Материал: Частная вирусология 1

31

Отобранный со слизистых оболочек материал транспортируют в лабораторию в питательных средах с белковым стабилизатором (раствор Хенкса, среда 199, среда Игла с альбумином или желатином). До исследования допускается хранение материала при температуре +4ОС не более 48 часов.

Цель лабораторной диагностики гриппа:

-лабораторное подтверждение клинического диагноза “грипп”;

-определение этиологии эпидемии или пандемии;

-прогнозирование последующих эпидемий;

-выявление иммунного состояния населения в межэпидемический период;

-определение напряженности поствакцинального иммунитета;

-определение распространенности вируса среди млекопитающих и

птиц.

Для диагностики гриппа используют следующие методы:

-экспресс-методы обнаружения вируса;

-вирусологический метод (выделение вирусов гриппа и их идентификация);

-методы серологической диагностики.

Вкачестве экспресс-методов диагностики гриппа используют РИФ, ИФА и ПЦР.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) или метод флюоресцирующих антител (МФА) позволяет обнаружить антигены вируса гриппа через 2-3 часа после отбора исследуемого материала. Для этого готовят препараты на стекле и обрабатывают их гипериммунными люминесцентными сыворотками. Исследование проводят с использованием люминесцентного микроскопа. Пораженные вирусом клетки обладают специфическим свечением.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет обнаружить в исследуемом материале родоспецифический антиген вирусов гриппа А или В (рибонуклеопротеин) с помощью тест-систем, содержащих моноклональные антитела к рибонуклеопротеину (РНП) соответствующих типов вирусов. Моноклональные антитела сорбируют в лунках планшетов, после чего к ним последовательно добавляют исследуемый материал, конъюгат (антитела к РНП, меченые пероксидазой) и субстрат (смесь перекиси водорода с ортофенилендиамином). Положительный результат проявляется желтой окраской содержимого лунок. Интенсивность окраски измеряется с помощью спектрофотометров (ридеров).

32

Спомощью ИФА можно выявлять не только вирусный антиген, но

ипротивовирусные антитела в сыворотке крови. С этой целью в лунках планшетов сорбируют вирусный антиген (рибонуклеопротеин). В лунки последовательно добавляют исследуемый материал, конъюгат (антитела к антителам, меченые ферментом) и субстрат. Положительный результат проявляется специфическим окрашиванием содержимого лунок.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет выявлять в исследуемом материале генетический материал (РНК) вирусов гриппа.

Вирусологический метод предусматривает использование куриных эмбрионов или клеточных культур. При использовании 9-11- дневных куриных эмбрионов заражение проводят в амниотическую или аллантоисную полости. Из клеточных культур используют первичную культуру клеток почек обезьян, клетки почек собак и др.

Индикацию вирусов в амниотической или аллантоисной жидкости куриных эмбрионов проводят с помощью реакции гемагглютинации с эритроцитами морской свинки или человека. Индикацию вирусов в культуре клеток осуществляют по цитопатическому действию (ЦПД), образованию “бляшек”, “цветной пробе”, реакции гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции.

Идентификацию вирусов проводят по антигенной структуре. Чаще всего тип вирусов гриппа определяют в РСК, а подтип вируса - в РТГА.

Серологическая диагностика гриппа основывается на выявлении возрастания титра противовирусных антител в сыворотке крови в динамике заболевания. Для этого используют микрометод РТГА в микропланшетах. При постановке реакции используют разведения сыворотки крови, коммерческие диагностикумы вирусов гриппа и взвесь эритроцитов. Диагноз считается положительным в случае четырехкратного увеличения титра антител в парных сыворотках, полученных с интервалом в 10-14 дней. Кроме РТГА для серологической диагностики в настоящее время все чаще используют ИФА.

Лечение. В большинстве случаев лечение гриппа проводится с помощью симптоматических средств (жаропонижающих,

сосудосуживающих, антигистаминных), витаминов, детоксикационных препаратов, индукторов эндогенного интерферона и иммуномодуляторов (арбидола).

К специфическим противовирусным средствам относятся препараты адамантанового ряда (амантадин, ремантадин) и ингибиторы нейраминидазы (озельтамивир или тамифлю и занамивир или реленза).

33

Препараты адамантанового ряда блокируют М-белки, “забивают” ионные каналы и ингибируют процесс высвобождения вирусных РНК в составе эндосомы.

Ингибиторы нейраминидазы угнетают рецепторы гемагглютинина на поверхности клеток, а также связываются с консервативными участками нейраминидазы и блокируют выход вирусных частиц из инфицированных клеток.

При тяжелых формах гриппа применяют противогриппозный донорский иммуноглобулин и нормальный человеческий иммуноглобулин для внутривенного введения. В случае присоединения бактериальной инфекции назначают антибиотики.

Профилактика гриппа. Для неспецифической профилактики гриппа проводят противоэпидемические мероприятия, ограничивающие распространение вирусов гриппа (изоляция больных, карантин в детских коллективах и лечебных учреждениях, дезинфекция белья и посуды, ношение марлевой повязки и т. п.). С целью повышения общей сопротивляемости организма во время эпидемий интраназально применяют препараты оксолина, альфа-интерферона.

Для специфической профилактики гриппа используют вакцины. Вакцинацию проводят перед началом эпидемического сезона (октябрь - ноябрь). Используют вакцины, приготовленные на основе штаммов, прогностически “актуальных” в данный эпидсезон. В настоящее время в России разрешены к применению как живые, так и инактивированные вакцины.

Живыми ослабленными вакцинами являются аллантоисные вакцины для интраназального применения Инфлювир (рисунок 22) и Ультрагривак.

Рисунок 22 – Живая противогриппозная вакцина Инфлювир. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Следует отметить, что живые ослабленные вакцины в настоящее время практически не используются.

35

Субъединичные вакцины содержат только протективные антигены вируса гриппа - гемагглютинин и нейраминидазу. К числу субъединичных вакцин относятся Гриппол, Гриппол-плюс, Инфлювак, Агриппал, Инфлексал (рисунок 25).

Рисунок 25 – Гриппозные субъединичные вакцины. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Широкое применение в настоящее время находят инактивированные (расщепленные, субъединичные) вакцины против гриппа: Агриппал S1, Бегривак, Ваксигрипп, Грипповак, Гриппол, Гриппол Нео, Гриппол Плюс, Гриппол Квадривалент четырехвалентная, Инфлексал, Инфлювак, МикроФлю, МоноГриппол Нео, МоноГриппол Плюс, Пандефлю, Совигрипп, Ультрикс, Ультрикс Квадри вакцина, Флюарикс, Флюваксин, Флю-М.

Вакцинация против гриппа предусматривает использование вакцин, содержащих антигены наиболее “актуальных” в предстоящий сезон типов вирусов гриппа.

Вопросы для контроля усвоения материала

1.Таксономическое положение вирусов гриппа.

2.Структура вируса гриппа типа А.

3.Цикл репродукции вируса гриппа типа А.

4.Эпидемиология и патогенез гриппа.

5.Клиническая картина гриппа.

6.Лабораторная диагностика гриппа.

7.Принципы лечения гриппа.

8.Профилактика гриппа.

Тренировочные тесты

1. Вирусы гриппа относятся к семейству: