Статья: Динамика содержания Т-лимфоцитов у пациентов в остром периоде инфаркта мозга в зависимости от исхода заболевания

Государственное учреждение «Республиканский научно-практический центр неврологии и нейрохирургии»

Государственное учреждение РНПЦ трансплантологии и клеточных технологий

Государственное учреждение «Больница скорой медицинской помощи»

Динамика содержания Т-лимфоцитов у пациентов в остром периоде инфаркта мозга в зависимости от исхода заболевания

Э.К. Сидорович

Н.В. Гончарова

С.А. Лихачев

Ю.С. Шабалин

г. Минск

Аннотация

Цель - изучить содержание Т лимфоцитов в периферической крови пациентов в остром периоде инфаркта мозга, а также динамику их уровней в зависимости от клинического исхода заболевания.

Материалы и методы. Обследовано 194 пациента в остром периоде инфаркта мозга. Группу контроля составили 79 здоровых человек соответствующего пола и возраста. Определение популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови пациентов производили с помощью комбинации моноклональных антител к СD4, СD8 и СD3, CD19, CD40, CD154, CD25, TcRySмеченных FITC-флуоресцеин-З-изотиоцианатом, PE-фикоэрит - рином и PC5 - фикоэритрин-цианином-5 производства фирмы BeckmanCoulter.

Результаты. В общей группе ИМ выявлено снижение содержания CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD25+, CD4+CD154+ Т лимфоцитов (Р<0,05), что подтверждает развитие инсульт-индуцированной иммунодепрессии. Установлена гетерогенность группы пациентов с позиций особенностей иммунного ответа при ИМ: процент пациентов с более низким содержанием CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD25+, CD4+CD154+ и более высоким содержанием CD3-CD8+, TcRyS+CD4+ лимфоцитов значимо превышал таковой в контрольной группе (Р<0,05). В качестве клинических маркеров инсульт-индуцированной иммунодепрессии можно рассматривать пожилой возраст пациентов, выраженный неврологический и функциональный дефицит, обширное поражение ткани головного мозга, развивающееся при более выраженном атеросклерозе экстракраниальных артерий, системном воспалении и гиперкоагуляции у пациентов с хроническими инфекциями / воспалительными заболеваниями.

Выводы. Установлено направление потенциальной иммунокоррекции при ИМ. У пациентов с проявлениями иммунодепрессии улучшение состояния было связано с повышением уровней CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD25+, CD4+CD154+, CD4+CD25+hiТ лимфоцитов к 14 дню заболевания. У пациентов с высоким содержанием CD3-CD8+Tлимфоцитов, TcRyS+CD4+ лимфоцитов благоприятный прогноз ассоциировался с нормализацией уровней данных клеток.

Ключевые слова: инфаркт мозга, инсульт-индуцированная иммунодепрессия, Т - лимфоциты, исход заболевания

Abstract

лимфоцит инфаркт мозг иммунодепрессия

The T-lymphocytes count dynamics in the patients with ischemic stroke in relation with its outcomes

E.K. Sidorovich, N.V. Goncharova, S.A. Likchachev, Yu.S. Shabalina

State Institution National Neurology and Neurosurgery Practical Research Center,

State Institution Transplantology and Cell Technology NPRC,

State Institution Emergency Care Hospital, Minsk, Republic of Belarus

Objective: to explore the T lymphocyte counts and its dynamics depending on the clinical outcomes in ischemic stroke patients.

Materialsandmethods. A total of 194 patients with a stroke were examined. The control group consisted of 79 healthy persons of both sexes and respective age. To determine population and subpopulation peripheral blood lymphocyte counts in the patients we used a combination of monoclonal antibodies to CD4, CD8 and CD3, CD19, CD40, CD154, CD25, TcRyS marked with FITC - fluorescein-5-isothiocyanate, PE - phycoerythrin and PC5 - phycoerythrin-cyanine -5 by Beckman Coulter.

Results. The stroke patients' study group had a reduction in CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD25+, CD4+CD154+ T lymphocyte levels (p<0.05), which was evidence of developing stroke-induced immunodepression. We have established that the patient's group was heterogeneous from the standpoint of immune response during a stroke: the portion of patients with lower CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD25+, CD4+CD154+ lymphocyte levels, and higher levels of CD3-CD8+, TcRyS+CD4+ lymphocytes was significantly higher than that in the control group (p<0.05). The clinical markers of stroke-induced immunodepression included the elderly age of the patients, marked neurological and functional deficit, gross lesions in brain tissue that developed against the background of more advanced atherosclerosis of extracranial arteries, systemic inflammation and hypercoagulability in patients with chronic infections/inflammatory conditions.

Conclusions. We identified the direction potential immune correction in stroke patients could take. In patients with symptoms of immundepression the improvement in their condition was linked with increased CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD25+, CD4+CD154+, CD4+CD25+hi T lymphocyte levels by the 14th day of the disease. Patients with high CD3-CD8+ T lymphocyte and TcRyS+CD4+ lymphocyte levels had favorable prognosis linked with normalized levels of these cells.

Keywords: stroke, stroke-induced immunodepression, T lymphocytes, outcome of the disease

Основная часть

До последнего времени данные об иммунном ответе и возможных путях иммунокоррекции при инфаркте мозга (ИМ) противоречивы. С одной стороны, одним из важных звеньев ишемического каскада является локальное воспаление, ключевую роль в котором играют Т-лимфоциты, накапливающиеся в зоне ИМ и продуцирующие провоспалительные цитокины, цитотоксины, усиливающие повреждающее действие ишемии [3]. С другой стороны, острое поражение головного мозга приводит к гиперактивности симпатической нервной системы и гипоталамо - гипофизарно-надпочечниковой системы с избыточной выработкой катехоламинов, кортизола, усилением апоптоза лимфоцитов на уровне костного мозга, тимуса, периферических лимфоидных органов, т.е. к так называемой инсульт-индуцированной иммунодепрессии с повышением риска инфекционных осложнений ИМ [4]. Предпринимавшиеся попытки использования иммуносупрессантов для ограничения отрицательной роли Т-лимфоцитов в очаге ИМ в экспериментальных исследованиях не оправдали себя в связи с повышением риска инфекционных осложнений [7].

Несмотря на положительный опыт применения ряда иммуномодуляторов в остром периоде ИМ [1], большинство экспертов в области лечения инсульта к применению иммунокоррекции при ИМ относятся сдержанно в связи с возможностью усиления повреждающего действия воспаления в очаге. До настоящего времени не установлено, какие изменения в содержании Т-лимфоцитов периферической крови (ПК) могут быть ассоциированы с благоприятным и неблагоприятным исходами в острейшем периоде ИМ.

Цель - изучить содержание Т-лимфоцитов в периферической крови пациентов в остром периоде инфаркта мозга, а также динамику их уровней в зависимости от клинического исхода заболевания.

Материалы и методы исследований. За 2011-2013 г. обследовано 194 пациента в остром периоде ИМ (115 мужчин, 79 женщин в возрасте 65,0; 55,0-74,0 лет), находившихся во II неврологическом отделении УЗ «Городская клиническая больница скорой медицинской помощи» г. Минска. Группу контроля для анализа показателей лабораторных исследований составили 79 человек соответствующего пола и возраста без нарушения мозгового кровообращения, инфекционных, воспалительных и онкологических заболеваний. Выраженность неврологического дефицита при остром ИМ оценивалась с применением шкалы инсульта Национального института здоровья (NationalInstitutesofHealthStrokeScale - NIHSS), функциональная активность - по шкале Бартеля. Для подтверждения диагноза проводили нейровизуализацию с использованием магнитно-резонансной и / или компьютерной томографии, дуплексное сканирование экстрацеребральных артерий. Анализ динамики уровней некоторых Т-лимфоцитов проводился в двух группах пациентов в зависимости от исхода к 14-му дню от начала заболевания: одну группу составили пациенты с благоприятным исходом (n=148/76,3%), т.е. с восстановлением уровня сознания, уменьшением выраженности неврологического дефицита, вторую - пациенты с неблагоприятным исходом (n=46/23,7%), в том числе с летальным (n= 12), а также с прогрессированием неврологического дефицита, стабилизацией тяжелого состояния пациента (n= 34).

Определение концентрации С-реактивного белка ^СРБ) в сыворотке крови выполнялось методом иммунотурбидиметрии на автоматическом анализаторе «Konelab 30i» с применением реактивов «DiaLab», Австрия. Д-димеры в плазме крови исследовали на автоматическом коагулометре «ACL» с использованием реагентов фирмы «ACL». Определение популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови (ПК) пациентов производили с помощью комбинации моноклональных антител к CD4, CD8 и CD3, CD154, CD25, TcRy5 меченных FITC - флуоресцеин-5-изотиоцианатом, PE-фикоэритрином и PC5 - фикоэритрин-цианином-5 производства фирмы BeckmanCoulter. Аналитическую цитометрию проводили на лазерном (15 мВт 488 нм) проточном цитофлуориметреFACScan (BectonDickinson) с использованием программ SELLQuest.

Полученные данные обрабатывались с помощью компьютерной программной системы STATISTICAforWindows (StatSoft, USA, версия 8.0). Оценивались медиана и процентильный интервал (25 и 75 процентили). Для сравнения показателей в группах пациентов применяли непараметрический тест Манна-Уитни, для оценки изменения значений показателей в динамике - непараметрический тест Вилкоксона. Сравнение частот бинарного признака в двух независимых группах проводили по критерию х2 и точному одностороннему критерию Фишера.

Результаты и их обсуждение. Как видно из таблицы 1, уровни относительного содержания CD3+ и CD3+CD4+, CD3+CD8+,

CD4+CD154+, CD4+CD25+, CD4+CD25+hiТ лимфоцитов у пациентов с ИМ были значимо ниже, чем у здоровых лиц контрольной группы (Р<0,05 по критерию Манна-Уитни).

Таблица 1. Содержание некоторых Т-лимфоцитов в периферической крови пациентов в остром периоде инфаркта мезга

Примечание: представлены данные об относительном содержании (%) соответствующих Т лимфоцитов в виде медианы, верхнего и нижнего квартилей

Полученные результаты рассматривались нами как подтверждение известной тенденции развития при ИМ инсульт - индуцированной иммунодепрессии [4]. Однако данное снижение содержания Т-лимфоцитов наблюдалось далеко не у всех пациентов с ИМ. Как видно из таблицы 2, была установлена гетерогенность содержания Т-лимфоцитов при ИМ. При этом наиболее низкие уровни CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+CD154+, CD4+CD25+ Т клеток у пациентов с ИМ соответствовали уровням ниже нижнего квартиля и определялись у 21,6%-26,7% пациентов, т.е. значимо чаще, чем в контрольной группе здоровых (Р<0,05).

Таблица 2. Распределение пациентов с инфарктом мозга в зависимости от уровней относительного содержания Т-лимфоцитов в периферической крови

Для установления клинических особенностей группы пациентов с признаками инсульт-индуцированной иммунодепрессии проведен сравнительный анализ клинико-демографических показателей у пациентов с различным содержанием CD3+ Т лимфоцитов в первые дни заболевания.

Таблица 3. Некоторые клинико-демографические и лабораторные показатели, а также тяжесть неврологического дефицита и функциональных нарушений у пациентов с инфарктом мозга в зависимости от уровней содержания CD3+ Т лимфоцитов в периферической крови

Как видно из таблицы 3, для пациентов со снижением содержания CD3+ менее 57,7% Т-лимфоцитов были характерны более пожилой возраст, преобладание женщин, более обширное повреждение ткани головного мозга при более выраженных проявлениях атеросклероза внутренней сонной артерии (ВСА), системного воспаления ^СРБ), гиперкоагуляции (Д-димеры), Р<0,05, неврологических и функциональных нарушений как в начале, так и на 14 день от начала заболевания (Р<0,05). Отмечена также более высокая частота хронических инфекций и воспалительных заболеваний дыхательных путей желудочно-кишечного тракта, мочевой системы (хронический бронхит, язвенная болезнь желудка, 12 - перстной кишки, хронический пиелонефрит), Р<0,05.