Статья: Этиологическая структура и дифференциальная диагностика сальмонеллеза птиц

^{1ФГБОУ ВО «Московский государственный университет пищевых производств»}

²Российский университет дружбы народов

³ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии -- МВА им. К.И. Скрябина»

Этиологическая структура и дифференциальная диагностика сальмонеллеза птиц

Е.М. Ленченко¹, Ф.В. Кхай², Ю.А. Ватников²,

И.Н. Медведев², В.А. Гаврилов³

Аннотация

В статье представлены результаты изучения этиологической структуры и дифференциально-диагностических признаков сальмонеллеза птиц.

При идентификации бактерий, выделенных из 128 проб крови цыплят, с применением экспресс-теста «Salmonella latex kit» установлено доминирование культур микроорганизмов Salmonella spp. -- 10,94% (14 проб); 10 штаммов (71,43%) были отнесены к Salmonella gallinarum, 4 (28,57%) -- к Salmonella pullorum.

Общий уровень резистентности сальмонелл к ампициллину -- 57,58%, тетрациклину -- 60,61%; стрептомицину -- 66,67%; чувствительность к норфлоксацину -- 69,70%; цефтазидиму -- 78,79%; энрофлоксацину -- 57,58%; ципрофлоксацину -- 69,70% испытанных штаммов.

При патологоанатомическом исследовании наиболее часто выявлялись признаки перикардита, геморрагической пневмонии, аэросаккулита, катарально-геморрагического энтерита, перигепатита, гиперплазия селезенки.

Наиболее часто выявлялись признаки перикардита, аэросаккулита, катарально-геморрагического гастроэнтероколита, перигепатита, воспаление яичников, гиперплазия селезенки.

Выявляли признаки застойной гиперемии, макрофагальной реакции, гиперплазии и плазмоцитарной трансформации лимфоцитов, повышения проницаемости сосудов микроциркуляторного русла, лимфоидно-клеточной инфильтрации рыхлой волокнистой соединительной ткани, периваскулярного отека тканей, диссеминированного тромбоза, пролиферации лимфоцитов лимфатических узлов, селезенки, печени, поджелудочной железы.

При нарушении порозности кровеносных сосудов серозных оболочек органов наблюдались обширные серозные отеки, выход форменных элементов крови и выпадение фибриногена.

Ключевые слова: бактерии, дифференциальные признаки сальмонеллез, птица, цыплята

Аннотация

Сальмонеллезы -- группа бактериальных болезней, характеризуется при остром течении лихорадкой, явлениями септицемии, токсикоза и поражением кишечника, при подостром и хроническом -- пневмонией и артритами, массовая доля достигает 11,89 -- 14,60% [6, 13]. При контаминации бактериями пищевого сырья выявление бактерий Salmonella spp. составляет 19,0 -- 27,3% [2].

Установлена тенденция расширения ареалов циркуляции антибиотикорезистентных штаммов сальмонелл, в частности, отмечено преобладание устойчивости к антибиотикам группы пенициллинов -- 42,4 -- 57,6%; аминогликозидов -- 77,8 -- 100,0%, фторхинолонов -- 56,1 -- 80,0%, что обусловливает атипическое проявление клиникоморфологических признаков сальмонеллеза птиц [6].

При проведении эпизоотоло- гического мониторинга и изыскании средств борьбы с инфекционными болезнями применение бактериологических, биохимических, иммунохимических тестов связано с импортными расходными материалами, что снижает экономическую эффективность проводимых мероприятий. В этой связи актуальным является изучение этиологической структуры и дифференциально-диагностических признаков сальмонеллеза птиц на основе апробации эффективных ускоренных способов индикации бактерий, характеризующихся высокой производительностью, чувствительностью и селективностью.

Цель работы -- изучить этиологическую структуру и дифференциально-диагностические признаки сальмонеллеза птиц.

Материалы и методы

Объектом исследования являлись птица отряда Куриные породы «Tam Hoang», «Arboi Acres», 5--30-суточного постинкубационного онтогенеза.

С целью выделения возбудителей сальмонеллеза исследования проводили в соответствии с методическими указаниями: «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды» (М., 1990).

Для идентификации бактерий использовали питательные среды и тест-системы «Мюллер-Кауфман», «Тетратионатный бульон», модифицированный агар «Рапопорт-Вассилиадис» (Modified Semi-Solid Rappaport-Vassiliadis Medium -- «MSRV-agar») («Biokar Diagnostic», Франция), «Rambach agar», «XLT-4 аgar» («Merck», Германия), латекс-aгглютинационный экспресс-тест «Salmonella latex kit» («ОхоМ», Англия).

Серогрупповую приналежность сальмонелл определяли в реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками (ФГУП «Курская биофабрика»), в соответствии с рекомендациями, изложенными в «Наставлениях по применению наборов сывороток сальмонеллезных О-комплексных и монорецепторных O- и Н- aгглютинирующих для идентификации сальмонелл в РА на стекле» (М., 1997).

Экспериментальные данные подвергали статистической обработке общепринятым методом (Ашмарин И.П., Воробьев Л.А., 1962; Садовский Н.В., 1975), с использованием программы «Statistika» для PC Microsoft Excel 2007.

Результаты исследований

При видовой идентификации сальмонелл, выделенных при заболеваниях птиц, учитывали наличие грамотрицательных, факультативно-аэробных оксидазаотрицательных, каталазаположительных бактерий.

При исследовании 225 проб патматериала птиц выделено 130 штаммов сальмонелл (57,78%), в том числе из мышечной ткани -- 81,33%, печени -- 54,67%, кишечника -- 37,33% (табл. 1).

Таблица 1

Исследование проб патологического материала птиц

При учете дифференциации бактерий учитывали, что сальмонеллы ферментировали Б-глюкозу и многоатомные спирты с образованием кислоты и газа, разлагали глюкозу, маннит с образованием кислоты и газа, образовывали сероводород, не ферментировали сахарозу, не образовывали индол, эшерихии ферментировали лактозу и сахарозу, характеризовались протеолитической активностью (разжижали желатин и свернутую кровяную сыворотку, гидролизовали казеин); клебсиеллы утилизировали цитрат, малонат; цитробактеры утилизировали цитрат, ферментировали маннит, сорбит, ксилозу, мальтозу, иерсинии ферментировали маннит, мальтозу, утилизировали мочевину, продуцировали орнитиндекарбокси- лазу, не ферментировали рамнозу, раффинозу (табл. 2).

При использовании среды «MSRV-agar» недостатком является необходимость проведения дополнительной биохимической идентификации для выявления неподвижных штаммов сальмонелл, в частности, S. Gallinarum-Pullorum. Применение экспресс-теста «Salmonella latex kit», основанного на реакции агглютинации сенсибилизированных частицы латекса с образованием видимых агрегатов в течение 30--60 сек., позволяло проводить индикацию сальмонелл в течение 24 ч с учетом первичного обогащения при концентрации 100 бактериальных клеток в 1,0 мл.

Таблица 2

Результаты изучения дифференциально-диагностических свойств бактерий

Примечание: положительные штаммы: «+» -- > 90,0%; («+») -- 76,0--89,0%; х -- 26,0--75,0%; «-» -- 11,0-25,0%; («-») -- < 10,0%

При идентификации бактерий, выделенных из 128 проб крови цыплят, установлено доминирование культур микроорганизмов Salmonella spp. -- 10,94% (14 проб). При серологической идентификации сальмонелл 10 штаммов (71,43%) -- Salmonella gallinarum, 4 (28,57%) -- Salmonellapullorum.

Общий уровень резистентности сальмонелл к ампициллину -- 57,58%, тетрациклину -- 60,61%; стрептомицину -- 66,67%; чувствительность к норфлоксаци- ну -- 69,70%; цефтазидиму -- 78,79%; энрофлоксацину -- 57,58%; ципрофлокса- цину -- 69,70% испытанных штаммов. Восприимчивыми к сальмонеллезу, как правило, являлись цыплята, до 6-недельного возраста, наблюдали острое, подострое и хроническое течение болезни. Острое течение чаще отмечали у цыплят в возрасте 1...10 суток, выявляли снижение или отсутствие аппетита, вялость, признаки диареи -- feces содержали кровь, перья хвоста загрязнены; глаза полузакрыты или закрыты, крылышки опущены. Нередко наблюдали нервно-паралитические явления -- птицы лежали на боку с загнутой шеей, что сопровождалось подергиванием конечностей и дрожанием, утратой способности к передвижению.

При подостром и хроническом течении клинические признаки были менее выражены, выявляли нарушения функции желудочно-кишечного тракта, ухудшение аппетита, усиление жажды, воспаление конъюнктивы, взъерошенность перьевого покрова, поражения суставов проявлялись увеличением объема вследствие повышенного содержания суставной жидкости, мускулатура крыльев, ног уплотнена, иногда атрофирована, под кожей суставов формировались узелки величиной с горошину -- гранулемы.

Наблюдали снижение фагоцитарной активности лейкоцитов (%): контроль -- 61,4 ± 2,50, опыт -- 53,4 ± 1,25; индекс фагоцитоза (%): контроль -- 3,21 ± 0,15, опыт -- 2,72 ± 0,24. Биохимические показатели характеризовались снижением общего белка, глюкозы, аланинаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, повышением мочевины, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, наблюдались нарушения водно-электролитного баланса.

Патологические признаки преимущественно локализовались в органах пищеварительной, сердечно-сосудистой, иммунной, дыхательной, выделительной систем. Наиболее часто выявлялись признаки перикардита, аэросаккулита, катарально-геморрагического гастроэнтероколита, перигепатита, воспаление яичников, гиперплазия селезенки (табл. 1).

Таблица 1

Результаты патологоанатомических исследований (п = 200)

При остром течении в тонком отделе кишечника обнаруживали скопления слизи и газов, слизистая оболочка набухшая, гиперемированная, иногда в отдельных участках отмечали мелкие кровоизлияния; в толстом отделе кишечника -- отрубевидный налет, в отдельных участках точечные кровоизлияния и мелкие эрозии; на протяжении желудочно-кишечного тракта наблюдали точечные, пятнистые и полосчатые кровоизлияния, серозный отек слизистой оболочки, признаки катарального или катарально-геморрагического гастроэнтерита. Селезенка увеличена, набухшая, на разрезе повышенное кровенаполнение пульпы.

Печень коричневатобурого цвета, с зеленоватым оттенком, под капсулой и в толще паренхимы нередко отмечали мелкие очажки некроза серо-желтоватого цвета, центральные вены и внутридольковые капилляры расширены и заполнены кровью, на периферии долек гиперемия выражена слабо. Печеночные балки в центре долек истонченные, сдавлены расширенными капиллярями, в отдельных дольках гепатоциты распадались на группы клеток.

В центре долек печеночные балки тонкие, границы гепато- цитов нечеткие, ядра уменьшены, имеют неровные контуры, в состоянии пикноза, цитоплазма содержит неокрашенные участки, жировые капли. Желчный пузырь растянут и заполнен желчью темно-оливкового цвета с примесью фибрина и слизи, слизистая оболочка набухшая, гиперемированная, точечными кровоизлияниями, покрыта пленками фибрина.

Почки увеличены, с признаками застойной гиперемии и дистрофии, под капсулой выявляли точечные кровоизлияния, между клубочковыми капсулами и клубочками наблюдали просветы, заполненные однородным розовым веществом. Как правило, выявляли застойный геморрагический инфаркт и некроз эпителия канальцев. Почечные клубочки увеличены, прилегали к капсулам, сосуды инъецированы кровью.

Хроническое течение сопровождалось поражением преимущественно толстого отдела кишечника и отростков слепой кишки, что проявлялось некрозом слизистой оболочки и наложениями фибрина. Селезенка увеличена, на разрезе выявлено набухание фолликулов.

Полость перикарда заполнена серозным или серозно-фибринозный экссудатом, на эпикарде выявляли наложения фибрина и сращение эпикарда с перикардом, сердце увеличено в объеме за счет расширения правого желудочка, миокард дряблый, серо-красного цвета, с мелкими очагами некроза, коронарные сосуды расширены, наполнены кровью.

В легких выявлялись очаги уплотнения серо-красного цвета, просветы альвеол и бронхиол заполнены транссудатом, содержащим эритроциты, лимфоциты, псевдоэозинофилы, клетки альвеолярного эпителия; при развитии аэросаккулита в воздухоносных мешках обнаруживали серозный экссудат с примесью хлопьев фибрина.