Материал: Методы исследования в медицинской бактериологии

153

-использование исследуемой культуры в установленной соответствующими инструкциями дозе с соблюдением соотношения культуры и среды;

-использование оптимального режима инкубирования.

Внекоторых случаях в бактериологии используют генетические методы, направленные на определении маркёров резистентности к антибиотикам. Выявление генетических маркёров резистентности целесообразно в тех случаях, когда традиционные фенотипические методы определения чувствительности микроорганизмов неприменимы или недостаточно эффективны. Например, определение чувствительности Mycobacterium tuberculosis к противотуберкулёзным препаратам с помощью фенотипических методов занимает 4-8 недель. При длительном культивировании микобактерий антибиотики снижают свою активность, что приводит к искажению получаемых результатов.

Впоследние годы в лабораторной практике стали применять метод ПЦР для выявления у микробов специфических генов, ответственных за формирование лекарственной устойчивости (геноиндикация антибиотикоустойчивых культур).

154

8. Биологический метод исследования

Биологический (экспериментальный) метод (биопроба) позволяет выделять патогены из организма зараженных животных, воспроизводить инфекционный процесс (качественный показатель), определять вирулентность культур (количественный показатель) и токсичность. В некоторых случаях с помощью биопробы можно изучать аллергическое действие микробов на макроорганизм.

8.1. Лабораторные животные, правила работы с ними

Выбор лабораторных животных определяется целью работы. Наиболее часто используют для заражения белых мышей, морских свинок и кроликов. Они восприимчивы к возбудителям многих инфекционных заболеваний человека, удобны в обращении и легко размножаются в питомниках. Реже заражают хомяков, обезьян и других животных. В некоторых лабораториях для заражения используют так называемых линейных животных, выведенных путем родственного братскосестринского скрещивания на протяжении более 20 последовательных поколений. Линейные животные являются генетически однородными и отличаются от нелинейных животных постоянными реакциями на воздействие различных факторов.

Лабораторные животные характеризуются видовой, возрастной и индивидуальной чувствительностью к микроорганизмам. В связи с этим при выборе животных для исследований необходимо учитывать их вид и возраст. У беспородных животных чувствительность характеризуется значительными индивидуальными колебаниями. Использование линейных животных, обладающих определенной постоянной восприимчивостью к микроорганизмам, позволяет исключить индивидуальные колебания чувствительности и получить воспроизводимые результаты.

Животных заражают для выделения чистой культуры возбудителя в тех случаях, когда нельзя получить ее другими способами (например, незначительное содержание микроорганизмов в пробе). Так, при исследовании разложившихся трупов грызунов на присутствие возбудителей чумы суспензией органов заражают морских свинок, которые погибают через 3-7 дней при явлениях септицемии (размножение микроорганизмов в крови). Из крови и внутренних органов павшей морской свинки можно легко выделить чистую культуру возбудителя.

Отбор животных. Опыты проводят только на здоровых животных. Желательно использовать животных одинакового возраста, пола, массы. Перед заражением животных взвешивают и измеряют у них температуру тела. Взвешивание и измерение температуры производят до заражения и в течение всего опыта. Нормальная температура тела у лабораторных животных колеблется в следующих пределах: у морских свинок - 37,8-39,5°С, у кроликов - 37,7-38,8°С, у мышей – 37-39°С.

Маркировка (метка) мелких животных (например, мышей) заключается в окрашивании различных участков шерсти растворами анилиновых красителей, пикриновой кислоты или в нанесении маркерных знаков на уши. Маркерные знаки

155

выпускаются в виде колец или жетонов из мягкой белой жести. Их закрепляют на лапках или ушах животных. Для маркировки морских свинок отмечают характер рисунка шерсти в виде схемы.

Место введения материала готовят накануне проведения опыта, чтобы к моменту введения исчезло раздражение кожи. На ограниченных участках шерсть выстригают, выбривают (выщипывание волос не рекомендуется) или удаляют с помощью депиляторов. Для депиляции смесь одной части бария сульфата и двух частей оксида цинка разводят водой до получения массы в виде густой сметаны и накладывают эту массу на 3 минуты на шерсть, после чего удаляют ее вместе с шерстью, а кожу тщательно промывают водой. Непосредственно перед инъекцией кожу дезинфицируют спиртом или йодной настойкой. У мелких животных шерсть не удаляют, а обрабатывают стерильным физраствором.

Фиксация животных. Неподвижность животного во время опыта достигается применением специальных станков, досок-фиксаторов, ящиков или приемов, с помощью которых помощник фиксирует животное в нужном положении.

Для проведения подкожных и внутрикожных инъекций кроликов и морских свинок кладут на бок, одной рукой держат задние конечности, а другой обхватывают грудную клетку, вводя пальцы в подмышечные впадины.

При взятии крови из сердца животных или при введении материала их кладут на спину, растягивая передние конечности в стороны и немного вверх (рисунок

159).

Рисунок 159 – Взятие крови из сердца кролика. Заимствовано из Интернетресурсов.

Мышь берут левой рукой за хвост, опускают на стол, туловище быстро прижимают к столу двумя пальцами правой руки и, передвигая их по спине, захватывают кожу над головой. Животное слегка растягивают. Чтобы держать мышь без помощника (одной рукой), кожу головы фиксируют пальцами левой руки, а хвост - мизинцем и ладонью той же руки (рисунок 160).