На 5 и 9 день после заражения проводили диагностический убой в опытной группе (по 3 головы), патологоанатомическое вскрытие, сопровождавшееся подробным протоколированием и фотографированием материала с использованием цифрового фотоаппарата Canon PowerShot 610A. Для исследований отбирали кусочки сердца, печени, почек, легких, желудка, тонкого и толстого отделов кишечника, головного и спинного мозга, поджелудочной железы, селезёнки, тимуса, подчелюстных и брыжеечных лимфатических узлов, скелетных мышц, трубчатых костей, кожи с измененной подкожной клетчаткой. Для фиксации патологического материала использовали 10% водный раствор нейтрального формалина. Большая часть материала заливалась в парафин по общепринятой методике (Меркулов Г.А., 1969). С парафиновых блоков получали срезы толщиной 5-7 мкм с помощью санного микротома модели Reichert Wien 2712. При окраске большинства срезов применяли гематоксилин и эозин. Патоморфологические исследования сопровождались фотографированием участков с отклонением от нормы.
Диагноз ставили на основании эпизоотологических данных, характерной клинической картины, результатов патологоанатомических и гистологических исследований.
В третьей главе диссертационного исследования отражены результаты изучения заболеваемости кроликов по возрастным категориям. Нами было отмечено, что миксоматоз кроликов был наиболее распространен среди животных в возрасте 1 год, затем следуют возраста 5 - 6 месяцев и 10 - 11 месяцев.
При обзоре литературных данных и результатов собственных исследований в хозяйствах Саратовской области была установлена сезонная зависимость частоты встречаемости заболевания. Как следует из приведенных данных, пик заболеваемости миксоматозом в хозяйствах приходится на весенне-летний период и достигает 46,6 %, что, видимо, объясняется активизацией переносчиков - комаров и других гематофагов.
Возрастная характеристика поражения кроликов миксоматозом представлена на рисунке 1.
В третьей главе нами рассмотрены патоморфологические изменения у кроликов в условиях спонтанного заражения миксоматозом.
В настоящее время выявлен широкий диапазон тяжести течения заболевания в зависимости от вида и породы кроликов, штамма вируса. Миксоматоз, как заболевание, сопровождается рядом специфических изменений с вовлечением в процесс многих органов и систем (кожа, слизистые оболочки, паренхиматозные органы, головной мозг, иммунная система). Длительность инкубационного периода сильно варьируется, занимая в среднем от 2 до 20 дней. Болезнь может протекать в классической (острой) форме, характеризующейся появлением студенистых отеков на теле, и нодулярной (хронической) форме, при которой на теле появляются ограниченные опухоли. Здоровые животные заражаются при контакте с больными, так же вирус распространяют кровососущие насекомые (комары, блохи и вши, паразитирующие на кроликах).
Рисунок 1-Возрастная характеристика поражения кроликов миксоматозом
При обеих формах болезни первые признаки проявлялись как гиперемия в виде пятен или маленьких бугорков на коже кроликов, в основном в области век и на ушных раковинах. При остром течении болезнь продолжалась 5-6 дней, причем единственным признаком миксоматоза являлся отек в области головы, подгрудка, половых органов. Кролик принимал уродливую форму - распухшая голова, распухшие и опущенные уши («львиная голова») При более длительном течении острой формы заболевания,, кроме отеков, появлялся конъюнктивит, переходящий в гнойный блефароконъюнктивит, веки краснели, из глаз выделялся гнойно-фибринозный экссудат, который толстым слоем скапливался между веком и глазным яблоком. Иногда выделения были настолько обильными, что закрывали полностью глазные щели. Из носовой полости также выделялось гнойное содержимое, которое засыхало вокруг носовых отверстий в виде корочек. Дыхание было затрудненным.
При более длительном течении болезни кроме отеков возникал серозно-гнойный конъюнктивит, вызывавший отек век, из глаз выделялись вначале слизистые, а затем гнойные истечения, вызывавшие склеивание век - развивался двусторонний блефароконъюнктивит. Отмечали также гнойные истечения из носовой полости, затрудненное дыхание, хрипы в грудной полости. При нодулярной форме устанавливали множественные узелки размером от просяного зерна до голубиного яйца.
При вскрытии трупов обнаруживали студенистые инфильтраты в подкожной клетчатке туловища, шеи, головы, аногенитальной области и конечностей, пропитанные желтоватой жидкостью. Так же выявляли гиперемию, увеличение лимфатических узлов и селезенки. В легких в ряде случаях отмечали очаги воспаления и отек.
При гистологическом исследовании в клетках эпидермиса кожи и корневого влагалища волос наблюдали вакуолизацию цитоплазмы, цитоплазматические ацидофильные включения, кариолизис и кариорексис. В дерме и подкожной клетчатке выявляли серозный инфильтрат, эозинофилы и гистиоцитарные клетки, находящиеся частично в стадии деления (миксомные клетки), образующие рыхлую сетку, заполненную слизистой жидкостью. В цитоплазме этих клеток обнаруживали элементарные тельца. Более подробно результаты представлены в таблице 1 и рисунке 2.
Таблица 1- Характеристика патоморфологических процессов в органах кроликов в условиях спонтанного заражения миксоматозом
|
№ |
Изменения в органах кроликов в условиях спонтанного заражения миксоматозом |
Встречаемость (%) |
|
|
1 |
В головном мозге периваскулярные и перицеллюлярные отеки, вакуолизация вещества мозга и пролиферация глиальных клеток в коре. Фрагментация ядер нервных клеток, ложная нейронофагия и пылевидный распад тигроидного вещества. |
80 |
|
|
2 |
В спинном мозге вакуолизация вещества, ложная нейронофагия, пролиферация глиальных клеток, периваскулярные и перицеллюлярные отеки. |
75 |
|
|
3 |
В коже гистиоцитарные клетки и эозинофильные гранулоциты («миксомные клетки»). Вакуолизация цитоплазмы, серозная инфильтрация, гиперемия сосудов. |
95 |
|
|
4 |
В лимфоузлах некротические изменения, отек стромы, снижение содержания лимфоцитов. Увеличение количества макрофагов, гиперемия, эозинофильные гомогенные массы в краевых синусах. |
90 |
|
|
5 |
В селезенке гиперемия сосудов микроциркуляторного русла. Разрежение лимфоидной ткани фолликулов, отек ткани органа. Уменьшение размеров и числа фолликулов в поле зрения микроскопа. |
85 |
|
|
6 |
В миокарде разволокнение и зернистая дистрофия, гиперемия, периваскулярные отеки. Истончение и разволокнение миофибрилл. Разрастание соединительной ткани в периваскулярных и перицеллюлярных пространствах. Кровоизлияния между пучками мышечных волокон. |
80 |
|
|
7 |
В почках отеки, гиперемия, зернистая дистрофия эпителия канальцев. Эритроциты в клубочках и просвете канальцев, серозный гломерулонефрит, кровоизлияния между канальцами. |
75 |
|
|
8 |
В печени сосуды инъецированы кровью, периваскулярные пространства расширены и отечны. Балочная структура нарушена, гепатоциты находятся в состоянии от зернистой дистрофии до некроза и их распада. Некоторые группы гепатоцитов находятся в состоянии жировой дистрофии. Клеточная инфильтрация соединительно-тканной стромы печени и периваскулярных пространств. Кровоизлияния и разрастание соединительной ткани вокруг сосудов. |
80 |
|
|
9 |
В желудке кровоизлияния, гиперемия, отек и лимфоидная инфильтрация слизистой оболочки. |
75 |
|
|
10 |
В кишечнике гиперемия сосудов брыжейки, в тонком отделе очаговый катаральный энтерит: отек слизистого и подслизистого слоев, лимфоидная инфильтрация, кровоизлияния. В толстом отделе гиперемия сосудов, гиперплазия лимфоидной ткани, отек слизистого слоя, нарушение структуры слизистой оболочки. |
75 |
|
|
11 |
В щитовидной железе фолликулы чаще расположены компактно и заполнены коллоидом, границы фолликулов слабозаметные. Встречаются отеки и запустевшие фолликулы мелких размеров с неравномерным расположением коллоида. |
90 |
|
|
12 |
В легких очаговая бронхопневмония: кровоизлияния, катаральный экссудат, отек, гиперемия, утолщение стенок альвеол, периваскулярные отеки. Лимфоидная и эозинофильная инфильтрация межальвеолярных перегородок. |
90 |
Рисунок 2 - Характеристика патоморфологических процессов в органах кроликов в условиях спонтанного заражения миксоматозом
В третьей главе нами выявлены патоморфологические изменения у кроликов в условиях экспериментального заражения миксоматозом.
В ходе экспериментального исследования при вскрытии кроликов, убитых на 5 день, в месте введения суспензии обнаруживали покраснение кожи и выраженный отек. Кожа была сухая, шерсть тусклая, взъерошенная. При исследовании головного и спинного мозга отмечали дряблость мозгового вещества, гиперемию и отек мозговых оболочек, увеличение количества жидкости в желудочках мозга. Макроскопических изменений в иммунных органах не отмечалось. При микроскопическом исследовании головного и спинного мозга обнаруживали серозную инфильтрацию вещества мозга и отеки. При гистологическом исследовании селезенки, лимфатических узлов и тимуса отмечали незначительный отек и гиперемию. Более подробно результаты представлены в таблице 2 и рисунке 3.
При патологоанатомическом исследовании животных, убитых на 9 день выявлялись различного размера студенистые инфильтраты в подкожной клетчатке, а также диагностировался катаральный конъюнктивит и ринит. В головном мозге имели место гиперемия оболочек, отек вещества, неравномерное покраснение, сглаженность мозговых извилин, отдельные некротические участки и кровоизлияния. В спинном мозге отмечали гиперемию, отек и кровоизлияния. Гистологически было выявлено образование отдельных однородных круглоклеточных муфт вокруг кровеносных сосудов. Для органов иммунитета характерным являлись гиперемия и увеличение лимфатических узлов и селезенки. В тимусе изменений не выявлено. При гистологическом исследовании в лимфатических узлах и селезенке отмечалась гиперплазия с наличием серо-белых некротических очажков и кровоизлияний, в тимусе - незначительный отек стромы органа.
Таблица 2 - Характеристика патоморфологических процессов в органах кроликов в условиях экспериментального заражения миксоматозом на 5-й день
|
№ |
Изменения в органах кроликов в условиях экспериментального заражения миксоматозом на 5-й день |
Встречаемость (%) |
|
|
1 |
В головном мозге пролиферация глиальных клеток, гиперемия, периваскулярные отеки и лимфоидные скопления. Истинная нейронофагия, пылевидный распад тигроидного вещества |
85 |
|
|
2 |
В спинном мозге разрушение нервных клеток, ложная и истинная нейронофагия, вакуолизация вещества мозга, перицеллюлярные отеки. |
80 |
|
|
3 |
В коже гистиоцитарные клетки и эозинофильные гранулоциты, вакуолизация цитоплазмы, гиперемия сосудов, серозный инфильтрат. |
90 |
|
|
4 |
В лимфоузлах гиперемия и кровоизлияния, отек стромы и мякотных тяжей. Границы фолликулов не четкие, лимфоидных клеток мало. |
85 |
|
|
5 |
В селезенке отек стромы, угнетение лимфоидной ткани, периваскулярные отеки. |
90 |
|
|
6 |
В миокарде точечные кровоизлияния под эпикардом и гиперемия, диффузная зернистая дистрофия, периваскулярные отеки. |
80 |
|
|
7 |
В почках гиперемия, зернистая дистрофия и кровоизлияния, выраженный серозный гломерулонефрит. |
80 |
|
|
8 |
В печени нарушение балочной структуры, диапедезные кровоизлияния, микронекрозы, зернистая дистрофия. |
85 |
|
|
9 |
В желудке катаральный гастрит: лимфоидная инфильтрация слизистой оболочки, катаральный экссудат и отеки. |
75 |
|
|
10 |
В кишечнике в тонком отделе очаговый катаральный энтерит: гиперемия, отеки и лимфоидная инфильтрация слизистой оболочки. В толстом отделе гиперплазия лимфоидных фолликулов, отек слизистой оболочки, гиперемия и периваскулярные отеки. |
80 |
|
|
11 |
В щитовидной железе фолликулы расположены компактно, некоторые неравномерно заполнены коллоидом или запустевшие. |
90 |
|
|
12 |
В легких очаговая бронхопневмония: эритроциты, лимфоидный инфильтрат и катаральный экссудат в толще межальвеолярных перегородок, гиперемия сосудов. |
95 |
На 11 и 12 дни была зарегистрирована спонтанная гибель зараженных кроликов с клинической картиной, характерной для отечной (острой) формы течения миксоматоза. При вскрытии в головном и спинном мозге находили изменения, сходные с таковыми при исследовании животных, убитых на 9 день. При гистологическом исследовании отмечали образование скоплений однородных круглоклеточных муфт вокруг кровеносных сосудов. Клетки относились к лимфоцитарному ряду и располагались вокруг сосудов мозга. Нервные клетки были со значительными дистрофическими изменениями. Кроме того, наблюдалась пролиферация глии с образованием узелковых и диффузных скоплений.
Рисунок 3 - Характеристика патоморфологических процессов в органах кроликов в условиях экспериментального заражения миксоматозом на 5-й день
В спинном мозге отмечались сходные явления, с меньшей степенью их проявления. В мезентериальных лимфатических узлах и селезенке при вскрытии регистрировали изменения, характерные для геморрагического диатеза: паренхима органов набухшая, с признаками серозно-геморрагического воспаления, в строме - диапедезные точечные кровоизлияния. Тимус макроскопически оставался без изменений. Гистологически структура лимфатических узлов претерпевала существенные изменения, при этом отмечалось расширение просветов преимущественно краевых синусов. В них обнаруживали макрофаги, лимфоциты, эозинофильные гомогенные массы. В мозговом веществе плотность расположения лимфоцитов уменьшалась. Отмечался отек мякотных тяжей, увеличение количества макрофагов и снижение содержания лимфоцитов, усиление признаков миграции лимфоидных клеток через стенки венул и синусов, капилляры были полнокровны. В селезенке выявлялось увеличение числа клеток миелоидного ряда в красной пульпе, уменьшение размеров фолликулов и их числа в поле зрения микроскопа, в тимусе имело место разрежение лимфоидной ткани, уменьшение размеров долек, переполнение эритроцитами междольковых сосудов и отечные явления в строме органа. Более подробно результаты представлены в таблице 3 и рисунке 4.
Таблица 3 - Характеристика патоморфологических процессов в органах кроликов в условиях экспериментального заражения миксоматозом на 11- 12 день
|
№ |
Изменения в органах кроликов в условиях экспериментального заражения миксоматозом на 11- 12 день |
Встречаемость (%) |
|
|
1 |
В головном мозге гиперемия и кровоизлияния, пролиферация глиальных клеток, лимфоидные скопления в веществе мозга. Выраженные периваскулярные, перицеллюлярные отеки и вакуолизация вещества мозга. Истинная нейронофагия, микронекрозы и пылевидный распад тигроидного вещества. |
90 |
|
|
2 |
В спинном мозге периваскулярные, перицеллюлярные отеки, пролиферация эндотелия сосудов и глиальных клеток, вакуолизация вещества мозга. |
85 |
|
|
3 |
В коже гистиоцитарные клетки и эозинофильные гранулоциты («миксомные клетки»). Кариорексис. |
100 |
|
|
4 |
В лимфоузлах гиперемия мелких кровеносных сосудов, диапедезные кровоизлияния, неравномерное расположение лимфоцитов, отек стромы. |
95 |
|
|
5 |
В селезенке кровоизлияния, гиперемия, отсутствие сформированных фолликулов, отек стромы. |
90 |
|
|
6 |
В миокарде нарушение тинкториальных свойств, гиперемия, диффузная зернистая дистрофия, разволокнение, множественные кровоизлияния, отек. |
85 |
|
|
7 |
В почках скопления эритроцитов в клубочках, иногда значительные, диффузная зернистая дистрофия эпителия канальцев, кровоизлияния между канальцами. |
80 |
|
|
8 |
В печени гиперемия, кровоизлияния между гепатоцитами, парабиоз, утолщение и инфильтрация стенок сосудов. Очаговые некрозы, жировая и зернистая дистрофия гепатоцитов. |
90 |
|
|
9 |
В желудке набухание и покраснение складок, кровоизлияния в слизистой оболочке. Лимфоидный инфильтрат, «миксомные клетки» и катаральный экссудат между желез. |
80 |
|
|
10 |
В кишечнике в тонком отделе отек и лимфоидная инфильтрация слизистой оболочки, гиперемия, периваскулярные отеки. В толстом отделе умерено выраженная гиперемия и массовые кровоизлияния в стенке слепой кишки. Гиперплазия лимфоидных фолликулов, отек слизистой оболочки, периваскулярные отеки. |
75 |
|
|
11 |
В щитовидной железе фолликулы расположены компактно, некоторые неравномерно заполнены коллоидом или запустевшие. |
85 |
|
|
12 |
В легких гиперемия, кровоизлияния, очаговая бронхопневмония. Выраженная лимфоидная инфильтрация, крупноочаговые скопления катарального экссудата, отеки, кровоизлияния. |
95 |
На 12 день был проведен убой кроликов группы контроля. При исследовании кожи, подкожной клетчатки и внутренних органов, в частности, иммунной системы, головного и спинного мозга изменений, характерных для заболевания обнаружено не было.
В третьей главе мы рассмотрели дифференциальную патоморфологическую диагностику миксоматоза кроликов от сходных заболеваний.
Миксоматоз кроликов по своему клиническому проявлению может протекать сходно с такими инфекционными заболевания кроликов, как оспа, инфекционный фиброматоз (фиброма Шоупа), пастереллез, стафилококкоз, инфекционный папилломатоз (папиллома Шоупа), спирохетоз, инфекционный ринит, оральный папилломатоз и др.
Рисунок 4 - Характеристика патоморфологических процессов в органах кроликов в условиях экспериментального заражения миксоматозом на 11 - 12 день
Возбудителем оспы кроликов является Orthopoxvirus. Диагностика оспы кроликов базируется на учете эпизоотической ситуации, симптомов, характерных патологоанатомических и гистологических изменений, лабораторных методов исследований (серологические реакции, выделение и идентификация вируса). При подостром и хроническом течении оспы патологоанатомические изменения находят в сердечной мышце (дряблая, истончённая, сероватого цвета с мелкими кровоизлияниями, коронарные сосуды кровенаполнены), печени (тёмно-вишнёвого цвета, с участками некрозов, иногда с желтушным оттенком), селезёнке (сине-фиолетового цвета, несколько увеличена, пульпа плотная, с очажками некрозов), легких (милиарные узелки, некрозы), тогда как для миксоматоза подобные изменения несвойственны. В носовой полости отмечается слизистый или слизисто-гнойный экссудат. Патогномоничные изменения (оспины и диффузные многофокальные очаги отека и некроза) обнаруживают в коже, подкожной клетчатке и слизистых оболочках. Подкожная клетчатка, в отличие от миксоматоза, суховатая. При гистологическом исследовании в сердце выявляют набухание коллагеновых волокон и мембран сосудов, отек и диапедез эритроцитов в периваскулярных зонах, набухание волокон миокарда и отсутствие в них поперечной исчерченности. В печени обнаруживают множественные геморрагии, дискомплексацию клеточных балок, очаги коагуляционного некроза. В селезенке очажки некроза локализуются в фолликулах, которые имеют кровоизлияния, синусы наполнены лимфоцитами, трабекулы отечны. В легких на ранних стадиях болезни перибронхиальные лимфатические фолликулы гиперплазированы, позднее стенки бронхов инфильтрируются клеточными элементами, а иногда они некротизированы.