Материал: Эшерихии

21

серогруппы О26, О111, О145, О157. Особую эпидемиологическую опасность представляют штаммы Е. coli О157:Н7 и Е. coli О104:Н4. Летальность при эшерихиозе, вызванном Е. coli О157, достигает 3-5%. Кишечная палочка серогруппы О157:Н7 устойчива к неблагоприятным факторам внешней среды, что способствует ее выживанию и размножению в продуктах питания. Энтерогеморрагический штамм Е. coli О104:Н4 продуцирует шига-токсин, но не синтезирует белок интимин (фактор адгезии) и отличается полирезистентностью к антибиотикам. В 2011 г. в 16 странах было зарегистрировано 4321 случай эшерихиоза, вызванного Е. coli О104:Н4. При этом отмечалось более 900 случаев ГУС. Скончалось 54 человека. Изучение показало, что этот серотип содержит гены ЭГКП и ЭАКП, а также гены антибиотикорезистентности. Структура генома Е. coli О104:Н4 представлена на рисунке 23.

Рисунок 23 – Геном E. coli О104:Н4 (Karch H. e. a., 2011).

Энтероагрегативные кишечные палочки (ЭАКП) не образуют цитотоксины и не проникают в эпителиальные клетки. Они поражают эпителий тонкого кишечника и склонны к аутоагглютинации. Свое название ЭАКП получили за счет быстрого прикрепления к поверхности клеток с помощью фимбриальных адгезинов AAF (aggregative adherence fimbriae). Прикрепившись к эпителиальным клеткам, они формируют агрегаты в виде кирпичной кладки. После прикрепления ЭАКП стимулируют выработку клетками слизи, что ведет к образованию толстой слизистой биопленки. В образовании пленки участвуют белок дисперзин. Фактором патогенности ЭАКП является также энтеротоксин ST. На рисунке 24 изображены агрегаты ЭАКП.

22

Рисунок 24 – ЭАКП на слизистой оболочке тощей кишки ребенка. Сканирующая электронограмма (Маянский А.Н., 2006).

На рисунке 25 представлен механизм действия энтероагрегативных кишечныхЭАКП палочек.

Адгезия и агрегация

Энтеротоксин

Рисунок 25 – Механизм действия энтероагрегативных кишечных палочек на эпителиальные клетки.

ЭАКП колонизируют тонкий и толстый кишечник, вызывают секреторную диарею, поражают как детей, так и взрослых. Агрегативную адгезию обусловливают пили AAF/1, AAF/2, GVVPQ. К факторам патогенности ЭАКП относятся также термостабильный энтеротоксин, гемолизин, цитотоксин.

Диффузно-адгерентные кишечные палочки (ДАКП) имеют как фимбриальные, так и афимбриальные адгезины. Механизм действия ДАКП на клетки слизистой оболочки кишечника представлен на рисунке 26.

24

В качестве комбинированной среды используют среду Клиглера, среду Олькеницкого или другую среду. Среда Клиглера позволяет выявлять ферментацию лактозы и глюкозы и образование сероводорода. Исходный цвет среды Клиглера – оранжево-красный. Ферментация углеводов проявляется изменением цвета скоса и столбика среды на желтый. Образование газообразных продуктов разложения сахаров проявляется характерными разрывами столбика среды и образованием пузырьков. Образование сероводорода приводит к появлению черного преципитата (рисунок 28).

а б Рисунок 28 – Характер роста кишечной палочки на среде Клиглера: а – контроль

(незасеянная среда); б – рост E. coli. Цвет всей среды изменился на желтый (ферментация лактозы и глюкозы), в столбике среды – пузырьки газа, разрывы (расщепление углеводов до кислоты и газа), отсутствие черного преципитата (сероводород не образуется).

Среда Олькеницкого предназначена для определения ферментации лактозы, сахарозы, глюкозы и наличия уреазы. Исходный цвет среды – розовый. Ферментация углеводов и образование газов проявляется теми же признаками, что и на среде Клиглера. Наличие уреазы сопровождается изменением цвета среды на красный.

Для изучения биохимических свойств используют среду Симмонса, среду с мочевиной, среду с лизином, среды Гиса с адонитом, инозитом, сорбитом, рамнозой, среду Кларка.

Для проведения реакции агглютинации на стекле используют диагностические поливалентные эшерихиозные сыворотками групп ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД и ОКЕ (рисунок 29).

Рисунок 29 – Диагностические поливалентные эшерихиозные сыворотки.

25

Каждая группа сывороток содержит специфические О- и К-агглютинины против антигенов патогенных эшерихий. Агглютинины получают из сывороток кроликов или баранов, гипериммунизированных корпускулярными антигенами эшерихий.

Для идентификации E. coli по ферментативным свойствам могут быть использованы автоматизированные диагностические полоски, тест-системы API-20E (рисунок 30), Enterotube, пластины биохимические, дифференцирующие энтеробактерии и другие системы.

Рисунок 30 – Идентификация эшерихий с помощью тест-системы API-20E: верхняя пластина – контроль, нижняя пластина – опыт.

В частности, пластина биохимическая, дифференцирующая энтеробактерии (рисунок 31), предназначена для идентификации энтеробактерий по 20 биохимическим признакам в течение 20-24 часов.

Рисунок 31 – Пластины биохимические, дифференцирующие энтеробактерии ПБДЭ.

Набор ММТ Е24 (мультимикротесты для биохимической идентификации энтеробактерий) позволяет одновременно проводить идентификацию по 24 показателям (рисунок 32).