Материал: Физиология бактерий

31

периодическом культивировании питательные вещества в систему дополнительно не вводятся, а продукты обмена не удаляются. В этом случае размножение бактерий в жидкой питательной среде характеризуется сменой фаз или стадий (рисунок 38):

-лаг-фаза - начальная стадия адаптации бактерий к питательной среде. В эту фазу наблюдается синтез адаптивных ферментов. Лаг-фаза представляет собой период от момента внесения (посева) бактерий в питательную среду до их роста. В этой фазе число живых бактерий не увеличивается, а может даже уменьшаться. Продолжительность этой фазы составляет 2-4 часа;

-экспоненциальная (логарифмическая) фаза (лог-фаза) – фаза выраженного прироста численности бактерий (увеличение количества микробных клеток в геометрической прогрессии: в конце первой генерации из одной клетки образуется две, в конце второй - четыре и так далее). В этот период скорость

размножения клеток и увеличение бактериальной популяции максимальны. Период генерации, то есть период времени между двумя последовательными делениями бактерий, постоянный для данного вида микроорганизмов. Продолжительность этой фазы - 5-6 часов;

-стационарная фаза - фаза максимального накопления клеток и развития равновесия между размножением и гибелью клеток. Число новых бактерий почти равно числу отмерших, то есть наступает равновесие между погибшими клетками и вновь образующимися клетками. Увеличения численности микроорганизмов в эту стадию не происходит. Продолжительность этой фазы - 2 часа;

-фаза отмирания - уменьшение численности популяции в связи с уменьшением питательных веществ и изменением условий культивирования (изменение рН, концентрации ионов и др.). Продолжительность этой фазы - около 5 часов. Остающиеся в живых клетки переходят в состояние покоя.

Рисунок 38 – Размножение бактерий в жидкой питательной среде.

Большинство микроорганизмов при благоприятных условиях делятся пополам через каждые 20-30 минут. При такой скорости деления из одного микроорганизма через 5 часов образуется 1024 особей.

Размножение бактерий происходит на питательных средах, содержащих необходимые компоненты, в оптимальных температурных условиях, при определенном насыщении среды кислородом.

Размножение характеризуется:

32

-временем генерации - интервалом времени, за который число клеток удваивается;

-концентрацией бактерий - числом клеток в 1 мл.

По температурному оптимуму роста выделяют три основные группы микроорганизмов.

1.Психрофилы - растут при температурах ниже +20ОС.

2.Мезофилы - растут в диапазоне температур от +20ОС до +45ОС (в основном оптимальная температура составляет 37ОС).

3.Термофилы - растут при температурах выше +45ОС.

Питательные среды

Выращивание микроорганизмов производится на субстратах, называемых питательными средами. Питательные среды должны содержать достаточное количество питательных веществ в доступной для усвоения форме, иметь оптимальной значение рН, быть стерильными.

Питательные среды классифицируются на группы.

По составу выделяют простые и сложные питательные среды. К простым (обычным) питательным средам относятся пептонная вода, мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар. К сложным (богатым) питательным средам относятся кровяной агар, асцитический агар, сывороточный агар.

По консистенции выделяют жидкие, полужидкие и плотные среды. Жидкие среды представляют собой настои, отвары, бульоны, приготовленные на основе мяса, рыбы, овощей (естественные среды), а также композиции определенных концентраций химических соединений (искусственные среды). Широко распространенной жидкой питательной средой является мясо-пептонный бульон (МПБ). Полужидкие среды получают путем добавления к жидким средам 0,5-0,9% агара или желатина (в частности, мясо-пептонный желатин - МПЖ). К плотным питательным средам относят среды, содержащие 1,5-3% агара, в частности, мясопептонный агар - МПА (рисунок 39).

Агар – это полисахарид сложного состава из морских водорослей, основной

33

отвердитель для плотных сред.

В качестве универсального источника углерода и азота применяют пептоны (продукты расщепления белков пепсином) или различные гидролизаты (мясной, рыбный, казеиновый, дрожжевой).

По происхождению выделяют естественные, полусинтетические и синтетические среды. Естественные питательные среды - это природные органические среды непостоянного состава, которые включают продукты животного или растительного происхождения. К ним относятся пептоны, кровь, отвары и экстракты, полученные из природных субстратов (мясо, рыба, крупы).

Полусинтетические питательные среды кроме органических и неорганических веществ известного состава содержат продукты природного происхождения (картофельная среда с глюкозой, дрожжевая среда).

Синтетические питательные среды состоят из определенных количеств органических и неорганических химических соединений известного состава. Их состав всегда постоянный.

По назначению среды подразделяются на основные и специальные. Основные (универсальные) среды пригодны для роста большинства бактерий. К ним относятся мясо-пептонный агар (МПА) и мясо-пептонный бульон (МПБ).

К специальным средам относятся дифференциально-диагностические, элективные и накопительные питательные среды.

Дифференциально-диагностические среды представляют собой сложные среды, позволяющие выделять чистую культуру бактерий с одновременной их идентификацией по какому-либо биохимическому свойству. Дифференциальнодиагностические среды содержат питательную основу, дифференцирующее вещество (субстрат) и индикатор. Эти среды позволяют идентифицировать бактерии по следующим признакам:

-гликолитическая активность (разложение углеводов) – среды Эндо, Гисса, Ресселя, Клиглера и др.;

-протеолитическая активность (разложение белков) – МПЖ, свернутая сыворотка, молочный агар;

-гемолитическая активность (разрушение эритроцитов) – кровяной агар (рисунок 40).

Рисунок 40 – Кровяной агар (содержит дефибринированную кровь, позволяет выделять бактерии, обладающие гемолитической активностью).

В частности, среда Эндо предназначена для выделения энтеробактерий и родственных микроорганизмов с одновременной их дифференцировкой по

34

способности утилизировать лактозу. Питательной основой этой среды является мясо-пептонный агар, дифференцирующим веществом – лактоза, индикатором – фуксин-сернистый реактив. На такой среде лактозопозитивные бактерии (E. coli) образуют темно-красные колонии с металлическим блеском, а лактозонегативные бактерии (шигеллы, сальмонеллы) – колонии серо-белого цвета (рисунок 41).

Рисунок 41 – Рост кишечной палочки на среде Эндо.

Элективные питательные среды содержат вещества, подавляющие рост одних бактерий, но не влияющие на рост других бактерий. Эти среды служат для выделения определенных видов бактерий из смешанных популяций. К элективным средам относятся желточно-солевой агар, селенитовая среда, среда Мюллера. Селективные среды содержат не только вещества, подавляющие рост отдельных видов бактерий, но и стимуляторы роста других бактерий. Например, солевой агар, предназначенный для выделения стафилококков, в качестве элективного фактора содержит повышенную концентрацию (10%) хлорида натрия. Желточно-солевой агар содержит не только элективный фактор (хлорид натрия), но и дифференцирующее вещество (желток), позволяющее определять наличие лецитиназы (рисунок 42).

Рисунок 42 - Желточно-солевой агар для выделения стафилококков.

Среда Плоскирева предназначена для выделения патогенных энтеробактерий (шигеллы, сальмонеллы) с одновременным подавлением роста кишечной палочки. Элективным фактором этой среды являются соли желчных кислот. Так как рост кишечной палочки подавляется не полностью, для ее выявления в среду добавлена лактоза (дифференцирующее вещество). Лактозонегативные бактерии (шигеллы, сальмонеллы) образуют на этой среде

35

бесцветные колонии, а лактозоположительные бактерии (кишечная палочка) – темно-красные колонии (рисунок 43).

Рисунок 43 – Среда Плоскирева.

Накопительные среды (обогатительные среды, среды обогащения) - это среды, на которых определенные виды культур растут быстрее и интенсивнее сопутствующей микрофлоры. Такие среды могут содержать элективный фактор для подавления роста сопутствующей микрофлоры или факторы, способствующие росту требуемых бактерий, например, солевой бульон для стафилококков, селенитовый бульон для сальмонелл (рисунок 44).

а б Рисунок 44 – Накопительные среды: а - солевой бульон, б - селенитовый бульон.

Так, солевой бульон (обогатительная среда для стафилококков) в качестве элективного фактора содержит 10% хлорида натрия, селенитовый бульон (обогатительная среда для сальмонелл) в качестве элективного фактора содержит селенит натрия, а сахарный бульон (обогатительная среда для стрептококков) содержит глюкозу в качестве ростового фактора.

Для длительного хранения микроорганизмов применяют консервирующие среды - с глицерином, мелом и др.

Характер роста бактерий на питательных средах. В жидких питательных средах при размножении бактерий наблюдают равномерное помутнение среды, поверхностный рост в виде пленок, пристеночный, придонный рост в виде осадка. На плотных питательных средах отмечается сплошной рост культуры (в виде газона) или образование изолированных колоний (рисунок 45).