МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования
«Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова»
Выделение клинических изолятов бацилл и методы определения их безвредности и пробиотических свойств
Методические рекомендации для аспирантов, специализирующихся в области микробиологии и
биотехнологии и специалистов
Саратов 2011
УДК 576.8:576.851.5:725.59619
Авторы: И.Г. Позднякова, Л.С. Назарова
В настоящих рекомендациях описаны методы выделения из внешней среды бацилл, определение их безвредности и возможности использования в качестве пробиотиков.
2
Введение |
|
Основной проблемой последних десятилетий |
является широкое |
распространение резистентных к дезинфицирующим средствам и антибиотикам штаммов условно-патогенных микроорганизмов в лечебных учреждениях для людей и животных, на фермах и в индивидуальных хозяйствах (1,2,3,4). Для решения проблем дезинфекции в помещениях,
где содержатся животные и лечения ран, дисбактериозов предлагается управление средой на микробиологическом уровне за счѐт использования микроорганизмов со свойствами пробиотиков (2). Последние представляют собой безопасные для макроорганизма бактерии, обладающие антагонистической активностью по отношению к условно-патогенным микроорганизмам. Свойства пробиотиков отмечены у представителей различных семейств и родов бактерий, в том числе у рода Bacillus.
Бактерии рода Bacillus- одни из наиболее разнообразных и широко распространѐнных групп микроорганизмов в окружающей среде. На основе бацилл создан «Концентрат ORGANICS Zoo Professional» (производитель Германия), содержащий споры подобных бактерий (6). Вместе с тем штаммы B. subtilis и B. cereus со свойствами пробиотиков получают из различных источников, но не из конкретного стационара или фермы,
поэтому нельзя быть уверенным в их эффективности в качестве антагонистов условно-патогенных бактерий, циркулирующих в конкретном помещении.
3
1. Оборудование, материалы, реактивы, объекты
1.1. Оборудование и материалы
1. Микроскоп;
2.Автоклав;
3.Термостат;
4.Сушильный шкаф;
5.Пробойник;
6.Бактериологическая петля;
7.Стеклянный шпатель;
8.Чашки Петри;
9.Пробирки;
10.Предметные стѐкла;
11.Ватные тампоны стерильные;
12. Стандарт мутности бактериологический (0,5 по Мак-Фарланду); 13. Физиологический раствор 0,85% Na Cl;
14. 3% раствор перекиси водорода;
15. Реактив Грисса; 16. Краски: генцианвиолет, раствор Люголя, йодированный спирт,
фуксин Пфейффера.
1.2. Питательные среды Мясо-пептонный агар (МПА), 5% кровяной агар (КА), желточно-
солевой агар (ЖСА), мясо-пептонный бульон (МПБ), питательный желатин, среды Гисса, дифференциально-диагностическая среда для B. cereus. (агар желточный с полимиксином и феноловым красным).
1.3. Штаммы условно-патогенных микроорганизмов Музейные штаммы бактерий: разные виды стафилоккоков,
стрептококков, протея, синегнойной палочки, кишечной палочки.
4
Клинические изоляты штаммов бактерий, циркулирующих в
конкретном лечебном учреждении для людей и животных, а также в помещениях, где содержатся животные: золотистый стафилоккок,
кишечная палочка, моракселлы, ацинетобактер и другие.
1.4. Объект Беспородные белые мыши массой 18-20 г обоего пола.
ХОД ИССЛЕДОВАНИЯ
2. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха и
поверхностей
Бациллы выделяют из воздуха и поверхностей при проведении санитарно-микробиологического исследования лечебного учреждения или других помещений, где содержатся животные.
Для исследования микробного обсеменения воздуха в помещении чашки Петри с МПА и ЖСА оставляют открытыми на 10 мин, с КАна 40
мин. Затем крышки закрывают, чашки Петри ставят в термостат при температуре 37 0С. Через сутки оценивают результаты: количество выросших колоний и их характеристики, делают мазки и окрашивают по Граму.
Для исследования микрофлоры поверхностей стерильным ватным тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором, с площади
1м2 или со всей поверхности небольших объектов берут смывы и помещают в пробирку с 1 мл стерильного физиологического раствора,
встряхивают в течение 5 минут, после этого осуществляют посев по 0,1мл на питательные среды: МПА, КА и ЖСА. Посевы инкубируют при 37 0С в течение суток. После этого оценивают результаты, как указано выше.
5