. Засеянную пробирку подписывают, ставят в штатив, который помещают в термостат.
8.Сделать посев исследуемого материала на чашку с МПА сплошным газоном.
Один мл исследуемого материала набирают стерильной пипеткой и выливают в чашку Петри (слегка открыв ее). Легким покачиванием чашки распределяют материал по всей поверхности агара.
9.Сделать посев для определения биохимических свойств выделенной культуры.
Чистую культуру с косого агара засевают петлей в среды «пестрого» ряда (пептонная вода, 1% раствор глюкозы, лактозы, сахарозы, маннита, мальтозы, индикатор Андреде и поплавок для улавливания газа) и МПБ. Для этого стерилизуют бактериологическую петлю (до покраснения) в пламени спиртовки. В левой руке держат 2 пробирки (первая - косой агар с чистой культурой, вторая - с одной из питательных сред). Вынимают пробки из пробирок мизинцем и ладонной поверхностью кисти над пламенем горелки. Петлю опускают в пробирку
скультурой, после ее остывания берут исследуемую культуру методом соскоба, извлекают из пробирки, вносят поочередно в среды «пестрого» ряда и МПБ. В среду с МПБ после посева культуры помещают индикаторные бумажки, смоченные щавелевой кислотой для выявления индола и раствором уксуснокислого свинца для выявления сероводорода, и закрепляют их у пробки.
10.Выполнить 1 этап бактериологического исследования испражнений больного при подозрении на дизентерию.
Произвести посев испражнений петлей в чашку Петри с питательной средой Плоскирева (технику посева и состав среды см. в вопросах №№6 и 24).
476
11.Определить вид микроба по антигенным свойствам в реакции агглютинации с адсорбированной агглютинирующей сывороткой.
Предметное стекло делят восковым карандашом пополам. На одну половину наносят каплю изотонического раствора хлорида натрия (контроль), а на другую – каплю сыворотки. Затем петлей в каждую каплю вносят небольшое количество бактериальной культуры
иперемешивают круговыми движениями в каждой капле до получения равномерной взвеси. Реакция протекает быстро. Наблюдают за появлением зерен агглютинации в пробах. Учет производят через 3-5 мин.
12.Поставить и оценить ориентировочную реакцию агглютинации для определения вида микроба.
Берут предметное стекло, делят стеклографом на две части: опытную (о) и контрольную (к). На опытную часть пастеровской пипеткой наносят каплю агглютинирующей сыворотки в разведении 1:5, на контрольную – каплю физиологического раствора. Затем в каждой капле тщательно размешивают небольшое количество культуры бактерий до получения гомогенной взвеси. Бактерии вносят прокаленной и остуженной бактериальной петлей. Петля стерилизуется после каждой капли. Результат наблюдают через 1-2 мин. Контрольная капля остается равномерно мутной. В опытной капле в положительном случае наблюдается склеивание бактерий в виде мелких зернышек.
После учета реакции предметное стекло опускают в стакан с дезинфицирующим раствором.
13.Оценить результаты РСК с целью определения антител в сыворотке больного по демонстрационному ряду.
Взять ряд пробирок с разведениями сыворотки больного:
1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, 1:640 и контролями гемолити-
ческой системы, антигена и комплемента.
Учет начать с контрольных пробирок. В пробирке контроля гемолитической системы выявить отсутствие гемолиза, в контролях антигена и комплемента – гемолиз. В опытных пробирках определить отсутствие или наличие гемолиза.
При отсутствие гемолиза РСК положительная. При наличии гемолиза РСК отрицательная. В положительном случае дать заключение о наличии в сыворотке больного специфических антител и определить их титр, т.е. наибольшее разведение сыворотки больного, при котором отсутствует гемолиз.
477