Материал: vse_metody_MIKROB

Строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных

бактерий

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. С помощью преподавателя освоить технику приготовления мазка культур бактерий из жидкой и с плотной питательных сред.

Этапы приготовления мазка:

1.Собственно приготовление мазка.

-обезжирить предметное стекло сухим мылом и обвести снизу границы маз-

ка карандашом по стеклу;

-приготовление мазка из жидкой питательной среды: прокалить петлю, над спиртовкой открыть пробку пробирки, обжечь края пробирки, набрать кап-

лю культуры петлей. Снова обжечь края пробирки и закрыть пробкой. Про-

бирку поставить в штатив, нанести каплю культуры на предметное стекло и распределить петлей параллельными движениями (диаметр мазка – 0,5-

1см). Прокалить петлю;

-приготовление мазка с плотной питательной среды: прокалить петлю, над спиртовкой открыть пробирку с физиологическим раствором, обжечь края пробирки и набрать петлей каплю физиологического раствора. Снова об-

7

жечь края пробирки и закрыть пробкой. Нанести каплю на предметное стек-

ло. Затем прокалить петлю, над спиртовкой открыть пробирку с плотной питательной средой, обжечь края пробирки. С поверхности плотной среды взять петлей немного культуры бактерий, снова обжечь края пробирки и за-

крыть пробкой. Внести культуру в каплю физ. раствора, распределить мик-

робную взвесь параллельными движениями (диаметр мазка – 0,5-1см). Про-

калить петлю.

2.Высушить мазок высоко над пламенем спиртовки.

3.Фиксировать мазок жаром. Для этого стекло 3 раза внести в среднюю треть пламени спиртовки на 1-2 секунды. Приступить к окрашиванию мазка.

2.Самостоятельно приготовить мазки из культур стафилококков (плотная пита-

тельная среда) и кишечных палочек (жидкая питательная среда).

Окрасить мазок стафилококков метиленовым синим – 3 минуты, а мазок кишечных палочек фуксином Пфейффера – 1 минуту. Промыть мазки водой и высушить фильтровальной бумагой.

3. Приготовить мазки из смесей культур: S.epidermidis + E.сoli и B.anthracoides + E.coli. Окрасить мазки по Граму.

4.Микроскопировать приготовленные препараты.

5.Зарисовать препараты.

6. Убрать рабочее место.

8

Занятие №3

Тема. Строение бактериальной клетки. Кислотоустойчивые бактерии. Окраска по Цилю-Нильсену. Спорообразование у бактерий и его значение.

Цель занятия. Изучить строение бактериальной клетки, процесс спорообразо-

вания у бактерий. Освоить методику окраски препаратов по методу Циля-

Нильсена.

I.Теоретические знания:

1.Оболочечные структуры бактериальной клетки: капсула (капсульный слой),

клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана. Особенности клеточной стен-

ки кислотоустойчивых бактерий. Окраска по Цилю-Нильсену. Механизм окра-

ски. L-формы бактерий, их медицинское значение. Микоплазмы.

2. Цитоплазма, ее составные: нуклеоид (генофор), плазмиды, рибосомы, мезо-

сомы, включения.

3.Поверхностные структуры бактериальной клетки: жгутики, пили.

4.Спорообразование у бактерий.

II.Практические навыки:

1.Приготовление мазка кислотоустойчивых (вакцинные туберкулезные бакте-

рии – BCG) и кислотоподатливых (стафилококки) бактерий.

2. Окраска мазка по Цилю-Нильсену.

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

К основным структурам бактериальной клетки относят оболочечные

структуры, цитоплазму и органеллы.

Строение бактериальной клетки

1.Оболочечные структуры бактериальной клетки.

Коболочечным структурам бактериальной клетки относят капсульный слой, клеточную стенку и цитоплазматическую мембрану.

Снаружи многие бактерии имеют КАПСУЛЬНЫЙ СЛОЙ (МИКРО-

КАПСУЛУ). Это слизистое образование, не превышающее диаметр бактери-

альной клетки. У некоторых бактерий имеется ИСТИННАЯ КАПСУЛА – сли-

зистый слой, превышающий диаметр бактериальной клетки. Капсула не являет-

ся обязательной структурой. У большинства бактерий она имеет полисахарид-

ную природу. У некоторых (Bacillus anthracis) – состоит из белка.

2

Большинство бактерий образуют капсулу только в макроорганизме

(in vivo):

Streptococcus pneumoniaе – возбудитель крупозной пневмонии;

Bacillus anthracis – возбудитель сибирской язвы;

Clostridium perfringens – возбудитель газовой гангрены;

Francisella tularensis – возбудитель туляремии;

Yersinia pestis – возбудитель чумы.

Некоторые бактерии образуют капсулу в макроорганизме и на питательной среде (in vivo и in vitro):

Klebsiella pneumoniaе – возбудитель пневмонии;

Klebsiella oxytoca– возбудитель сепсиса, инфекций мочевыводящих путей;

Klebsiella granulomatis – возбудитель паховой гранулемы.

Функции капсулы:

-в макроорганизме защищает бактерии от фагоцитоза и действия антител;

-во внешней среде предохраняет бактерии от высыхания.

Капсулу выявляют в окраске по Бурри-Гинсу. В результате окраски бакте-

рии красного цвета, вокруг них бесцветные капсулы на черно-розовом фоне.

Klebsiella pneumoniaе в окраске по Бурри-Гинсу

3