Автореферат: Изменение патогенности Klebsiella Pneumoniae при дисбиозе кишечника, вызванного бластоцистной инвазией

Таблица 4. Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей pap С гена у культур K. pneumoniae

Примечание: * - показатель достоверности между частотой встречаемости нуклеотидных последовательностей papС гена у культур Klebsiellа pneumoniaе до и после их сокультивирования с бластоцистами (р<0,05).

Для детекции генов, кодирующих определенные факторы патогенности, были протестированы штаммы с праймерами к pap С гену. Положительный сигнал был получен в 1-й группе клебсиелл с 31 культурой (26,1%). В общем пуле штаммов, изолированных от больных 2-й группы, положительные сигналы были получены у 2 культур (2,8%) (табл. 4).

Анализ уровня распространенности ампликонов pap С генов после проведенного сокультивирования (табл.4) штаммов K. pneumoniae с бластоцистами различной степени вирулентности показал, что частота встречаемости фрагмента pap С гена клебсиелл была наиболее высокой после 3-х суток сокультивирования в ассоциации с высоковирулентными бластоцистами (21,8±2,5%).

Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей hly A гена была практически одинаковой в первой и второй группах клебсиелл (табл. 5).

Таблица 5. Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей hly A гена у культур K. pneumoniae

Примечание: * - показатель достоверности между частотой встречаемости нуклеотидных последовательностей hly A гена у культур K. pneumoniaе до и после их сокультивирования с бластоцистами (р<0,05).

Наиболее значимые различия в частоте обнаружения hly A генов имелись у клебсиелл, выделенных совместно с вирулентными бластоцистами, после их совместного культивирования

В результате изучения распространения генетических детерминант термалабильных энтеротоксинов (elt LT-1, LT-2), являющихся основными факторами патогенности клебсиелл, установлено, что при инкубации с авирулентными бластоцистами искомые ампликоны имели 2,8±0,4% и 2,5±0,3% штаммов Klebsiellа pneumoniae (табл. 6).

Таблица 6. Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей elt LT-1, LT-2 генов культур Klebsiellа pneumoniae

Примечание: * - показатель достоверности между частотой встречаемости нуклеотидных последовательностей elt LT-1 и LT-2 генов K. pneumoniaе до и после их сокультивирования с бластоцистами (р<0,05).

Частота обнаружения ампликонов, специфичных изучаемым генам, после проведения совместного культивирования клебсиелл с умеренновирулентными бластоцистами увеличилась в 2,1 и 2,0 раза, с высоковирулентными бластоцистами - 1,5 и 2,7 раза соответственно (табл.6).

В работе установлено статистически достоверное увеличение встречаемости изучаемых генов, индуцированное усилением вирулентности симбионтов Blastocystis hominis. Полученные данные свидетельствуют об изменении патогенного потенциала бактерий под воздействием бластоцист, приводящим к селекции и накоплению вирулентных вариантов в гетерогенной бактериальной популяции.

Выводы

1. Простейшие Blastocystis hominis выявлены у 62,9% гастроэнтерологических больных, у здоровых людей этот показатель не превышает 5,8%. Наиболее высокие показатели инвазированности установлены при язвенной болезни желудка (88,9%), язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (81,2%), хроническом гастрите (66,1%) и хроническом холецистите (50,0%). Частота встречаемости B. hominis, а также их вирулентность и резистентность к антипротозойным препаратам зависит от продолжительности и периода заболевания.

2. Гастроэнтерологические заболевания при бластоцистной инвазии сопровождаются более выраженным дисбиозом кишечника, чем без бластоцистоза. Это проявляется снижением доминирования основных симбионтов, таких как бифидобактерии и лактобациллы, на фоне повышения показателей частоты встречаемости и плотности колонизации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, максимально выраженных у бактерий рода Klebsiella. Выявленные изменения микробиоты кишечника усиливаются в период обострения заболевания и носят менее выраженный характер во время ремиссии.

3. Частота встречаемости вирулентных и антибиотикорезистентных клебсиелл, выделенных у гастроэнтерологических больных при бластоцистной инвазии достоверно выше, чем у пациентов без бластоцистоза.

4. Установлено увеличение частоты выявления генетических детерминант факторов патогенности клебсиелл, обеспечивающих адгезию и токсинообразование (рар С, hly A, elt LT-1 и LT-2), изолированных у гастроэнтерологических больных при бластоцистной инвазии. Уровень распространенности изученных ампликонов у штаммов Klebsiella pneumoniae после их сокультивирования с вирулентными бластоцистами увеличивается.

Практические рекомендации

1. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости проведения микробиологических исследований, направленных на выявление дисбиоза кишечника, развивающегося у пациентов с ЯБЖ, ЯБДК, ХГ на фоне бластоцистной инвазии, для последующей коррекции дисбиотических нарушений с учетом продолжительности и степени тяжести заболевания.

2. В протокол исследования на дисбиоз кишечника у больных гастроэнтерологического профиля дополнительно включать исследования на выявление Blastocystis hominis с целью дальнейшей санации пациентов.

3. Для выявления бластоцист рекомендуется применять, помимо микроскопического, культуральный метод, значительно повышающий эффективность диагностики.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Бурганова, Р.Ф. Значение простейших Blastocystis hominis в патологии человека / Р.Ф. Бурганова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Л.К. Богомолова, Н.А. Квасова, Ю.Ю. Красноперова, А.С. Нестеров, И.Н. Исаева, О.Н. Кометова, В.М. Евдокимова // Материалы Всероссийской научной конференции «Проблема инфекции в клинической медицине» VIII съезда Итало-Российского общества по инфекционным болезням. - Санкт-Петербург, 2002. - С.23-31.

2. Бурганова, Р.Ф. Выделение клинических изолятов B. hominis у больных с различной патологией / Р.Ф. Бурганова, Н.А. Ильина, И.Н. Исаева, Ю.Ю. Краснопёрова, В.М. Евдокимова // Сб. тезисов докладов Всероссийской университетской научно-практической конференции молодых учёных и студентов по медицине. - Тула, 2002. - С.43.

3. Бурганова, Р.Ф. Выявление простейших Blastocystis hominis у больных с заболеванием желудочно-кишечного тракта / Р.Ф. Бурганова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Т.И. Волгина, М.М. Хамитова, Н.А. Ильина, И.Н. Исаева, В.М. Евдокимова, Ю.Ю. Красноперова, О.А. Кометова // Материалы XXXVII научно-практической межрегиональной конференции врачей «Здравоохранение Ульяновской области в XX веке» 23-24 мая 2002 г. - Ульяновск, 2002. - С.105.

4. Бурганова, Р.Ф. Влияние простейших Blastocystis hominis на микробиоту толстой кишки мышей / Р.Ф.Бурганова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, Н.А. Квасова, И.Н. Исаева // Материалы 18-й Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и патология пищеварения» 4-6 сентября 2002 г. - Краснодар,2002. - С.203-204.

5. Бурганова Р.Ф. Протозойно-бактериальные ассоциации кишечника в условиях бластоцистной инвазии / Р.Ф.Бурганова, Н.А. Квасова, Ю.Ю. Красноперова, Н.В. Бугеро, О.Е. Фалова, И.С. Немова, А.С. Нестеров // Материалы 4-й Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в ХХI веке» 23-25 мая 2003 г. - Москва,2003. - С.508-509.

6. Бурганова, Р.Ф. Влияние простейших B. hominis на функциональную активность печени / Р.Ф. Бурганова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.А. Квасова, И.Н. Исаева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2003. - №2. - С.16-18.

7. Бурганова, Р.Ф. Бластоцистная инвазия у гастроэнтерологических больных / Р.Ф. Бурганова, Н.А. Квасова, Ю.Ю. Красноперова, Н.В. Бугеро, О.Е. Фалова, В.Е. Струнаева, А.С. Нестеров // Медлайн-Экспресс. - 2003. - №12 (169). - С.3-5.

8. Бурганова, Р.Ф. Реализация потенциала патогенности простейших Blastocystis hominis в условиях пониженной резистентности макроорганизма / Р.Ф. Бурганова, Н.А. Квасова, Ю.Ю. Красноперова, А.С. Нестеров, Н.В. Бугеро, И.С. Немова, О.Е. Фалова, В.М. Кудрова, В.Е. Струнаева // Материалы региональной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современного здравоохранения и экологии» 27 ноября 2003 г. - Ульяновск, 2003. - С.64-65.

9. Бурганова, Р.Ф. Экологическое ранжирование эндофлоры кишечника населения Ульяновской области / Р.Ф. Бурганова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.В. Бугеро, О.Е. Фалова, Ю.Ю. Красноперова, Н.А. Квасова, И.С. Немова // Успехи современного естествознания. - №3. -2004. - С.28-29.

10. Бурганова, Р.Ф. Бластоцистоз - протозооз человека / Р.Ф. Бурганова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.А. Квасова, И.Н. Исаева, Ю.Ю. Красноперова, Н.М. Чебан, Л.К. Богомолова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2004. - №4. - С. 58-61.

11. Бурганова, Р.Ф. Влияние микробиоценоза кишечника на формирование и тяжесть течения экспериментальной язвы желудка ассоциированной с бластоцистозом / Р.Ф. Бурганова, Ю.Ю. Красноперова, Н.А. Квасова, Н.В. Бугеро, В.М. Кудрова, О.Е. Фалова, И.С. Немова // Материалы 5-го конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» 20-21 мая 2004 г. - Томск, 2004. - С.147-148.

12. Бурганова, Р.Ф. Некоторые показатели клеточного иммунитета при экспериментальной язве желудка на фоне инвазии простейших Blastocystis hominis / Р.Ф.Бурганова, Ю.Ю. Красноперова, Н.А. Квасова, Н.В. Бугеро, В.М. Евдокимова, О.Е. Фалова, И.С. Немова, А.С. Нестеров // Материалы 11-й межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и соискателей «Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации» 18 октября 2004 г. - Пенза, 2004. - С.112-113.

13. Бурганова, Р.Ф. Распространенность простейших Blastocystis hominis у гастроэнтерологических больных / Р.Ф. Бурганова, Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.А. Квасова, Н.В. Бугеро, О.Е. Фалова, И.С. Немова, А.С. Нестеров // Материалы выездного пленума НОГР «Новые горизонты гастроэнтерологии» 23-24 ноября 2004 г. - Новосибирск, 2004. - С.318-319.

14. Бурганова, Р.Ф. Активность нейтрофильных гранулоцитов при экспериментальной язве желудка на фоне Blastocystis hominis / Р.Ф. Бурганова, Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, И.С. Немова, Н.А. Квасова, О.Е. Фалова, Н.В. Бугеро, В.М. Евдокимова, А.С. Нестеров // Материалы выездного пленума НОГР «Новые горизонты гастроэнтерологии» 23-24 ноября 2004 г. - Новосибирск, 2004. - С. 63-64.

15. Бурганова, Р.Ф. Влияние микробиоценоза кишечника на формирование и тяжесть течения экспериментальной язвы желудка, ассоциированной с бластоцистозом / Р.Ф. Бурганова, Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, И.С. Немова, Н.А. Квасова, О.Е. Фалова, Н.В. Бугеро, В.М.Евдокимова, А.С.Нестеров // Материалы выездного пленума НОГР «Новые горизонты гастроэнтерологии» 23-24 ноября 2004 г. - Новосибирск, 2004. - С.65-66.