Материал: Методы исследования в медицинской бактериологии

61

Рисунок 50 – Устройство для окраски и промывания препаратов.

Рисунок 51 – Пружинный зажим для предметных стекол.

Рисунок 52 – Подставка для предметных стекол.

Рисунок 53 – Набор склянок с пипетками для растворов красок.

Вместо пружинного зажима для предметных стекол используется также анатомический пинцет. В настоящее время растворы красителей выпускаются в виде рабочих растворов в полиэтиленовых флаконах.

Уход за световым микроскопом предусматривает соблюдение следующих правил:

1.Защита микроскопа от пыли колпаком.

2.Исключение прикасания пальцами оптических поверхностей.

3.Чистка и смазка при необходимости движущихся частей с применением специальной смазки.

4.Регулярная чистка предметного столика.

62

5. Очистка линз от иммерсионного масла после каждого использования иммерсионной системы тканью, смоченной ксилолом или бензолом. Запрещается использовать эфир и ацетон.

В таблице 9 представлены основные неисправности светового микроскопа и способы их устранения.

Таблица 9 - Неисправности микроскопа, их причины и способы устранения

5.1.2. Приготовление препаратов для микроскопирования

Микроскопическое исследование бактерий проводят с целью выявления их морфологических и тинкториальных особенностей. В зависимости от состояния микробов в препарате различают препараты живых и неживых (убитых, фиксированных, окрашенных) микробов. Препараты, приготовленные из живых микробов, используют для изучения размеров и формы клеток, способа их

63

размножения, подвижности, спорообразования, структуры колоний и других признаков. Для повышения контрастности изображения клеток микробов и изучения их субклеточных структур микроорганизмы окрашивают различными красителями.

Для микроскопического изучения формы, размеров микробов (морфологические признаки) и их отношения к красителям (тинкториальные свойства) готовят препарат на предметном стекле. В качестве исследуемого материала используют инфицированный материал от больного (кровь, гной, мокрота и т. д.), чистую бактериальную культуру, выросшую на плотной или в жидкой питательной среде, другие материалы. Из таких материалов готовят препарат – мазок. Кроме того, можно использовать отпечаток пораженной ткани прижизненно или отпечаток ткани отдельных органов при посмертной диагностике заболевания (препарат – отпечаток). Для приготовления препаратов используют предметные стекла. Для длительного сохранения препаратов применяют покровные стекла.

Подготовка предметных и покровных стекол. Прежде чем приступить к приготовлению микроскопических препаратов, необходимо обработать предметные и покровные стекла. Они должны быть чистыми и хорошо обезжиренными. Доказательством хорошего обезжиривания предметных и покровных стекол является равномерное распределение капли жидкости на их поверхности. Перед использованием стекло фламбируют.

Новые стекла, не бывшие в употреблении, вначале моют в воде, затем выдерживают в смеси спирта с эфиром (соотношение 1:1). Из смеси спирта и эфира стекла фламбируют над пламенем горелки, чем и достигается их обезжиривание. Новые стекла можно подготовить к работе путем кипячения их в течение 10 минут в 1% растворе натрия гидрокарбоната (соды), промывания в дистиллированной воде (добавляя к ней до 0,5% соляной кислоты для нейтрализации) и окончательного ополаскивания в дистиллированной воде.

Стекла, бывшие в употреблении, обрабатывают в концентрированной серной кислоте или в смеси серной кислоты с калием двухромовокислым (хромовой смеси). Смесь готовят путем добавления к серной кислоте 5% калия двухромовокислого. Смесь взбалтывают и оставляют на сутки, после чего он приобретает темно-оранжевое окрашивание. Хромовая смесь - сильный окислитель, хорошо удаляющий органические загрязнения. Стекла в моющую смесь погружают на 1-2 часа, затем промывают в проточной воде, переносят в 5% раствор натрия гидрокарбоната и кипятят в течение 30 минут. После ополаскивания в чистой воде их высушивают в сушильном шкафу или при комнатной температуре. Обработанные стекла хранят в банке с притертой пробкой сухими, со спиртом или в смеси спирта и эфира (в соотношении 1:1).

Приготовление мазка для микроскопирования. Мазок для микроскопирования должен быть тонким, иметь определенную форму и размеры. Материал в мазке должен быть распределен равномерно как в центре, так и на периферии. Хорошо приготовленный тонкий мазок должен быть размером 1-2 см2 и иметь круглую или овальную форму.

Для приготовления мазка из культуры с плотной питательной среды на середину чистого предметного стекла наносят небольшую каплю воды. Соблюдая правила асептики, бактериологической петлей берут немного материала (с

64

булавочную головку) и погружают его в каплю, слегка растирая в ней. Остаток культуры в петле сжигают на пламени горелки. Остудив петлю, сначала ее краем равномерно размешивают культуру в капле, а затем равномерными круговыми движениями распределяют каплю смеси на площади примерно в треть предметного стекла. После приготовления мазка петлю сразу же фламбируют в пламени горелки и помещают в штатив.

Для приготовления препарата из жидкой микробной культуры

бактериологическую петлю прожигают на пламени горелки и каплю материала наносят на поверхность стекла, соблюдая при этом правила асептики. Легкими круговыми движениями распределяют каплю по стеклу, затем препарат высушивают на воздухе, а петлю прожигают. Для приготовления препарата в этом случае можно использовать пастеровскую пипетку, которую после использования помещают в дезинфицирующий раствор.

Порядок приготовления препарата из микробной суспензии представлен на рисунке 54.

Рисунок 54 – Схема приготовления препарата – мазка из микробной суспензии. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Аналогичным образом готовят мазки из жидкого клинического материала – ликвора, мочи.

65

Из мокроты и гноя мазки готовят следующим образом: материал петлей наносят на середину предметного стекла, затем плотно прикрывают его другим предметным стеклом. Раздвигая предметные стекла в противоположных направлениях за свободные концы, получают два равномерных мазка (рисунок 55).

Рисунок 55 – Приготовление мазка из мокроты. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Мазок из крови готовится следующим образом. Предметным стеклом прикасаются к капле крови, выступающей при уколе. Затем стекло берут в левую руку, а правой рукой к капле придвигают под углом в 45° стекло со шлифованной стороной, по краю которой капля крови равномерно растекается. Плотно прижимая стекло и не меняя угла его наклона, продвигают его по предметному стеклу, получая равномерный мазок (рисунок 56).

1 2

Рисунок 56 - Приготовление мазка крови: 1 – взятие капли крови на предметное стекло; 2 – мазок из капли делается шлифованным ребром другого стекла.

Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Правильно приготовленный мазок должен быть равномерно тонким, желтоватого цвета, располагаться на 1–1,5 см от краёв, занимать 2/3 длины стекла и заканчиваться “метёлочкой”. Густые мазки нецелесообразно использовать, так как в них морфология клеток плохо различима.

Для приготовления мазка крови “толстая капля” на середину предметного стекла наносят каплю крови и петлёй распределяют ее по площади около 1 см2. Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания.

Для приготовления мазка – отпечатка стерильным предметным стеклом прикасаются к пораженной поверхности, затем высушивают и фиксируют препарат. При исследовании патологического материала (ткань, орган) ножницы, смоченные в спирте, обжигают на пламени горелки, остужают их и срезают кусочек ткани