Материал: Тец руководство

• Микробиологическая диагностика сальмонеллезов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ: микробиологическая диагнос­тика сальмонеллезов принципиально не отличается от диа­гностики брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика не применяется по причине большого числа сероваров возбуди­телей.

• Микробиологическая диагностика кишечного иерсиниоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь, моча, спинномозговая жид­кость.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Посев материала на диф­ференциально-диагностические (среда Эндо, Мак-Конки, СБТС-агар с желчью и бромтимоловым синим) и селективные (CIN-агар с антибиотиками цефсулодином и новобиоцином) плотные среды или жидкие среды обогащения (буферно-казе-иново-дрожжевой бульон, 1 %, пептонная вода с рН 7,6—7,8). Посевы инкубируют при 25 "С в течение 24—48 ч. Идентифи­кация чистой культуры осуществляется на основании морфо­логии, подвижности, тинкториальных свойств (грамотрицательные палочки с закругленными концами и характерным биполярным окрашиванием, неспорообразующие, перитрихи), культуральных, биохимических признаков.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить пред­варительный диагноз.

Серодиагностика. Диагностическое значение имеет обнару­жение антител к поверхностным антигенам возбудителей наи­более распространенных серотипов (ОЗ, О4, О5, Об, О8, О9) в РА. Положительной считается РА в титре не менее 1:160. Разработаны также ИФА-тесты.

• Микробиологическая диагностика кишечного дисбактериоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Имеет ориентировочное значение. При резко выраженном дисбактериозе в мазках пре­обладают микроорганизмы определенных видов (например, дрожжеподобные грибы, стафилококки и др.) на фоне сущест­венного уменьшения грамотрицательной микрофлоры.

Бактериологическое исследование. Проводится количествен­ное исследование состава микрофлоры кишечника. Для этого из исследуемого материала готовят разведения 10~², 10~⁴, 10~^ и т.д. Первичные посевы по 0,1 мл каждого разведения про­изводят параллельно на несколько питательных сред (Эндо, кровяной агар, ЖСА, агар Сабуро и др.) и инкубируют при 37 °С. Подсчитывают число выросших колоний и определяют число КОЕ в 1 г материала. Проводят отсев 2—3 колоний каждого вида для выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов.

Для обнаружения анаэробных Bifidobacterium spp, делают мерные посевы материала в разведениях 10~⁷ и выше в про­бирки с 13—15 мл модифицированной среды Блаурокка, в со­став которой входит печеночный бульон, пептон — 1 %, лакто­за — 1 %, хлорид натрия — 0,5 %, цистин — 0,01 %, агар-агар — 0,75%, твин-80 — 0,1 %. При росте Bifidobacterium spp. через 24—48 ч происходит помутнение всей среды с образованием тяжей или отдельных колоний. Готовят мазки и окрашивают по методу Грама. Выделение чистых культур Bifidobacterium spp. является весьма трудоемким и практически необязатель­ным. При необходимости идентификацию представителей рода осуществляют по биохимическим свойствам.

Для оценки результатов бактериологического исследования

Получают так же, как и другие диагностические сыворотки. Применяют для серотипирования сальмонелл в реакции аг­глютинации.

Сальмонеллезные О- и Н-монодиагностикумы. Представляют собой взвеси сальмонелл, убитых нагреванием (О-диагностику-мы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы). Применя­ют для серодиагностики брюшного тифа в реакции Видаля.

Типовые сальмонеллезные бактериофаги. Применяют для фа-готипирования сальмонелл.

Брюшнотифозная моновакцинд и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном. Применяют для специфи­ческой активной профилактики брюшного тифа.

Поливалентный брюшнотифозный бактериофаг. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики брюшного тифа.

Коли-бактерин. Содержит лиофильно высушенные живые клетки E.coli штамма М17, обладающего выраженными анта­гонистическими свойствами в отношении ряда патогенных ки­шечных бактерий. Применяют для нормализации кишечной микрофлоры при дисбактериозе и лечении дизентерии, глав­ным образом у детей.

Бифидумбактерин. Содержит лиофильно высушенную взвесь живых клеток B.bifidum. Применяют для лечения хронических кишечных инфекций невыясненной этиологии у детей и ди­зентерии.

Бификол. Содержит смесь высушенных живых бактерий E.co­li штамма М17 и B.bifidum. Показания к применению те же.

Лактобактерин. Содержит продукты жизнедеятельности лак-тобактерий. Выпускается в таблетированном виде. Применяют для лечения дисбактериозов у детей.

Антибиотики: сульфаниламиды, полусинтетические пени-циллины, цефалоспорины 2—4-го поколения, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолоны, полимиксин.

Тема 13.3. ВОЗБУДИТЕЛИ ПИЩЕВЫХ

ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ, ИНТОКСИКАЦИЙ, ХОЛЕРЫ

И ДРУГИХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

План

Программа

Биологические свойства возбудителей холеры, пищевых токсикоинфекций и интоксикаций. Их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемио­логия вызываемых заболеваний.

Лабораторная диагностика.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

Демонстрация

Мазки из чистых культур возбудителей пищевых ин­токсикаций кишечных инфекций: Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, Vibrio cholerae. Окраска по методу Грама.

Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

Задание студентам

Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

Бактериологическая диагностика холеры.

Указать материал для исследования.

Идентификация чистой культуры вибрионов, вы­деленных от больного:

изучить морфологические и тинкториальные свойства: микроскопировать мазок из чистой
культуры, выделенной от больного;

изучить антигенные свойства: отметить резуль­таты развернутой реакции агглютинации с диа­гностической 01-сывороткой;

изучить биохимические свойства: отметить ре­зультат гексаминового теста;

определить чувствительность выделенной куль­туры к диагностическим бактериофагам;

отметить способность к росту на среде с полимиксином;

дать заключение.

3. Диагностика ботулизма:

указать материал для исследования;

проанализировать результаты РИГА для обнаруже­ния ботулотоксина в сыворотке крови больного
(реакция Бойдена). Дать заключение.

4. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профи­лактическими препаратами.

Методические указания

• МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

• Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфек-иий, вызванных Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp,

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, рвотные мас­сы, промывные воды желудка больного, остатки пищевых про­дуктов — возможные источники и факторы передачи инфек­ции.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Производят путем посева

материала на дифференциально-диагностические и элективные среды (Эндо, висмут-сульфит агар и др.) для выделения чистой культуры сальмонелл и эшерихии, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным питательным агаром для вы­явления бактерий рода Proteus. После инкубации посевов при 37 °С в течение 20—24 ч отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие "ползучего" роста, ха­рактерного для Proteus spp., в пробирке со скошенным пита­тельным агаром. Подозрительные колонии пересевают на ско­шенный питательный агар для получения чистых культур и одновременно ставят с ними ориентировочную реакцию агг­лютинации на стекле, используя смеси диагностических сыво­роток. На следующий день с чистой культурой ставят развер­нутую реакцию агглютинации с соответствующей монорецеп-торной сывороткой и делают посев на среды "пестрого" ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл или эшерихии из организма больных людей и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой ток-сикоинфекции — источнике заболевания. При наличии "пол­зучего" роста на скошенном питательном агаре из конденса­ционной воды петлей берут материал для приготовления пре­парата "висячая" капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. Затем выделяют чистую культуру, определяют биохи­мические и другие признаки и устанавливают вид: P.vulgaris, P.mirabilis, P.morganii и P.rettgeri.

Оценка роли условно-патогенных микроорганизмов в этио­логии пищевых токсикоинфекций должна быть строго аргу­ментирована: а) бактериологическим, серологическим, эпиде­миологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры; б) выделением идентичных штаммов ус­ловно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов.

• МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ИНТОКСИКАЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

• Микробиологическая диагностика стафилококковых пище­вых интоксикаций

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: рвотные массы, про­мывные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Диагностика основана на об­наружении энтеротоксина в исследуемом материале. Энтеро-токсин Staphylococcm spp. экстрагируют изотоническим раствором хлорида натрия, затем определяют его присутствие и се­рологическую специфичность реакцией преципитации в геле с иммунными антитоксическими сыворотками А, В, С. Техника постановки реакции описана выше (см. рис. 10.1.6). Исполь­зуют также латекс-агглютинацию, ИФА, РИА и др.

Бактериологическое исследование. С целью выделения чис­той культуры стафилококка исследуемый материал, который может содержать жизнеспособные бактерии, засевают в чашки с ЖСА. Полученные по схеме (см. тему 12.1) чистые культуры проверяют на способность продуцировать энтеротоксины. Для эпидемиологического анализа массовых стафилококковых ин­токсикаций проводят фаготипирование выделенных культур с помощью набора стафилококковых фагов.

Биопроба. Для обнаружения энтеротоксина можно исполь­зовать биопробу — скормить изучаемый материал котятам-со­сункам, у которых стафилококковый энтеротоксин вызывает рвоту и понос через 30—60 мин после скармливания.

• Микробиологическая диагностика пищевых интоксикаций,
вызванных C.perfringens типа А

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: подозрительные пи­щевые продукты (мясные, рыбные и др.), испражнения, рвот­ные массы, промывные воды желудка.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Поскольку энтеротоксин C.perfringens типа А выделяется в процессе спорообразования в кишечнике больного и быстро разрушается, обнаружить его в продуктах или материале от больного практически не удается. Основным методом диагностики является бактериологический. Выделение чистой культуры производят стандартным методом (см. тему 12.2). Диагностическое значение имеет обнаружение большого количества бактерий в материале от больного и по­дозрительном продукте.

• Микробиологическая диагностика ботулизма

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: сыворотка крови, мо­ча, испражнения, промывные воды желудка, остатки пищи или подозреваемые продукты (колбасы, мясные, рыбные, фрукто­вые, овощные консервы и др.).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Диагностика основана на об­наружении ботулотоксина в исследуемом материале. С этой целью ставят реакцию Бойдена — РИГА с эритроцитами, на­груженными моновалентными антитоксическими противобо-тулиническими сыворотками типов А, В, Е. В качестве кон­троля используют нормальную сыворотку крови. Для выявле­ния ботулотоксина могут быть использованы также ИФА и другие чувствительные серологические реакции.

Биопроба. Для обнаружения ботулотоксина в пищевых про­дуктах и определения токсигенности C.botulinum можно про­вести реакцию нейтрализации токсина на белых мышах. Для определения серотипа токсина реакцию ставят с моновалент­ными сыворотками типов А, В, Е. При нейтрализации токсина гемолитической антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.

• Микробиологическая диагностика пищевых интоксикаций, вызванных бактериями рода Bacillus

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: рвотные массы, про­мывные воды желудка, фекалии, подозрительные пищевые продукты.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Материал засевают на кровяной агар или селективные среды с лецитином и поли-миксином. При исследовании материала, содержащего посто­роннюю микрофлору (фекалии), образцы предварительно об­рабатывают нагреванием при 63 °С в течение 15 мин или 50 % этиловым спиртом (45—60 мин) для уничтожения вегетативных форм бактерий. Споры возбудителя при этом сохраняются. Идентификацию выделенной чистой культуры производят по морфологии, наличию и расположению спор, тинкториальным свойствам и биохимическим признакам. Для эпидемиологичес­кого анализа осуществляется серотипирование по жгутиковому антигену (существует более 40 серотипов).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Токсины Bacillus cereus могут быть обнаружены во всех вышеназванных видах материала, включая фекалии, с помощью серологических реакций (ИФА, РИА, иммунопреципитации и др.).

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

• МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения боль­ного, рвотные массы, вода, пищевые продукты; при постмор-тальной диагностике: отрезки тонкой кишки и желчный пу­зырь с частью печени. При необходимости хранения материал помещают в транспортную среду (буферный солевой раствор с глицерином). Для длительного сохранения рекомендуется по­лоску фильтровальной бумаги, смоченную в жидких испраж­нениях, поместить в герметически закрытый пластиковый кон­тейнер — для предохранения от высыхания. Таким образом возбудитель сохраняется в материале до 5 нед.