Материал: Тец руководство

Перечислить продукты, подлежащие контролю на микотоксины, антибиотики, консерванты, пестициды.

Методические указания

Определение фекального загрязнения предметов обихода (ин­вентарь, оборудование, мебель, посуда, игрушки и др.) и рук персонала. Стерильным ватным тампоном, увлажненным изо­тоническим раствором хлорида натрия, делают смыв с иссле­дуемого предмета. Тампон помещают в среду Кесслера или втирают в поверхность среды Эндо. Посевы на плотных средах инкубируют при 37 "С, на жидких средах — при 43 °С.

Обсемененность предметов обихода золотистым стафило­кокком и фекальным стрептококком устанавливают аналогич­ным способом, используя для этого соответствующие питатель­ные среды (см. методы исследования воды и воздуха).

Санитарно-бактериологическое исследование молока и молоч­ных продуктов. О санитарно-бактериологическом состоянии молока и молочных продуктов судят по микробному числу и коли-титру. Для определения микробного числа пастеризован­ное молоко разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия (1:10, 1:100, 1:1000) и по 1 мл каждого разве­дения выливают на дно стерильных чашек Петри, которые заливают расплавленным и остуженным агаром. Посевы инку­бируют при 37 °С в течение 1 сут, после чего подсчитывают количество выросших колоний. Для определения коли-титра цельное пастеризованное молоко засевают в 6 пробирок со средой Кесслера: в 3 пробирки вносят по 1 мл молока, а в остальные 3 — по 0,1 мл молока (1 мл молока разводят в 10 раз стерильной водой). Посевы инкубируют при 43 °С в тече­ние 1 сут, после чего из забродивших проб делают посевы на среду Эндо и инкубируют при 37 °С. Из выросших колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по методу Грама, микроскопируют и делают посев на среду Козера, а также в пептонную воду с 1 % глюкозы. Пробирки с посевами на среде Козера инкубируют при 37 "С, а на среде с глюкозой — при 43 °С в течение 1 сут. При оценке результатов учитывают бактерии, вызывающие брожение глюкозы с образованием кислоты и газа, но не дающие роста на цитратной среде Козера.

Аналогичным образом исследуют сливки, молочнокислые продукты, мороженое. Определяют величину коли-титра и про­водят оценку продукта в соответствии с нормативами (табл. 8.2.1; 8.2.2). Для обнаружения в молоке патогенных бактерий

Состав сред. Среда Козера: дистиллированная вода, 0,15 % фосфата натрия-аммония, 0,1 % фосфата калия одно-замещенного, 0,02 % сульфата магния, 0,25 % цитрата калия.

Санитарно- бактериологическое исследование напитков (лимо­над, минеральные воды). При исследовании лимонада и мине­ральных вод определяют микробное число и коли-титр, ис­пользуя при этом методы, применяемые для исследования пи­тьевой воды. Перед проведением исследования лимонад нейтрализуют 10 % раствором гидрокарбоната натрия, прове­ряя реакцию среды с помощью лакмусового индикатора. Ото­бранные пробы минеральной воды выдерживают при 43 °С в течение 1 ч для удаления избытка газа. Коли-титр определяют методом мембранных фильтров. С этой целью 500 мл напитка фильтруют через мембранные фильтры (100 мл через 1 фильтр), после чего последние промывают стерильной водой для удале­ния остатков минеральных солей и помещают на поверхность среды Эндо. Посевы инкубируют при 37 "С. После определе­ния коли-индекса вычисляют коли-титр.

Санитарно-бактериологические нормативы для лимонада и минеральных вод соответствуют нормативам питьевой водо­проводной воды. Такие же требования предъявляют к воде, используемой для приготовления кваса и различных фрукто-во-ягодных безалкогольных напитков.

Санитарно-бактериологическое исследование мяса, колбасных изделий и мясных продуктов. При микроскопическом исследо­вании мяса определяют количество бактерий в мазках-отпечат­ках, которые готовят из кусочков мяса размером 2x1,5x2,5 см. Мазки окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Мясо считается свежим, если в поле зрения обнаружено не более 10 бактериальных клеток.

Бактериологическое исследование колбасных изделий и мясных продуктов проводят в соответствии с ГОСТом 9958-81: определяют микробное число, а также устанавливают присут­ствие БГКП, сальмонелл, бактерий рода Proteus, коагулазопо-ложительных стафилококков и клостридий. Анализ проводят не позднее чем через 4 ч с момента отбора проб, которые берут с поверхностных и глубинных участков продукта. При иссле­довании глубинных участков образцы продукта предварительно обрабатывают спиртом и обжигают. К навескам продукта мас­сой 20 г добавляют 80 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия и гомогенизируют в электрическом смесителе. Для определения общего количества микробов в 1 г продукта делают посев 0,1 и 0,01 г продукта на питательный агар мето­дом пластинчатых разводок Коха, инкубируют 48 ч и подсчи­тывают число колоний. Для определения БГКП в 1 г продукта производят посев 5 мл взвеси на среду КОДА, которая является элективно-дифференциальной средой для БГКП и содержит питательный бульон, сульфанол, лактозу и бромтимоловый синий; инкубация продолжается 18—20 ч. При росте лактозо-положительных БГКП первоначальный синий цвет меняется на темно-зеленый или ярко-желтый. Специфические измене­ния на среде КОДА не требуют дальнейшего подтверждения. Определение сальмонелл проводят в навеске продукта не менее 25 г. Делают посев разведения навески в 100 мл среды обога­щения (Мюллера, Кауфмана), инкубируют 24 ч. При наличии Proteus spp. наблюдается ползучий рост. В мазках выявляют грамотрицательные палочки, определяют их подвижность и идентифицируют культуру бактерий. Для определения коагула-зоположительных стафилококков проводят посев 0,2 мл взвеси продукта на желточно-солевой агар, инкубируют посевы при 37 °С и при комнатной температуре. При обнаружении стафи­лококков проводят их идентификацию (см. тему 12.1). Для обнаружения анаэробных спорообразующих бактерий Clostri-dium perfringens делают посев 10-кратных разведений взвеси в сульфитциклосериновую среду (СЦС) и среду Вильсона—Бле-ра. Посевы инкубируют при 46 "С в течение 12 ч; при наличии С.perfringens наблюдается почернение среды. При положитель­ном результате посева разведения 10"¹ считается, что в 1 г продукта содержится 10 клеток соответствующих бактерий; разведения 10~² — 100 клеток и т.д.

Колбасные изделия и продукты из мяса в соответствии с действующими нормативами не должны содержать БГКП (в 1 г продукта), сальмонелл (в 25 г), бактерий рода Proteus и суль-фитредуцирующих клостридий (в 0,1 г); микробное число не должно превышать 10³.

Санитарно-бактериологическое исследование консервов. При исследовании консервов определяют присутствие аэробных и анаэробных бактерий. По эпидемиологическим показаниям выявляют Clostridium botulinum и проводят исследование на наличие ботулинического токсина. Перед бактериологическим исследованием консервную банку проверяют на герметичность в сосуде с горячей водой, ставят контроль на бомбаж, выдер­живая в термостате при 37 "С в течение 5 сут, после чего моют теплой водой, высушивают, протирают спиртом и обжигают верхнюю крышку смоченным спиртом горящим ватным там­поном. Извлеченное из банки содержимое засевают для выяв­ления аэробной флоры в две пробирки с бульоном, а для обнаружения анаэробной микрофлоры — в две пробирки со средой Китта—Тароцци, содержащей 0,15 % агара. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 5 сут. При появлении призна­ков роста аэробные бактерии пересевают на питательный агар, среду Эндо, скошенный агар (по Шукевичу) и на питательный агар с 1 % глюкозы. Из среды Китта—Тароцци берут 1—2 мл, вносят в чашки Петри и заливают расплавленным и охлажден­ным до 45—48 "С питательным агаром с 1 % глюкозы. После застывания на поверхность среды помещают стерильное предметное стекло (для создания анаэробных условий) и посевы инкубируют в течение 1 сут при 37 °С. Из выросших колоний получают чистую культуру, которую затем идентифицируют по обычной схеме.

Для выявления ботулинического токсина исследуемые про­бы консервов фильтруют и с фильтратом ставят реакцию ней­трализации токсина антитоксическими противоботулиничес-кими сыворотками типов А, В, С, Е, F на белых мышах или обнаруживают присутствие токсина с помощью других сероло­гических реакций (иммуноферментный анализ). В консервах не допускается присутствия C.botulinum и его токсина, С.рег-fringens и других патогенных бактерий.

Присутствие аэробной неспорообразующей флоры указыва­ет на недостаточную эффективность примененных методов консервирования и возможность порчи. Присутствие сапро­фитных аэробных бацилл (B.subtilis, B.mesentericus) является до­пустимым при герметичности и отсутствии бомбажа консерв­ных банок.

Кроме санитарно-бактериологических исследований, осу­ществляют контроль продуктов на присутствие других токсич­ных соединений: микотоксинов — зерновые культуры, кофе-бобы, сыры, овощи, фрукты; антибиотиков — мясо, птица, яй­ца, молоко; консервантов — молочные, мясные, овощные про­дукты, напитки; пестицидов — зерновые культуры, овощи, фрукты.

Тема 8.3. МИКРОФЛОРА ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА

План

Программа

Особенности и основные понятия экологии микроор­ганизмов.

Качественные и количественные методы изучения со­става микрофлоры отдельных биотопов.

Значение нормальной микрофлоры в жизни человека.

Микробиологическое исследование при дисбактериозе.

а Демонстрация

Окрашенные мазки, приготовление из чистых культур бактерий, представителей облигатной микрофлоры че­ловека. Рост на скошенном агаре E.coli, Proteus vulgaris,
Staphylococcus epidermidis.

Микрофлора зубного налета.

Задание студентам

1. Приготовить мазки из зубного налета, микроскопиро-вать и зарисовать; сделать заключение.

кровяной агар, для выделения E.coli— на среду Эндо, для вы­деления дрожжеподобных грибов рода Candida — на среду Са-буро. Посевы производят таким образом, чтобы получить со­считываемое количество колоний. Такие исследования повто­ряют через определенные сроки, чтобы сделать заключение о количественных изменениях состава микрофлоры в динамике заболевания (табл. 8.3.1).

Таблица 8.3.1. Состав нормальной, резидентной микрофлоры биото­пов организма человека