Все хламидийные и хламидофильные инфекции сопровождаются вторичными иммунодефицитами, возможна персистенция возбудителя.
Лабораторная диагностика
Материал зависит от формы заболевания. При трахоме – соскоб конъюнктивы глаза, при орнитозе – мокрота, при урогенитальных поражениях – соскоб, отделяемое уретры, влагалища, моча.
Цитологический метод: приготовление мазков из скарификатов пораженных тканей. Окрашивают по Романовскому-Гимзе и выявляют ретикулярные тельца сине-голубого цвета возле ядра, элементарные тельца обнаруживаются вне клетки, и они окрашиваются в розовый цвет.
Цитоскопический метод широко доступен, но эффективен лишь при острых формах инфекции, значительно менее эффективен и информативен при хронических формах заболевания. При урогенитальном хламидиозе частота обнаружения телец Провачека в соскобах уретры и цервикального канала не превышает 10-12 %. Наличие этих телец подтверждает диагноз хламидиоза, однако их отсутствие не исключает наличие инфекции.
Иммуноцитологический метод – выявление антигенов возбудителя в исследуемом материале с помощью специфических антител в РИФ, ИФА, ВИЭФ.
Молекулярно-биологический метод – определение специфического участка ДНК или РНК генома возбудителя полимеразной цепной реакцией (ПЦР) и методом рРНК-зондов, реже ДНК-зондов, которые являются уникальными генетическими маркерами. В настоящее время культуральный метод считается «золотым стандартом» диагностики хламидийной инфекции. Для этой цели обычно используют чувствительную культуру клеток, обработанную циклогексамидом. Чувствительность культурального метода по сравнению с ПЦР составляет 70-80%, но в то же время он превосходит молекулярнобиологические методы диагностики по специфичности.
Хламидии культивируют на мышах, куриных эмбрионах или культурах клеток. Заражают белых мышей внутрь мозга 3 раза, готовят мазки отпечатки, выявляют ретикулярные тельца. Для идентификации используют реакцию нейтрализации образования ретикулярных телец. В курином эмбрионе для индикации используют реакцию гемагглютинации, для идентификации – РТГА с моноклональными антителами. В оболочках куриного эмбриона выявляют ретикулярные тельца, их идентифицируют в реакции нейтрализации. В культуре клеток через 6-8 дней выявляют включения в виде ретикулярных телец с последующей их идентификацией в реакции нейтрализации.
304
Серологический метод – РСК, ИФА в парных сыворотках с типовыми и видовыми антигенами. В ИФА определяются антитела.
Аллергический метод – с 3 дня выявляют ПЧЗТ.
Профилактика неспецифическая – изоляция и лечение больных, использование презервативов и других средств защиты от урогенитальных хламидиозов.
Лечение. Назначают антибиотики группы тетрациклина (доксициклин), азитромицин, иммуностимуляторы – цитокины, индукторы интерферона и т.д.
305
XIX. МИКОПЛАЗМЫ
Микоплазмы – уникальная группа прокариотов, которая характеризуется полным отсутствием клеточной стенки. Впервые с этой группой бактерий столкнулся Л. Пастер, изучая плевропневмонию крупного рогатого скота. В 1944 г. Итон выделил их из мокроты больного атипичной пневмонией. В 1962 г. микоплазмы были выделены в самостоятельный род.
Таксономия. Класс Mollicutes, порядок Mycoplasmatales. Семейство Mycoplasmataceae включает 3 рода: род Mycoplasma, в
него входят |
виды: M. pneumoniae (патогенный), |
M. |
hominis, |
М. arthritidis, |
М.genitalium, М. lipophilum, М.orale, |
М. |
buccale, |
М. primatum, М. salivarium и др. – условно-патогенные микоплазмы. Род Ureaplasma включает патогенный для человека вид U.urealyticum (14 сероваров). Третий род Acholeplasma включает непатогенный для человека вид А. laidlawaii.
Общие свойства
Морфологические. Мелкие (105-220 нм), грамотрицательные организмы, выражен полиморфизм, нет клеточной стенки, роль ее выполняет трехслойная ЦПМ, состоящая из стероидов, липидов и белков. ЦПМ регулирует внутриклеточный метаболизм, обеспечивает адсорбцию на эпителиальных клетках и эритроцитах. Микоплазмы имеют специальные липопротеиновые структуры для взаимодействия с рецепторами клеток макроорганизма, что способствует их персистенции в организме людей. Нет спор, капсул, жгутики есть не у всех видов.
Размножаются микоплазмы путем бинарного поперечного деления, фрагментацией клеток, почкованием и путем высвобождения множества элементарных телец, образующихся в нитях.
Культуральные свойства. Факультативные анаэробы. Культивируются в курином эмбрионе, культуре клеток и на специальных средах с высокой концентрацией серы, холестерином, кровью или сывороткой, белковыми гидролизатами. Холестерин стабилизирует мембрану клетки, обусловливает проникновение и утилизацию жирных кислот. Стерины являются источниками энергии. Колонии на этих средах мелкие, их сравнивают с «яичницей-глазуньей». Для дифференциации микоплазм от уреаплазм их выращивают на средах с мочевиной, аргинином или глюкозой и индикатором сульфатом марганца. Уреаплазмы разлагают мочевину и дают через 5-7 дней рост коричневых колоний, а микоплазмы мочевину не разлагают и дают рост бесцветных колоний.
Факторы патогенности: продукты обмена – ионы аммония; которые повышают чувствительность клеток к вирусам; ферменты агрес-
306
сии и инвазии (нейраминидаза, нуклеаза, фосфатаза, пероксидаза, РНКаза, ДНКаза, тимидинкиназа, аминопептидаза), экзотоксин, обладающий гемолитическим, некротическим и нейрогенным действием; эндотоксин, оказывающий пирогенное действие, вызывающий лейкопению, тромбогеморрагические поражения, которые могут привести к отеку легких, коллапсу.
Возможна персистенция микоплазм, что обеспечивает хроническое течение заболевания, характерен незавершенный фагоцитоз.
Резистентность. Очень неустойчивы в окружающей среде, чувствительны к УФ-облучению, солнечным, рентгеновским лучам, изменению рН среды, к действию высокой температуры, высушиванию, обычным химическим дезинфектантам.
Иммунитет нестойкий. Высока роль IgА, но они появляются поздно.
Характеристика заболеваний
Микоплазменная пневмония и другие респираторные заболева-
ния.
Источник инфекции – больной человек. Путь передачи – воздушно-капельный.
Входные ворота – верхние дыхательные пути.
М.pneumoniae обладают выраженным тропизмом к базальным мембранам мерцательного эпителия. Адсорбция возбудителя приводит к продукции перекисей, и, следовательно, к цитотоксическому действию. Развиваются местные цитотоксические реакции в бронхах и прилежащих тканях. В процесс вовлекаются альвеолы. Возможна диссеминация процесса. В результате могут развиваться гемолитические анемии, артриты, энцефалиты, что связано с нарушением в иммунной системе, появляется ПЧЗТ и аллергические реакции типа иммунокомплексных и цитотоксических.
Иммунитет после острой респираторной инфекции сохраняется в течение 5-10 лет, обеспечивается антителами, макрофагами и Т- лимфоцитами. После стертых форм инфекции иммунитет кратковременный и слабо выражен.
Патогенез поражений урогенитального тракта.
Особенно опасен микоплазмоз для беременных, т.к. М.hominis и М.genitalium способны колонизировать эндометрий и плод, индуцировать выработку простагландинов и других метаболитов арахидоновой кислоты. Микоплазмоз в ранние сроки беременности приводит к ее прерыванию или задержке внутриутробного развития. В более поздние сроки беременности возможно инфицирование плода через систему кровообращения. Возникновение пороков развития плода связано с необратимыми поражениями хромосомного аппарата эм-
307
бриона. Возможно и интранатальное заражение плода во время прохождения через родовые пути больной матери.
Урогенитальные микоплазмозы передаются половым путем и по клиническим проявлениям почти не отличаются от урогенитальных поражений другой этиологии.
Иммунитет нестойкий, гуморальный, в меньшей степени клеточный. Обеспечивается IgА, IgG и холодовыми IgМ к поверхностным гликолипидам. В процессе заболевания развивается ПЧЗТ.
M.arthritidis может быть причиной воспаления синовиальных оболочек суставов. Патогенез таких артритов требует изучения, но достоверно установлено, что M.arthritidis может персистировать в синовиальной жидкости и тканях пораженных суставов.
Лабораторная диагностика
Материал для исследования. При пневмониях и ОРЗ исследуют мокроту, при поражении урогенитального тракта – мочу, отделяемое из уретры, влагалища, цервикального канала. В более поздние сроки исследуют сыворотку на наличие антител.
Серологический метод. Исследуют парные сыворотки в ИФА, РПГА, РСК с целью выявления увеличения титра антител в 3-4 раза.
Экспресс-диагностика. Для выявления антигена в качестве экс- пресс-метода можно использовать РИФ или ИФА, ВИЭФ.
Бактериологический метод. Производят посев исследуемого материала на вышеуказанные среды для культивирования микоплазм. Индикацию проводят по выявлению колоний типа «яичницыглазуньи», а идентификацию – по реакции ингибиции роста или угнетения метаболизма со специфическими сыворотками на средах с мочевиной, глюкозой или аргинином и индикатором, добавленным непосредственно к среде. Если на средах рост отсутствует, то вид микроба соответствует сыворотке. При оценке реакции ингибиции метаболизма результаты оценивают по отсутствию изменений цвета среды. При этом необходимо учитывать, что аргинин разлагают
М.hominis, глюкозу – M.hominis и M.geпitalium, маннозу –
M.pneumoniae, мочевину – U.urealyticum (субстраты разлагаются до кислоты).
Молекулярно-биологический метод – ставят ПЦР со специфическими праймерами.
Метод молекулярной гибрдизации (ДНК-зондов) позволяет установить не только наличие микоплазм в исследуемом материале, но и определить их видовую принадлежность.
Профилактика неспецифическая.
Лечение: назначают антибиотики (кроме группы пенициллина и цефалоспоринов, т.к. микроб не имеет клеточной стенки). Лучше ис-
308
пользовать макролиды последнего поколения (рокситромицин, азитромицин), а также тетрациклины (доксициклин).
309
B.ЧАСТНАЯ ВИРУСОЛОГИЯ
XX.ВОЗБУДИТЕЛИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЧЕЛОВЕКА
20.1.РНК-геномные вирусы
20.1.1.Семейство ортомиксовирусов (Оrthomyxoviridae)
Вирусы гриппа.
Ксемейству ортомиксовирусов (греч. orthos – правильный, myxa
–слизь) относятся вирусы гриппа родов Influenzavirus А, В, С, имеющие тропизм к эпителию слизистых оболочек дыхательных путей. Вирусы гриппа типа А патогенны для человека и некоторых животных (лошади, свиньи), а также для птиц. Вирусы типа В и С поражают только людей. Вирус гриппа человека типа А был выделен В. Смитом, К. Эндрюсом и П. Лейдлоу в 1933 г. В 1940 г. Т. Френсис и Т. Меджилл выделили вирус типа В, а в 1949 г. Р. Тэйлор – вирус типа С.
Грипп – острое инфекционное заболевание, чаще поражающее слизистые оболочки верхних дыхательных путей и сопровождающееся лихорадкой, головными болями, недомоганием.
Морфология и свойства. Вирионы имеют сферическую форму, диаметр 80-120 нм, сердцевину и липопротеидную оболочку (рис.20).
Сердцевина содержит геном-линейную, фрагментированную однонитевую (-)РHK, каждый из 8 ее фрагментов кодирует свой вирусный протеи (семь сегментов вирусного генома кодируют струк-
турные белки, восьмой сегмент кодирует неструктурные белки NS1 и NS2). Важное значение имеет матриксный белок (М) и нуклеопротеидный (NP). РНК покрыта белковым капсидом, который окружен слоем матриксного белка М, учавствующего в сборке вирионов. Нуклеокасид имеет спиральный тип симметрии, содержит фермент РНКполимеразу, фосфопротеин, ассоциированный с РНК (NP). В транскрипции и репликации вируса принимают участие внутренние белки
(Р1, Р2, Р3).
На поверхности суперкапсида есть шипы – гликопротеины со свойствами гемагглютинина и нейраминидазы (рис. 21).
Репликация ортомиксовирусов первично осуществляется в цитоплазме инфицированной клетки. Вирусная РНК синтезируется в ядре клетки хозяина.
Культивирование. Для культивирования вируса используют куриные эмбрионы, клетки культур; заражают интраназально белых мышей.
310