3. Указать биологическую роль кальция. Применение метода определения кальция при экспертизе продовольственных товаров.
Примечание. Для того чтобы перевести содержание Са в единицы системы СИ, надо найденную его величину в мг% умножить на коэффициент 0,2495, получим количество Са в моль/л.
Метод основан на непосредственном титровании двунатриевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА; трилон Б) ионов кальция, связанных с мурексидом (окрашен в розовый цвет), который, отделяясь от кальция вследствие титрования ЭДТА, окрашивает раствор в фиолетовый цвет. По расходу ЭДТА на титрование ведут расчет количества кальция.
Ход опыта
Налить в 1-ю колбу (опыт) 1 мл молока или гомогената мышечной ткани и 24 мл дистиллированной воды, а во 2-ю колбу (контроль) - 25 мл дистиллированной воды.
В обе колбы прилить по 2 мл 10% раствора КОН и внести по несколько кристалликов (на кончике скальпеля) мурексида. Раствор приобретает розовый цвет.
Содержимое колб оттитровать 0,01 н раствором ЭДТА до фиолетового окрашивания раствора. Расчет произвести по формуле:
Х = (а— в) 0,2 100,
где: X - количество мг кальция в 100 мл исследуемого материала;
а - количество мл ЭДТА, израсходованное на титрование пробы с исследуемым материалом;
в - количество мл ЭДТА, израсходованное на титрование контрольной пробы;
0,2 - количество мг кальция, эквивалентное 1 мл 0,01 н раствора ЭДТА;
100 - коэффициент пересчета в мг%.
Задание: смотреть работу №39.
Содержание неорганического фосфора в молоке в норме колеблется:
Коровье – 11,6 % (85 мг %);
Козье – 13,7 %;
Кобылицы – 18,0 %;
Женское – 7,3 %.
Понижение его уровня наблюдается при гиповитаминозе Д, остеомаляции, недостатке в кормах и т. д.
Сущность метода заключается в образовании комплексной фосфорномолибденовой кислоты, восстанавливаемой с помощью витамина С, эйконогена и других веществ (восстановители) в продукты, придающие раствору синюю окраску (молибденовая синь). Ее интенсивность пропорциональна количеству фосфора.
Ход опыта
Налить в пробирку (опыт) 3 мл дистиллированной воды, 1 мл молока или гомогената мышечной ткани, 1 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты, встряхнуть и отфильтровать через обеззоленный фильтр.
Взять 1 мл фильтрата, добавить к нему 0,5 мл молибденового реактива, 0,5 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 3 мл дистиллированной воды. Встряхнуть содержимое. Образуется синяя окраска раствора.
Одновременно приготовить контроль, для чего налить в пробирку 0,2 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты, 0,5 мл молибденового реактива, 0,5 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 3,8 мл дистиллированной воды. Через 10 мин провести колориметрию растворов на ФЭКе при длине волны 630—690 нм (красный фильтр) в кюветах шириной 1 см.
Используя калибровочную кривую, построенную ранее со стандартным раствором фосфора, рассчитать, его количество в исследуемой пробе с молоком или гомогенатом мышечной ткани.
Построение калибровочной кривой
Из КН2РО4 приготовить стандартный раствор с содержанием фосфора 0,02 мг/мл. Налить его в 7 пробирок (соответственно 0,10; 0,15; 0,20; 0,25; 0,30; 0,35 и 0,40 мл) и довести дистиллированной водой до 0,8 мл. Затем в каждую пробирку влить 0,2 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты, 0,5 мл молибденового реактива, 0,5 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 3 мл дистиллированной воды. Встряхнуть содержимое пробирок и через 10 мин произвести их колориметрию против контроля (его приготовление см. выше!). Для построения графика отложить на оси абсцисс количество мг фосфора в пробе, а на оси ординат - ее оптическую плотность (Д).
Задание: 1. Выполнить опыт.
2. Определить количество мг фосфора в исследуемой пробе и сделать пересчет на 100 мл исследуемого биоматериала (в мг%).
3. Сравнить полученный результат с содержанием фосфора в норме и при отклонении, указать предполагаемые причины и последствия.
1. Вода, ее количество, распределение и состояние в организме, образование в клетках (пример реакций), биороль в метаболизме (подтвердить формулами, реакциями, схемами, процессами), регуляция содержания, выделение из организма.
2. Макро- и микроэлементы (понятие, представители, поступление в организм, механизм усвоения, участие в химии клеток, тканей и органов, выделение из организма).
Молоко является секретом молочной железы. Химический состав молока у различных животных неодинаков. В нем содержится вода (68 - 90'%), белки (0,9 - 5,1%), липиды (1,0 - 17,1%), углеводы (2,8 - 6,5%), минеральные вещества (0,5 - 1,5%). В молоке обнаружены витамины, ферменты. Его состав и количество зависят от здоровья животных, их породы, возраста, условий кормления, ухода, содержания и т. д.
В молоке имеются кислые продукты (белки, аминокислоты, другие органические кислоты). Общая кислотность показывает общее количество кислотреагирующих веществ в растворе. Для молока она выражается в градусах Тернера (°Т), т. е. количестве мл 0,1 н раствора NaOH, необходимого для нейтрализации кислот в 100 мл молока. Свежее (молоко имеет кислотность 15 - 18°Т, кобылы и ослицы - около 6°Т.
Вследствие молочнокислого гликолиза кислотность молока может повышаться. Это может быть при неправильном хранении молока, болезнях животных и т. д. Увеличение кислотности отрицательно сказывается на использовании молока.
Ход опыта
Налить в колбу 10 мл молока, 20 мл дистиллированной воды, прибавить 3 капли 2% раствора фенолфталеина и оттитровать 0,1 н раствором NaOH до розового окрашивания, не исчезающего в течение 2 мин.
Количество мл израсходованной щелочи умножить на 10. Получаем кислотность молока в градусах Тернера.
Задание: 1. Выполнить опыт.
2. Определить кислотность молока и сделать вывод о его качестве.
3. При повышении кислотности указать предполагаемые причины и возможные пути их устранения.
Казеиноген – важнейший белок молока. Остатки фосфорной кислоты в молекуле казеиногена связаны с остатками серина. В молоке казеиноген находится в виде растворимых в воде анионов кальцината. При подкислении до рН 4,7 (изоэлектрическая точка казеиногена) белок выпадает в осадок. Добавление избытка кислоты вызывает перезарядку белковых молекул и переход их снова в раствор.
Казеиноген высаливается нейтральными солями (хлористым натрием, сернокислым аммонием и др.).
Под действием пищеварительных ферментов (пепсина, химозина) казеиноген превращается в казеин, кальциевая соль которого в отличие от казеиногена нерастворима в воде.
Реактивы: а) молоко, цельное или (лучше) снятое, б) уксусная или молочная кислота, 10%-ный раствор, в) едкий натр, 1%-ный раствор.
Ход опыта.
В пробирку пипеткой вносят 2 мл молока, прибавляют столько же дистиллированной воды и по каплям – 10%-ный раствор уксусной или молочной кислоты до выпадения осадка (избегать избытка кислоты!). Осадок отфильтровывают на бумажном фильтре и несколько раз промывают дистиллированной водой (на фильтре), после чего растворяют в 1%-ном растворе едкого натра. Раствор фильтруют через бумажный фильтр, смоченной водой. С фильтром производят цветные реакции на белки и отдельные аминокислоты (биуретовую, нингидриновую, ксантопротеиновую, Адамкевича, Шульце-Распайля, Милона и др.).
Задание: 1. Выполнить опыт.
2. Написать реакцию превращения казеиногена в казеин.
3. Написать биуретовую реакцию.