Для каждого анализа делают поправку на реактивы путем контрольного титрования. Для этого титруется 2,6-дихлорфенолиндофенолом количество смеси, равное объему вытяжки, взятой для титрования. Количество мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на контрольное титрование, вычитают из количества мл, пошедших на титрование вытяжки.
Вычисление результатов
Содержание витамина С принято выражать в мг на 100 г исследуемого материала (мг%). При прямом титровании вычисление производится по формуле: мг % витамина С = А? Т? В ? 100/ а? в , где
А - количество мл краски, пошедшей на титрование вытяжки
(за вычетом поправки на контрольное титрование);
Т - миллиграмм-титр краски;
В - объем вытяжки, полученной из навески (мл);
а - навеска (г);
в - количество фильтрата, взятого для титрования (мл);
100 - пересчет на мг%.
Количественное определение аскорбиновой кислоты (второй вариант)
Данный метод используется в Государственной Фармакопеи при определении содержания витамина С в плодах шиповника [5].
1. Из грубо измельченной аналитической пробы плодов берут навеску массой 20 г, помещают ее в фарфоровую ступку и тщательно растирают со стеклянным порошком (около 5 г), постепенно добавляя 300 мл воды, и настаивают 10 мин.
2. Затем смесь размешивают и извлечение фильтруют.
3. В коническую колбу вместимостью 100 мл вносят 1 мл полученного фильтрата, 1 мл 2 % раствора хлористоводородной кислоты, 13 мл воды, перемешивают и титруют из микробюретки раствором 2,6-ди-хлорфенолиндофенолята натрия (0,001 моль/л) до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 30-60 секунд. Титрование продолжают не более 2 мин.
4. *В случае интенсивного окрашивания фильтрата или высокого содержания в нем аскорбиновой кислоты [расход раствора 2,6-ди-хлорфенолиндофенолята натрия (0,001 моль/л) более 2 мл], обнаруженного пробным титрованием, исходное извлечение разбавляют водой в 2 раза или более.
5. Содержание аскорбиновой кислоты в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле
Х = V?0,000088?300?100?100/ m?(100-W)
0,000088 - количество аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия (0,001 моль/л), в граммах;
V - объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия (0,001 моль/л), пошедшего на титрование, в миллилитрах;
т - масса сырья в граммах;
W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.
Примечания
Приготовление раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия (0,001 моль/л): 0,22 г 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия растворяют в 500 мл свежепрокипяченной и охлажденной воды при энергичном взбалтывании (для растворения навески раствор оставляют на ночь). Раствор фильтруют в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки.
Установка титра. Несколько кристаллов (3-5) аскорбиновой кислоты растворяют в 50 мл 2 % раствора серной кислоты; 5 мл полученного раствора титруют из микробюретки раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия до появления розового окрашивания, исчезающего в течение 1-2 нед.
Другие 5 мл этого же раствора аскорбиновой кислоты титруют раствором калия йодата (0,001 моль/л) в присутствии нескольких кристаллов (около 2 мг) калия йодида и 2-3 капель раствора крахмала до появления голубого окрашивания.
Поправочный коэффициент (К) вычисляют по формуле
X=V/V2 , где
V - объем раствора калий иодата (0,001 моль/л), пошедшего на титрование, в миллилитрах; V1 - объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, пошедшего на титрование, в миллилитрах.
Определение рутина
Количественное определение рутина основано на его способности окисляться перманганатом. В качестве индикатора применяется индигокармин, который вступает в реакцию с перманганатом после того, как окислится весь рутин. Экспериментально установлено, что 1 мл 0,1 N раствора перманганата калия окисляет 6,4 мкг рутина [6].
При окислении белое индиго меняет цвет и переходит в светло-желтый, красно-фиолетовый и фиолетово-синий цвет.
белое индиго синее индиго
Реактивы:
1. Перманганат калия, 0,05 N раствор.
2. Индикатор индигокармин.
Оборудование:
1. Конические колбочки на 50 мл, 2 шт.
2. Пипетка на 10 мл.
3. Бюретка для перманганата калия.
К 100 мг чая приливают 50 мл горячей дистиллированной воды и проводят экстракцию в течение 5 минут. 10 мл экстракта чая отмеривают в коническую колбочку, добавляют 10 мл дистиллированной воды и 10 капель индигокармина. Титруют 0,05 N раствором перманганата калия до появления устойчивой желтой окраски.
Расчет производят по следующей формуле:
X = 3,2?А?50?100/ 10?0,1?1000
где x- содержание витамина Р в миллиграмм-процентах; А - количество миллилитров 0,05 N раствора перманганата калия, пошедшее на титрование; 0,1 - количество сухого вещества в граммах, взятое для анализа; 10 - количество миллилитров вытяжки, взятое для титрования; 50 - количество миллилитров воды, добавленное к сухому веществу для экстракции, т.е. общее количество вытяжки; 100 - общее количество вещества в граммах для расчета процентного содержания (1000 - мкг переводят в мг).
Накопление аскорбиновой кислоты в растениях в сильной степени зависит от условий их выращивания. В листьях, стеблях, плодах и корнях растений, выращенных в северных районах, витамина С значительно больше, чем в растениях, возделываемых на юге [7].
Растения на легких почвах содержат больше аскорбиновой кислоты по сравнению с теми же сортами растений, выращенных на тяжелых почвах.
Условия питания также оказывают значительное влияние на содержание аскорбиновой кислоты в растениях. Фосфорно-калийные удобрения повышают количество витамина в растениях, а азотные удобрения, наоборот, понижают. Нами проводились определение витамина С в зрелых плодах унаби.
Унаби формируют урожай плодов на приростах текущего года, который зависит от адаптации (таблица 2).
Таблица 2 - Характеристика плодоношения различных сортов унаби
|
Количественные признаки плодов |
Та-ян-цзао |
Сочинский |
|||
|
2010*г |
2009*г |
2010*г |
2009*г |
||
|
Масса плодов на одном растении, кг |
4,6 |
3,8 |
5,87 |
4,45 |
|
|
Масса одного плода, г |
18,02±0,51 |
15,12±0,46 |
9,71±0,25 |
8,11±0,22 |
|
|
Масса одного семени, г |
0,95±0,03 |
0,89±0,04 |
0,49±0,04 |
0,48±0,04 |
|
|
Выход мякоти, % |
91-93 |
88-92 |
89-94 |
89-91 |
|
|
Ширина плода, см |
2,93±0,09 |
2,88±0,08 |
1,98±0,07 |
1,91±0,04 |
|
|
Длина плода, см |
3,82±0,08 |
3,71±0,06 |
3,57±0,12 |
3,51±0,10 |
|
|
Ширина семени, см |
1,11±0,03 |
1,05±0,04 |
0,71±0,08 |
0,76±0,07 |
|
|
Длина семени, см |
2,72±0,10 |
2,64±0,12 |
2,13±0,11 |
2,11±0,12 |
*X±s - среднее и его ошибка
Выявленные особенности цветения и плодоношения унаби в сухой степи позволяют осуществить подбор ассортимента для фармацевтической промышленности.
Полученные результаты исследования плодов унаби представлены в таблице 3. Их данных приведенных в таблице следует, что в плодах сортов Сочинский, Темрюкский повышенное содержание аскорбиновой кислоты.
Таблица 3 - Содержание аскорбиновой кислоты в различных сортах унаби
|
Сорт унаби |
Витамин С, мг % |
|
|
Та-ян-цзао |
477,0 |
|
|
Южанин |
459,2 |
|
|
Дружба |
408,3 |
|
|
Финик |
413,3 |
|
|
Сочинский |
740,3 |
|
|
Темрюкский |
739,4 |
Отмечается высокое содержание пектина, а так как пектин обладает высокой способностью выводить из организма ядовитые вещества и радионуклиды, улучшать функцию ЖКТ, то плоды унаби будут полезны для широкого круга потребителей.
Углеводы являются главными продуктами фотосинтеза и основным дыхательным материалом. У многих сельскохозяйственных растений углеводы в больших количествах накапливаются в корнях, клубнях и семенах и используются затем в качестве запасных веществ; стенки клеток растений и растительные волокна состоят главным образом из углеводов; в плодах и ягодах также преобладают углеводы. Крахмал, клетчатка, сахара, пектиновые вещества и другие широко распространенные соединения растительного происхождения относят к углеводам (рисунок 3). В процессе распада углеводов организмы получают основную часть энергии, которая необходима для поддержания жизни и биосинтеза других сложных соединений [8].
Рисунок 3 - Содержание общего сахара (%) в различных сортах
Гродзинский А. М. [9] отметил, что относительная сладость некоторых обычных сахаров, % к сладости сахарозы составляет: у сахарозы - 100, фруктозы - 173,3, глюкозы -174,3.
Экстракцию липидов из плодов и листьев унаби проводили смесью хлороформ - этанол-вода с соотношением компонентов 4:2:1 (рисунок 4).
Рисунок 4 - Схема получения липидного комплекса [10]
В результате хроматографического анализа липидов, путем расчета площади пятен было определено количественное содержание различных липидных фракций в плодах, косточках и листьях унаби. Результаты приведены в таблице 4.
Таблица 4 - Содержание фракций липидов в плодах, косточках и листьях унаби
|
Фракции липидов |
Содержание в плодах, % |
Содержание в косточках, % |
Содержание в листьях, % |
|
|
Полярные липиды |
65,20,13 |
7,10,13 |
29,80,13 |
|
|
Стерины |
1,50,001 |
0,60,001 |
1,80,001 |
|
|
Спирты |
0,50,01 |
0,30,01 |
5,50,01 |
|
|
Жирные кислоты |
8,30,10 |
6,10,10 |
29,60,10 |
|
|
Триглицериды |
250,05 |
70,90,05 |
22,20,05 |
|
|
Эфиры стеринов |
1,10,01 |
5,70,05 |
11,10,05 |
Таким образом, по данным тонкослойной хроматографии, было установлено, что в плодах и листьях в наибольших количествах входят фосфолипиды, стерины и жирные кислоты.
В ходе анализа было установлено содержание таких микроэлементовкак Zn, Fe, Cu, Mn, Ni, Se, а также Са. Данные представлены в таблице 5.
Таблица 5 - Содержание микроэлементов в различных частях растения унаби
|
Элемент |
Содержание микроэлементов, мг/кг |
|||
|
В плодах |
В косточках |
В листьях |
||
|
Zn |
2,7 |
6,3 |
33,2 |
|
|
Cu |
0,3 |
0,85 |
3,7 |
|
|
Fe |
14,2 |
12,3 |
75,5 |
|
|
Mn |
5,5 |
2,9 |
11,8 |
|
|
Ni |
следы |
следы |
8,0 |
|
|
Se |
следы |
следы |
0,04 |
Содержание Са достигает в плодах - 22,28 г/кг, в косточках - 21,00 г/кг, в листьях - 21,07 г/кг. Таким образом, можно отметить высокое содержание в унаби кальция и железа.
Растущий интерес на биологически активные вещества для нужд медицины, парфюмерии, пищевой промышленности при одновременном истощении традиционных ресурсов заставляет уделять внимание новым нетрадиционным источникам сырья (таблица 6).
Таблица 6 - Биохимический состав плодов унаби
|
Определяемый показатель |
Содержание, % вес |
|
|
Белки |
4,3-7,5 |
|
|
Редуцирующие сахара |
18,0-22,4 |
|
|
Общий сахар |
25,2-28,7 |
|
|
Пектин |
4,5-5,6 |
|
|
Органические кислоты |
1,35-1,57 |
|
|
Содержание витаминов, мг % |
||
|
Аскорбиновая кислота |
413,0-740,3 |
|
|
Рутин |
69,0-70,8 |
|
|
Токоферол |
3,91-4,22 |
|
|
Ретинол |
3,49-3,52 |
Изученные сорта представляют большую научно-практическую ценность в качестве ассортимента пород многоцелевого назначения, которые перспективны для оптимизации насаждений, фармацевтической промышленности и плодоводства Волгоградской области.
Исследования пищевых и лекарственных свойств интродукционных ресурсов унаби в Волгоградской области свидетельствует о значительных межсортовых различиях, крупноплодные сорта (Та-ян-цзао, Южанин) можно использовать как пищевые, а средне- и мелкоплодны - для создания плантаций с целью получения сырья для фармацевтической промышленности.