Материал: И Занятие 7. Иммунные реакции

Иммунология. Занятие №7. Иммунные реакции

1. Серологические реакции – понятие, свойства, применение

Серологические реакции – это реакции, в которых участвуют антигены и антитела.

Общее правило: по известному а/г определяют неизвестные а/т, или, наоборот, по известным а/т определяют неизвестный а/г.

(Известные антитела в иммунных сыворотках. Известные антигены – диагностикумы)

Свойства серологических реакций: строго специфичны и высоко чувствительны.

Применение:

• Диагностика– обнаружение в сыворотке крови больного АТ против АГ возбудителя с помощтю диагностикумов, чтобы поставить диагноз (серологическая диагностика).

• Идентификация антигенов возбудителя, определение его вида и серовара с помощью иммунных сывороток (серологическая идентификация).

К серологическим относят реакции:

- агглютинации (РА);

- преципитации (РП);

- связывания комплемента (РСК);

- иммуноблотинг;

- нейтрализации;

- с использованием меченых антител и антигенов, реакция иммунофлюоресценции, иммуноферментный и радиоиммунный методы.

2. Реакция агглютинации – определение, компоненты, применение.

Реакция агглютинации (РА) – склеивание антигенов под действием антител в присутствии электролита (например, изотонического р-ра NaCl).

АГ имеет корпускулярную природу (эритроцит, бактериальная клетка и др.)

* например, при бруцеллезе (реакция Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (р.Видаля), туляремии, коклюше.

3. С тадии реакции агглютинации, учёт результатов (о-, н-агглютинация)

1 стадия: Специфическая (невидимая) – связывание активного центра АТ с детерминантой антигена.

2 стадия: Неспецифическая (видимая) – выпадение образовавшегося комплекса в осадок. Более медленная, требует наличия определенных условий (электролит, оптимальная pH среды).

Внешние проявления ра

• Мелкодисперсная агглютинация (О-агглютинация) иногда видима только в агглютиноскоп или микроскоп – реакция микроагглютинации компактный, плотный осадок

(О-диганостикум содержит бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген)

• Крупнохлопчатая (Н-агглютинация) при агглютинации бактерий со жгутиками. Протекает быстрее.

(Н-диагностикум содержит бактерии, убитые формалином, сохранившие термолабильный жгутиковый H-антиген)

4. Способы постановки реакции агглютинации – ориентировочная и развернутая. Титр реакции агглютинации.

Способы постановки:

1. Ориентировочная

Чаще используют для идентификации антигена (серотипирование возбудителя).

На одной половине предметного стекла к капле агглютинина в разведении 1:10 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больного, и покачивают в течение 2-3 минут.

Контроль – вместо сыворотки капля физ раствора на др. половине стекла.

2. Развернутая (р-я Видаля, Грубера)

Проводят в пробирках (объемная РА). Используется для обнаружения антител и определения их количества (титра).

Титр реакции агглютинации – наибольшее разведение сыворотки, вызвавшее + реакцию агглютинации.

П оследовательное разведение сыворотки крови больного в ряду пробирок физраствором. Добавляют диагностикум, около 2 часов инкубируют в термостате при 37 ⁰С, оставляют на сутки при комнатной температуре, определяют титр реакции.

Повторение через 5-7 дней позволяет выявить нарастание титра антител у больного человека (метод парных сывороток).

• Разные родственные бактерии могут агглютинироваться с одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыворотками, из которых удалены перекрёстно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактерий. Т.е. в этих сыворотках есть антитела, которые специфичны только к данной бактерии.

5. Варианты реакции агглютинации.

• Прямая реакция геммаглютинации

• НЕ ОТНОСИТСЯ К СЕРОЛОГИЧЕСКИМ, т.к. нет участия иммунной сыворотки.

• Склеивание эритроцитов при адсорбции на них определенных АГ (например, вирусов).

• Непрямая (пассивная) реакция гемагглютинации (РНГА, РПГА)

В ыявление антител с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума – эритроциты с адсорбированнными на них антигенами.

+ реакция: выпадение эритроцитов в осадок в виде «зонтика»; надосадочная жидкость прозрачная; если встряхнуть, то осадок не поднимется.

– реакция: осадок в виде маленького диска или «пуговки» в центре дна пробирки; надосадочная жидкость мутная.

Применяется для выявления поверхностных АГ микробов и эритроцитов и АТ к ним.

Применяется для диагностики инф.заболеваний, определения ХГЧ в моче для установления беременности, выявления гиперчувствительности к лек.препаратам, гормонам и в др. случаях.

+ Реакция обратной непрямой агглютинации (РОНГА): выявление антигена с помощью антительного эритроцитарного диагностикума – эритроцитов с адсорбированными на них антителами. Учет результатов как в РНГА.

• Реакция торможения агглютинации (РТГА)

Основана на подавлении антигенов вирусов антителами иммунной сыворотки

• Вирусы теряют способность агглютинировать эритроциты.

И спользуют для диагностики вирусных инфекций, возбудители которых способны агглютинировать эритроциты (грипп, корь, краснуха, клещевой энцефалит и др.)

NB!!!

+ реакция: осадок в виде «пуговки»

- реакция: осадок в виде «зонтика»

• Р еакция коагглютинации

Возбудителя определяют с помощью стафилококков*, обработанных иммунной диагностической сывороткой.

*Стафилококки содержат белок А, имеющий сродство к Fc-фрагменту иммуноглобуинов

• Определяют АГ с помощью АТ, адсорбированных на стафилококках.

• Эти АТ взаимодействуют с соответствующими микробами, выделенными от больных.

• В результате РКА образуются хлопья, состоящие из стафилококков, АТ и определяемых микробов

• Реакция латекс-агглютинации (РЛА)

• Частицы полистерольного латекса служат носителями АГ.

• Латексные частицы выполняют роль искуственных эритроцитов, но более устойчивы к внешним воздействиям, чем стафилококки.

Ревматоидный фактор – аутоантитела анти-IgG (к Fc-фрагменту IgG), относящиеся к классу IgM. В сыворотке ревматоидный фактор присутствует в виде комплекса с IgG. В высоком титре ревматоидный фактор выявляется в крови у 80% больных с прогрессирующим ревматоидным артритом.

• Реакция Кумбса

Для выявления неполных АТ (одновалентных), например, антирезусных (Rh+).

• В систему антирезусные АТ +резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку.

• Это вызывает агглютинацию эритроцитов.

• Используют при гемолитической болезни новорожденных.

6. Реакция преципитации – определение, компоненты, применение.

Реакция преципитации (РП) - осаждение антигена под воздействием специфических антител в растворе электролита.

Компоненты:

• Преципитин – антитело, участвующее в РП

• Преципитиноген – антиген, участвующий в РП

• Преципитат – иммунный комплекс (осадок), образующийся в результате РП

Применение РП:

• Диагностика инфекционных заболеваний (менингококковые инф., полиомиелит, сибирская язва, малярия, гепатит В и т.п.)

• Судебная медицинская экспертиза: определение видовой принадлежности белков – при анализе кровавых пятен, спермы и т.п.

• Санитарная практика

• Выявление фальсификации рыбных и мясных изделий

7. С пособы постановки реакции преципитации.

• Кольцепреципитация (в пробирке)

На иммунную сыворотку наслаивают растворимый АГ.

+ реакция: на границе растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата

• Реакция термопреципитации

АГ получают кипячением и фильтацией водного экстракта органов или тканей (реакция Асколи – сибирская язва)

• Реакция флоккуляции (по Рамону)

В качестве АГ участвует токсин или анатоксин.

Н а границе между АГ и АТ помутнение в виде «облака».

Применяют для определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина.

Наиболее интенсивная и ранняя (инициальная) флоккуляция в пробирке, где АГ и АТ в эквивалентных соотношениях.

• Реакция преципитации в геле

• Радиальная иммунодиффузия по Манчини

В агаровом геле с иммунной сывороткой делают лунки, в них помеают антиген, он диффундирует в гель.

Антиген в геле образует с АТ кольца преципитации вокруг лунок.

• Встречная иммунодиффузия по Оухтерлони

В лунки раздельно помещают АГ и АТ. Они диффундируют в агар, навстречу друг другу. Между ними образуются полосы - «усы» преципитации.

В многокомпонентных системах появляется несколько линий преципитата:

- у идентичных АГ – линии сливаются

- у неидентичных АГ – линии пересекаются

8. Реакция связывания комплемента – компоненты, фазы, применение.

Основана на активации комплемента комплексом АГ-АТ

Применяют для диагностики многих инфекционных заболеваний, в частности сифилиса (реакция Вассермана).

Фазы реакции:

• 1 фаза: инкубация смеси трёх компонентов: антиген+антитело+комплемент

• 2 Фаза (индикаторная):