Материал: mikra_31_zanyatie_osen_32_itog

Культуральные свойства.

По типу дыхания риккетсии – аэробы.

Риккетсии являются облигатными внутриклеточными паразитами. Вследствие дефекта в энергетическом метаболизме – неспособность синтезировать НАД, полностью зависимы от своего хозяина и подобно вирусам не могут размножаться на искусственных питательных средах.

Поэтому их культивируют:

1. В желточном мешке 6-7 дневного куриного эмбриона (наиболее эффективен) – эмбрион погибает через 6–13 дней после заражения (в зависимости от дозы);

2. В организме лабораторных животных – к возбудителю сыпного тифа очень чувствительный морские свинки, которые обычно используются для первичного выделения риккетсий (у свинок через 1 неделю появляется лихорадка, у самцов – воспаление оболочек яичка, риккетсии выделяются из крови, селезёнки, почек, особенно их много в головном мозге);

3. В организме переносчиков (вши, клещи) – в 1964 г. А. В. Пшеничновым и его сотрудниками была предложена бесклеточная среда для культивирования риккетсий (заражение путем микроклизм, а также предложен метод эпидермомембран – заражение переносчиков кровью больного через пленку эпидермиса), сейчас применяется только для исследовательских целей.

4. В культуре клеток (менее удачная среда) – в мышиных и куриных фибробластах, культуре клеток почек обезьян и др. (с образованием через 8 – 10 дней бляшек диаметром ~1 мм);

Биохимическая активность. Биохимически не активны. Обладают гемолитическими свойствами в отношении эритроцитов кролика и барана.

Антигенная структура.

1. Группоспецифические антигены риккетсии – поверхностный термостабильный ЛПС клеточной стенки, отделяется при обработке эфиром. Выполняет роль эндотоксина

2. Видоспецифические антигены – например, у R. prowazekii выделяют более глубоко расположенный корпускулярный термолабильный белковополисахаридный комплекс, не растворяется в эфире.

3. Антигены ОХ2, 19, К – перекрестнореагирующие антигены с антигенами неподвижных штампов Proteus vulgaris (выявляются в реакции агглютинации Вейля-Феликса).

Токсины:

- у риккетсий, как и у всех грамотрицательный бактерий, имеется эндотоксин (ЛПС КС), который освобождается при разрушении. Пирогенное действие противостоит фагоцитозу быстрая миграция из фагосомы до слияния с лизосомой

- токсическая термолабильная белковая субстанция, обнаруженная в капсулоподобном слое, обладает свойствами экзотоксина.

Фосфолипаза 2 способствует проникновению

Эпидемический сыпной тиф (синонимы: вшивый, военный) – это острое инфекционное заболевание, вызываемое риккетсиями Провацека (Rickettia prowazekii), характеризующееся циклическим течением с лихорадкой, тяжелой интоксикацией, преимущественным поражением сосудистой и нервной систем, розеолезно-папулезной сыпью.

Эпидемический сыпной тиф – антропонозное заболевание.

Источник инфекции – больной сыпным тифом или болезнью Брилля.

Механизмы передачи инфекции:

*Трансмиссивный (путь – контаминационный: в момент укуса у вши происходит акт дефекации, и фекалии, содержащие возбудителя, попадают на кожу, при укусе вошь впрыскивает в кожу вещества, вызывающие зуд, расчёсывая место укуса, человек втирает фекалии в ранку от укуса или расчёсы кожи);

*Аэрогенный (путь – воздушно-пылевой: так как возбудитель сохраняется в сухих фекалиях вшей, однако данный путь имеет второстепенное значение).

Переносчики – платяные (чаще) и головные вши, которые инфицируются при кровососании больного.

Риккетсии размножаются в эпителии пищеварительного тракта вши, а через 4-7 дней в зависимости от окружающей температуры появляются в фекалиях вши. Вошь заразна до момента своей гибели от риккетсиоза, то есть не более 2 недель. Поскольку риккетсии не обнаруживаются в слюнных железах, то заражение здорового человека не может происходить при укусе вошью. У человека вош в эндотелии сосудов мелких капиллярах

Вши очень чувствительны к температурному режиму и поэтому быстро покидают заболевших с высокой температурой тела и умерших, переползая на здоровых людей.

Механизм развития сыпного тифа может быть представлен следующими фазами:

1. Внедрение риккетсий в организм и адгезия на холестерин-содержащих клеточных рецепторах эндотелия сосудов, проникновение в клетки путём рецепторного эндоцитоза и размножение.

2. Разрушение клеток эндотелия и поступление риккетсий в кровь – риккетсиемия и токсемия (начало клинических проявлений болезни). Разрушение за счет образования тромбов. Появление сипи по коже мелких капиллярах подкожно жировой клетчатке тоже самое и в паренхиматозных органах. Клинически температура, потеря сознания или спутанность сознания, галяцинации и бред слабость, головные боли

3. Поражение мелких сосудов во всех органах, с замедлением тока крови, с образованием тромбов и специфических гранулём (особенно опасны тромбы сосудов головного мозга), на кожных покровах появляется розеолезно-петехиальная сыпь;

4. Активизация защитных сил организма, выздоровление.

Специфическая профилактика – живая комбинированная ассоциированная вакцина (ЖКСВЕ). Содержит ослабленные невирулентные высущенные штаммы тифозные с растворимым антигеном вирулентного штамма рикетсий провачека.

Rickettia typhi - возбудитель эндемического (крысиного, блошино­го) сыпного тифа .По морфологии и биологическим свойствам R. typhi сходны с R. prowazekii, имеют об­щие антигены. Дифференцируют их по видоспецифическому антигену. Заболевание зоонозное. Источником инфекции являются грызуны - крысы, мыши, у которых риккетсии выделяются с мочой. Основным переносчиком являются блохи, которые выделяют риккетсии с исп­ражнениями, а также клещи.

Заражение человека происходит через пищу, зараженную мочой больных грызунов, или при втирании в кожу инфицированных фека­лий блох или через воздух. Возможно заражение при укусе инфицированными клещами. Течение заболевания более легкое, чем при эпидемическом сыпном тифе. После перенесенного заболевания остается невосприимчивость. Для диагностики используют серологи­ческие методы: ставят РСК и ИФА со специфическими антигенами. Для этиотропного лечения применяют тетрациклин. Больной эндеми­ческим блошиным тифом незаразен для окружающих, и госпитализа­ция его не обязательна.

Серодиагностика сыпного тифа: какие реакции ставятся и какие антигены для их постановки используются? Какие серологические реакции используются для отличия текущего заболевания от перенесённого в прошлом (анамнестического)?

Серологический метод диагностики с целью определения уровня сыпнотифозных антител и динамики их нарастания в сыворотке крови больных с подозрением на сыпной тиф является ведущим в лабораторной диагностике этой инфекции. Применяется РСК (диагностический титр 1:20), РА с диагностикумами из риккетсий Провачека (диагностический титр 1:160) , РНГА, не-прямая РИФ. Диагностическое значение имеет 4-кратное нарастание титра антител в парных сы-воротках. РСК позволяет диагностировать как активную форму болезни, так и перенесенную в прошлом (ретроспективный диагноз), дифференцировать эпидемический и эндемический (крысиный) сыпной тиф, а также первичный сыпной тиф от болезни Брилля - Цинссера (рецидива). Культуральные не используютяс

Что такое болезнь Брилля? Как с помощью серологических методов дифференцировать болезнь Брилля от первичного сыпного тифа?

Болезнь Брилля-Цинссера - рецидивная форма сыпного тифа, выз­ванная риккетсиями Провацека, сохранившимися в организме после перенесенного заболевания. Рецидив может наступить через много лет после первичной инфекции. Среди больных преобладают люди стар­шего возраста. По смотреть на наличие педикулеза, расчесов и в анамнезе посмотреть или спросить. Клиническое течение болезни более легкое.

Лабораторная диагностика. Культивирование риккетсии техничес­ки сложно. В практических лабораториях используют серологический метод - обнаружение антител в сыворотке крови больных с помощью РСК, РПГА, ИФА, реакции агглютинации риккетсии (РАР). У неко­торых больных положительной бывает только одна из серологических проб, поэтому целесообразно ставить несколько реакций, обычно РСК и РНГА. Антитела обнаруживаются с 6-7 дня болезни.

Дифференциальная диагностика первичного сыпного тифа и болезни Брилля-Цинссера основана на особенности вторичного иммун­ного ответа: при первичном сыпном тифе сначала образуются IgM, при болезни Брилля-Цинссера - с самого начала IgG.

Возбудитель Ку-лихорадки: название по–латыни, морфология и физиология, устойчивость во внешней среде, отличия в антигенном отношении от других риккетсий.

Возбудитель Ку-лихорадки - Coxiella burnetii. Заболевание впер­вые описал Е.Г. Деррик в 1937 г. в Австралии и назвал Q-febris (англ, «query» - неясный) и выделил возбудителя, риккетсиозную природу ко­торого определили Ф. Бернет и М. Фриман.

Морфология, биологические свойства. Coxiella burnetii - мелкие кок­ковидные или палочковидные риккетсии, неподвижные, грамотрица-тельные, окрашиваются по Романовскому-Гимза в красный цвет. Способны к образованию L-форм. Облигатные внутриклеточные парази­ты. Культивируются в желточном мешке куриного эмбриона или в куль­туре клеток. Полиморфизм коковидные и палочковидные чаще короткие палочки Более устойчивы во нешней среде, могут длительно сохраняться при низких температурах на продуктах питания и во внешней среде.

Антигены. У них нет общих антигенов с другими риккетсиями. В связи с содержанием 3полисахаридов. Об­ладают фазовой изменчивостью: у больных в РСК антитела к анти­генам I фазы поверхностые антигены полисахариды обнаруживаются в период реконвалесценции( хроническая форма), а II фазы – внутренние в ранний период болезни ( острая форма) .

Устойчивость. К факторам внешней среды более устойчивы, чем другие риккетсии. В свежем мясе при 4°С сохраняются до 30 дней, в стерильном молоке до 4 мес. При кипячении погибают только через 10 мин. Устойчивы к действию желудочного сока. В 1%-ном растворе фе­нола погибают через сутки, в 0,5%-ном растворе хлорамина - через 4 суток.

Ку-лихорадка: источники инфекции, пути передачи, распространение.

Ку-лихорадка - природно-очаговая ин­фекция с разнообразными путями передачи. Источниками инфек­ции являются домашние животные, грызуны. Возбудитель передает­ся через молоко, через предметы, зараженные мочой и испражнени­ями больных животных, а также при укусах инфицированных кле­щей, которые выделяют риккетсии Бернета с фекалиями при кровососании. Заражение может произойти при обработке шерсти, кожи зараженных животных и при уходе за ними.

Заражения здорового человека от больного не наблюдается. Ин­кубационный период длится от 3 до 30 дней. Заболевание чаще всего протекает как пневмония.

Лихорадка Ку - КРС МРС, лошади зооноз сельскохозяйственных животных с длительным и самостоятельным характером существования очагов (как при бруцеллёзе). Характеризуется множественностью источников (прежде всего – пуховые козы, овцы, крупный рогатый скот, меньше - птицы) и факторов передачи инфекции клещи (молоко, мясо, шкуры, вода, солома, пыль и др.). Возбудитель в большом количестве содержится в плаценте и выделяется при родах (окоте, отёле) с околоплодной жидкостью, с молоком, с экскрементами животных. Коксиеллами инфицируется шерсть и пух животных, среда их обитания. Возбудитель обладает очень высокой устойчивостью во внешней среде. У животных в околоплодных водах и от попадая во внешнюю среду при аэрозоле вдыхании происход заражени

Ведущее значение имеют трансмиссивно при укусе аэрогенный алиментарный через мырое мясо молоко контактный пути передачи, Протекает лихорадка, повышение температуры, гепатолиенальным синдромом и эндокардитом бронхит превмания в первую очередь поражаются верхниедыхательные пути а также транспортируясь по крове печень селезенка. Возбудитель характеризуется высокой экологической пластичностью и широким кругом позвоночных и беспозвоночных хозяев (сельскохозяйственные и дикие животные, иксодовые клещи).

Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика Ку-лихорадки.

Для лабораторной диагностики этого риккетсиоза применяют серологический метод (РА, РСК), в некоторых случаях - непрямую РИФ, биологическую и кожно-аллергическую пробы.

Серологический метод является основным в лабораторной диагностике Ку-лихорадки. Серологические реакции (РА и РСК) для определения антител к Coxiella burnetii в парных пробах сыворотки крови больных Ку-лихорадкой ставят с антигенами I фазы (иммуногенный ЛПС) и II фазы (малоиммуногенный антиген) возбудителя. Диагностический титр 1:4.

Аллергодиагностика. Кожную аллергическую пробу проводят по обычной методике (0,1 мл аллергена внутрикожно), используя в качестве аллергена растворимый антиген из риккетсий Бернета I фазы, автоклавированную культуру коксиелл или ЛПС I фазы. Результаты пробы учитывают через 24-48 ч по наличию и размерам инфильтрата, гиперемии, отека. Проба специфична, но пригодна только для ретроспективной диагностики. У переболевших она остается положительной в течение 10 лет.

Биопроба - внутрибрюшинное или интратестикулярное (в толщу яичек) заражение исследуемым материалом морских свинок самцов, куриных эмбрионов в желточный мешок. Обнаружение риккетсий осуществляется в мазках-отпечатках внутренних органов, окрашенных по Романовскому-Гимзе или Здродовскому. В настоящее биопроба в реальной практике не используется в связи с внедрением культур тканей для культивирования и выделения риккетсий.

Хламидии: общая характеристика, классификация; особенности физиологии, способы культивирования.

Хламидии представляют собой мелкие сферические организмы в диаметре 0,2-1,5 мкм, грамотрицательные. Клеточная стенка сходна по строению со стенками грамотрицательных бактерий, но лишена пептидогликана. Хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе в голубой или фиолетовый цвета. Споры не образуют, жгутики, капсулу не имеют. Внутриклеточно образуют микроколонии, окутанные капсулоподобным слоем – мантией, «хламидой» (от греч. сhlamydos – плащ). Размножаются бинарным делением. Могут образовывать L-формы и самопроизвольно возвращаться к исходным Хламидии выделены в самостоятельный порядок из-за уникального, отличающего их от всех прочих бактерий внутриклеточного цикла развития. Хламидии неспособны сами производить энергию, так как не имеют собственных митохондрий и живут за счёт энергии клетки хозяина, которую они инфицировали.

Жизненный цикл хламидий включает образование трех форм:

1. Элементарные тельца (ЭТ) – это зрелая форма, адаптированная к внеклеточному существованию, представляют собой небольшие частицы размером 0,2-0,4 мкм, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет. ЭТ высокоинфекционны, ответственны за процесс прикрепления к клетке-мишени и проникновение в неё, устойчивы к неблагоприятным факторам внешней среды. В клетке располагаются в межклеточном пространстве. Выполняют вирулентную функцию.

2. Ретикулярные тельца (РТ) (=инициальные тельца) – представляют собой внутриклеточные репродуктивные формы размером 0,8-1,5 мкм, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в голубоватый цвет. РТ мало инфекционны, являются формой обеспечения репродукции микроорганизма.

3. Созревание РТ в ЭТ происходит через переходные формы – промежуточные тельца.

Цикл развития условно можно разделить на несколько этапов:

1. Абсорбция элементарного тельца хламидий на чувствительной клетке хозяина.

2. Проникновение ЭТ в клетку путём эндоцитоза. Участки плазмолеммы с адсорбированными на них ЭТ инвагинируются в цитоплазму с образованием фагоцитарных вакуолей (этот этап занимает 7-10 часов).

3. Реорганизация элементарного тельца в РТ, способные к росту и делению (этот этап длится 6-8 часов).

4. Деление ретикулярного тельца. Эти внутриклеточные формы, представляющие собой микроколонии, называются хламидийными включениями – тельцами Гальберштедтера-Провацека. Во включении может содержаться от 100 до 500 РТ хламидий (длительность 18-24 часа).

5. Созревание РТ в ЭТ в течение 36-42 часов через переходные формы (промежуточные тельца).