Материал: Методы исследования в медицинской бактериологии

131

Рисунок 131 - Пластина ДС-ДИФ-ЭНТЕРО-12 для дифференциации энтеробактерий. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Рисунок 132 - Пластина ДС-ДИФ-ЭНТЕРО-24 для дифференциации энтеробактерий. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Тест-системы ЭНТЕРОтест 24 (PLIVA-Lachema, Чехия) предназначены также для идентификации энтеробактерий по 24 признакам в течение 18-24 часов (рисунок 133). Учет результатов этих тестов производится как визуально по изменению окраски, так и с помощью анализаторов (Multiscan, iEMS-reader, Финляндия).

133

Кроме стрипов для биохимической идентификации бактерий выпускаются

Рисунок 135 – Биохимическая панель RapID STAPH PLUS Panel для идентификации стафилококков. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Для идентификации энтеробактерий разработана специфическая система Enterotube (США), представляющая собой пробирку с 12 отсеками, заполненными различными агаровыми средами. Некоторые среды покрыты слоем воска для защиты от воздуха. Через отсеки проходит канал с тонким металлическим стержнем (рисунок 136).

Рисунок 136 - Система Enterotube. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Выступающим концом стержня под белой крышкой касаются колонии и затем протягивают стержень через все отсеки. Таким способом засевают все среды в отсеках. Порядок проведения посева подробно описан в прилагаемой инструкции. Инкубируют системы в течение 24 часов при температуре 36ОС. Дальнейшая идентификация происходит с использованием кодовой книги.

Стрипы биохимической идентификации используются для идентификации бактерий до вида за 24 часа. Метод биохимической идентификации бактерий с помощью стрипов признан референсным методом во многих странах, в том числе в России.

Методика работы с микротест-системами состоит в следующем. Вначале выделяют чистую культуру бактерий и путем микроскопического исследования окрашенных по Граму мазков устанавливают принадлежность бактерий к

134

грамположительным или грамотрицательным палочкам или коккам для выбора необходимой тест-системы. При необходимости с помощью экспресс-тестов определяют каталазу и оксидазу. Затем готовят бактериальную суспензию с определенной концентрацией клеток по стандарту мутности. Полученную бактериальную суспензию аккуратно вносят в каждую лунку или ячейку, содержащую дифференциально-диагностические среды и индикаторы (субстратноиндикаторные питательные среды). Содержимое ячеек некоторых тест-систем стабилизировано поливиниловым спиртом. В некоторые лунки для создания анаэробных условий добавляют стерильное вазелиновое масло или расплавленный парафин в соответствии с инструкцией. Инкубируют тест-системы в термостате при рекомендованной инструкцией температуре в течение необходимого времени в зависимости от вида бактерий. При необходимости для выявления тех или иных соединений в некоторые ячейки добавляют дополнительные ингредиенты, прилагаемые к тест-системам. Учет результатов проводится визуально или с помощью микробиологических анализаторов. Идентификация осуществляется при помощи таблиц биохимической активности, профильных индексов, диагностических регистров или компьютерных программ в зависимости от вида используемых тест-систем.

5.2.6. Полуавтоматические и автоматические системы идентификации микроорганизмов и определения антибиотикочувствительности

Повышение точности идентификации бактерий возможно с использованием бактериологических полуавтоматических и автоматических анализаторов и систем для экспресс-диагностики. Недостатком полуавтоматических и автоматических анализаторов является обязательное наличие чистой культуры возбудителя. Тем не менее, автоматические анализаторы идентификации бактерий позволяют за 24-48 часов получить информацию о виде возбудителя заболевания и его чувствительности к антимикробным препаратам.

Полуавтоматические и автоматические системы выпускаются многими производственными компаниями (“bioMerieux”, Франция; “Beckman” США; “LACHEMA”, Чехия; “Labsystems”, Финляндия).

Системы Microscan (“Beckman” США) используют турбидиметрические, колориметрические и флюориметрические методы идентификации бактерий. Они состоят из комплектов пластиковых планшетов, содержащих различные субстраты (96 лунок). Эти системы позволяют дифференцировать грамположительные и грамотрицательные бактерии с помощью флюоресцирующих субстратов за 2 часа. Система позволяет идентифицировать грамположительные и грамотрицательные бактерии, сложные для культивирования микробы (анаэробы, нейссерии, гемофилы, моракселы, грибы). Для идентификации гемофилов, анаэробов и дрожжей используют хромогенные субстраты, изменяющие свою окраску (время анализа – 4- 6 часов). Минимальные ингибирующие концентрации различных антибиотиков эти системы определяют по изменению оптической плотности. Системы Microscan