Материал: Тец руководство

Необходимо помнить, что положительный результат виру­сологического исследования имеет абсолютную диагностичес­кую ценность только в случае выделения вируса из стерильного материала (спинномозговая жидкость, кровь, биоптаты орга­нов), поскольку бессимптомное носительство широко распро­странено (до 50 % здорового населения). При обнаружении вируса в испражнениях или глоточных смывах необходимо серологическое подтверждение диагноза.

Биопроба. Для выделения вирусов Коксаки А, которые пло­хо репродуцируются в культурах клеток, применяют биопробу — исследуемым материалом заражают новорожденных белых мы­шей. В положительном случае у зараженных животных на 3—5-й день развиваются вялые параличи. Идентификацию этих вирусов проводят в РН на новорожденных мышах с мо­новалентными диагностическими сыворотками против различ­ных серотипов вирусов Коксаки А.

Экспресс-методы диагностики. Молекулярно-биологи-ческие исследования. РНК вирусов в исследуемом мате­риале обнаруживают методом гибридизации НК (ДНК-зондов).

Серодиагностика. С диагностической целью в крови больных определяют наличие специфических противовирусных имму­ноглобулинов класса М (IgM) с помощью ИФА. Для ретроспек­тивного подтверждения диагноза применяют также метод парных сывороток. С этой целью кровь у больного берут дважды: в первые дни болезни и через 3—4 нед. Раннюю сыворотку сохра­няют в холодильнике и реакцию ставят одновременно с обеими сыворотками. Антитела определяют в реакции нейтрализации в культуре клеток с эталонными штаммами энтеровирусов, при­надлежащих к тем серотипам, которые чаще всего выделяют от больных (табл. 19.1.4). Для серодиагностики заболеваний, вы­званных гемагтлютинирующими вирусами Коксаки, используют РТГА. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза. При обнаружении антител, соответствующих серотипу выделенного вируса, диагноз считается подтвержденным.

• Микробиологическая диагностика весенне-летнего клещево­го энцефалита

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Серодиагностика. Обнаружение противовирусных антител в крови больного является основным методом диагностики кле­щевого энцефалита, поскольку к моменту появления симптомов заболевания период вирусемии заканчивается. Выделение вируса из спинномозговой жидкости редко бывает успешным. Для се­родиагностики применяют метод парных сывороток. Используют РН, РСК, РТГА, реакцию латекс-агглютинации, ИФА и другие

реакции со стандартными вирусными антигенами. Диагности­ческое значение имеет нарастание титра специфических анти­тел не менее чем в 4 раза. Оценку результатов производят с учетом анамнестических данных: вакцинация, пассивная им­мунизация (введение противоэнцефалитной сыворотки или иммуноглобулина).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. С целью экспресс-диагностики клещевого энце­фалита применяют методы определения зараженности клеща, извлеченного из места укуса. Основным методом является ИФ. Готовят мазки-отпечатки и обрабатывают флюоресцирующими антителами к антигенам вируса клещевого энцефалита. В по­ложительном случае наблюдается специфическое свечение скоплений вирусных антигенов внутри клеток, присутствую­щих в материале. Наличие антигенов вируса в организме клеща можно определить и с помощью других иммунологических методов (РИГА со взвесью исследуемого материала и эритро­цитами, нагруженными антителами к вирусу клещевого энце­фалита, ИФА и др.). Предварительный ответ получают спустя 2-3 ч.

• Микробиологическая диагностика энцефалитов, вызывае­мых другими арбовирусами и аренавирусами

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Лабораторная диагностика энцефалитов, вызываемых арбо­вирусами и аренавирусами, осуществляется аналогично диа­гностике весенне-летнего клещевого энцефалита. Необходимо помнить, что наличие сходных групповых антигенов у арбови-русов во многих случаях не позволяет установить, какой имен­но возбудитель из группы родственных вирусов явился причи­ной заболевания.

• Микробиологическая диагностика бешенства

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: слюна животного, явившегося источником заражения; соскобы с роговицы глаза, биоптаты кожи (затылочной области), кровь, спинномозговая жидкость (при необходимости подтверждения клинического диагноза); биоптаты мозга (для постмортальной диагностики).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Гистологическое исследование. При постмортальной диаг­ностике бешенства проводят морфологическое исследование сре­зов головного мозга (области гиппокампа и мозжечка), окрашен­ных метиленовым синим и эозином. В 70—90 % случаев в зара­женных нейронах удается обнаружить признаки характерного ЦПД вируса бешенства — присутствие внутрицитоплазматичес-ких включений — телец Бабеша—Негри (рис. 19.1.1; на вклейке). Тельца окрашиваются в фиолетово-красный цвет, имеют ок­руглую или овальную, реже неправильную форму, диаметр 4—10 мкм.

Вирусологическое исследование и биопроба. Слюну подозри­тельного животного вводят интрацеребрально новорожденным белым мышам. Реже для выделения вируса из слюны применяют клеточные культуры (линии VERO, диплоидные клетки человека и др.). Присутствие вируса в биоптатах мозга зараженных мышат или клетках культуры определяют по наличию его антигенов с помощью метода ИФ. Для этого срезы мозга или клетки зара­женной культуры обрабатывают флюоресцирующими противо­вирусными антителами. В положительном случае при люми­несцентной микроскопии препаратов наблюдается специфи­ческое свечение в цитоплазме зараженных клеток.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Присутствие антигенов виру­са в соскобах с роговицы глаза, биоптатах кожи или биоптатах мозга (при постмортальной диагностике) выявляют методом ИФ (см. выше). Необходимо помнить, что тесты становятся положительными только на поздних стадиях заболевания и применяются исключительно с целью подтверждения клини­ческого диагноза.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные НК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода зондов.

Серодиагностика. Наличие противовирусных антител в кро­ви и спинномозговой жидкости пациента определяют методом непрямой ИФ и в РН (в культуре клеток или на белых мышах). Серодиагностика, как и другие существующие методы лабора­торной диагностики бешенства, не позволяет своевременно установить диагноз, поскольку антитела в организме больного появляются только на поздних стадиях заболевания.

• Микробиологическая диагностика поражений ЦНС при ви­русном паротите

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жидкость (собирают в стерильный контейнер и сохраняют при +4 "С не более 48 ч). При необходимости более длительного хранения материал замораживают и хранят при —70 "С.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры вируса из спинномозговой жидкости является ведущим мето­дом диагностики поражений ЦНС при вирусном паротите (см. главу 21).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммунохи­мические исследования. Методы обнаружения антигенов возбудителя в исследуемом материале — см. главу 21.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

• Микробиологическая диагностика поражений ЦНС, вызван­ных вирусом кори

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жид­кость, биоптат тканей ЦНС.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Спинномозговую жидкость центрифугируют, из осадка, содержащего слущенные клетки, готовят мазки. Мазки или препараты тканей головного мозга окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В положитель­ном случае удается обнаружить признаки ЦПД — гигантские многоядерные клетки, часто содержащие внутрицитоплазмати-ческие включения. В поздних стадиях заболевания, а также при хронических формах инфекции (в частности, под остром скле-розирующем панэнцефалите — ПСПЭ) типично появление внутриядерных включений. Метод обладает низкой чувстви­тельностью и специфичностью.

Вирусологическое исследование. Вирус кори с трудом удается культивировать in vitro, поэтому выделение чистой культуры возбудителя из исследуемого материала редко применяют с диагностической целью (см. главу 21). Другой причиной явля­ется низкое содержание вируса в спинномозговой жидкости. Необходимо помнить, что при ПСПЭ в организме персисти-рует дефектный вирус, который не удается культивировать с помощью стандартных методов. В этом случае применяют ме­тод совместного культивирования клеток ткани мозга или пе­риферической крови пациента с культурой клеток, чувстви­тельных к вирусу. Исследование занимает не менее 1 мес. Присутствие вируса определяют по ЦПД и путем выявления его антигенов методом ИФ.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку­лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках био-птата мозга и слущенных клетках спинномозговой жидкости выявляют методом ИФ (см. главу 21). Необходимо иметь в виду, что отрицательный результат исследования не исключает заболевания, что объясняется малым содержанием вируса в клетках спинномозговой жидкости и сравнительно низкой чув­ствительностью метода. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материале может быть выявлено с помо­щью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные НК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Обнаружение специфических противови­русных антител в спинномозговой жидкости является ведущим методом диагностики поражений ЦНС, вызываемых вирусом кори. Повышенное содержание противокоревых антител в спинномозговой жидкости является характерным для всех форм патологии ЦНС, обусловленных этим вирусом. Наличие противокоревых антител в спинномозговой жидкости опреде­ляют с помощью различных серологических реакций (см. главу 21). Методы ИФА и непрямой ИФ являются наиболее чувст­вительными и дают положительный результат в большинстве случаев.

• Микробиологическая диагностика поражений ЦНС, вызван­ных вирусом краснухи

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жидкость.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Серодиагностика. Обнаружение специфических противови­русных антител в спинномозговой жидкости является ведущим методом диагностики поражений ЦНС, вызываемых вирусом краснухи (см. главу 21).

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных HTLV-1

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Серодиагностика. Обнаружение противовирусных антител в крови пациента с помощью ИФА применяют в качестве ос­новного метода лабораторной диагностики тропического спас­тического паралича. В случае положительного результата с целью верификации осуществляют поиск антител к индивиду­альным вирусным белкам методом иммуноблоттинга.

• Микробиологическая диагностика инфекций ЦНС, вызван­ных герпесвирусами (вирусы простого герпеса 1 и 2-го типа (HSV-\, HSV-2), вирус ветряной оспы/опоясывающего
лишая (VZV), цитомегаловирус человека (CMV), вирус Эпштейна-Барр (EBV).

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: спинномозговая жидкость.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ: см. главу 21.

Необходимо помнить, что при герпетическом энцефалите выделение вируса из спинномозговой жидкости не всегда бы­вает успешным. В этом случае диагноз ставят на основании обнаружения вирусных антигенов, нуклеиновых кислот и фер­ментов, а также высоких титров противовирусных антител в спинномозговой жидкости.

• Микробиологическая диагностика инфекций ЦНС, вызванных JCV

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптат из поражен­ного участка головного мозга.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Основано на обнаружении из­мененных клеток с признаками ЦПД (увеличение клеток, на­личие одиночных базофильных внутриядерных включений) в биоптатах головного мозга.

Вирусоскопическое исследование. Метод электронной мик­роскопии позволяет обнаружить зрелые вирусные частицы в клетках пораженных участков головного мозга.

Экспресс-методы диагностики: иммунохнмические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Обнаружение вирусных антигенов в клетках пора­женных участков головного мозга осуществляют методом ИФ.

Молекулярно-биологические исследования. Обнару­жение вирусных ДНК в зараженных клетках осуществляют методом ДНК-зондов (ДНК-гибридизация in situ), ПЦР.

Серодиагностика — обнаружение антител к вирусным бел­кам — не информативна, поскольку антитела присутствуют также у здоровых вирусоносителей.

• Микробиологическая диагностика инфекций ЦНС, вызванных прионами

Общепринятые методы лабораторной диагностики отсутст­вуют. Диагноз устанавливают преимущественно на основании клинической картины заболевания и подтверждают гистологи­ческим исследованием тканей пораженных участков головного мозга. Наблюдается дегенерация нейронов и аксонов серого вещества головного мозга, накопление амилоидоподобного ве­щества, образующего бляшки и фибриллярные скопления внутри и вне нейронов, гипертрофия глиальных клеток и дру­гие изменения, характерные для спонгилоформной энцефало­патии. В последние годы разработаны методы иммунохимичес-кого обнаружения аномальной формы приона (РгР^^с) в клетках головного мозга методом ИФ. Метод также позволяет проде­монстрировать накопление PrP^Sc в клетках роговицы глаза на ранних стадиях болезни.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Диагностические поливалентная и типоспецифические полио-миелитные сыворотки. Применяют для идентификации и типи-рования вирусов полиомиелита.

Диагностические поливалентные и типоспецифические (моно-валентные) сыворотки к вирусам Коксаки и ECHO. Применяют для идентификации и типирования соответствующих вирусов.

Пероральная живая вакцина против полиомиелита (трехва­лентная). Содержит ослабленные штаммы вирусов полиомие­лита I—III типов. Вакцина выпускается в жидком виде и в форме драже. Применяют для профилактики полиомиелита (создание активного иммунитета).

Парентеральная инактивированная вакцина против полиомие­лита (трехвалентная). Содержит инактивированные вирусы по­лиомиелита I—III типов. Применяют для профилактики полио­миелита (создание активного иммунитета).

Диагностикум из вируса клещевого энцефалита. Используют для серодиагностики клещевого энцефалита.